Antigenicity of the purified recomb

Antigenicity of the purified recombinant MMP-like protein
by immunoblotting. The purified and rEK-cleaved MMP-like
fusion-tagged proteins were electrophoresed on a 10% sodium
dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE)
as described by Laemmli,31 and then transferred to a
nitrocellulose membrane32 that was cut into strips for immunoblotting.
The purified fusion-tagged protein was detected by a
reaction with an anti-NusA mouse monoclonal antibody
(Novagen), according to the manufacturer’s protocol. Briefly,
after blocking the membrane strips with (3%) bovine serum
albumin (BSA) in phosphate buffered saline (PBS, pH 7.5)
incubating with an anti- NusA antibody, and then probing with
horseradish peroxidase (HRP)-labeled goat anti-mouse IgG
(Santa Cruz Biotechnology, Inc., Santa Cruz, CA), the reaction
was visualized with 3,3¢-diaminobenzidine tetrahydrochloride
(DAB) substrate. For demonstration of antigenicity of the
cleaved recombinant MMP-like protein, the reaction was
probed with a 1:100 diluted pooled sera of gnathostomiasis
patients or pooled negative control sera (in 1% skimmed milk
in PBS, pH 7.5) absorbed with E. coli lysate for 2 hours at room
temperature. The membranes were washed with 1% skimmed
milk in PBS, pH 7.5, containing 0.1% Tween-20 (PBST)
(5 times), and incubated with goat anti-human IgG(H+L)HRP
conjugate (Invitrogen) at a dilution of 1:4,000 (in 1% skimmed
milk in PBST) for 2 hours at room temperature. After 5 washes
with 1% skimmed milk in PBST, the strips were then developed
with DAB substrate, and the reaction stopped with distilled
water.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Antigenicity วททชบริสุทธิ์ MMP เหมือนโปรตีนโดย immunoblotting ที่บริสุทธิ์ และ แหวก rEK MMP เหมือนแท็กฟิวชั่นโปรตีนถูก electrophoresed ในโซเดียม 10%dodecyl electrophoresis เจ polyacrylamide ซัลเฟต (SDSPAGE)เป็นโดย Laemmli, 31 แล้ว โอนย้ายไปmembrane32 nitrocellulose ที่ถูกตัดเป็นแถบ immunoblottingพบแท็กฟิวชั่นโปรตีนบริสุทธิ์โดยการปฏิกิริยากับการต่อต้านนูเมาส์ monoclonal แอนติบอดี(Novagen), ตามโพรโทคอลของบริษัทผู้ผลิต สั้น ๆหลังจากที่บล็อกเมมเบรนแถบ ด้วยเซรั่มวัว (3%)albumin (บีเอสเอ) ในฟอสเฟต buffered น้ำเกลือ (PBS, pH 7.5)incubating กับแอนติบอดีที่ต่อต้านนู และอาศัยแล้ว ด้วยhorseradish peroxidase (HRP) -ป้ายครีมป้องกันเมาส์ IgG(ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ Inc. ซานตาครูซ CA), ปฏิกิริยามี visualized กับ 3,3 เลข diaminobenzidine tetrahydrochlorideพื้นผิว (เล็กน้อย) สำหรับสาธิต antigenicity ของแหวกวททช MMP เช่นโปรตีน มีปฏิกิริยาพิสูจน์กับนโยบายรวมของ gnathostomiasis ทำให้เจือจางเป็น 1: 100ผู้ป่วยหรือจะควบคุมรวมติดลบ (ในนมขาดมันเนย 1%ใน PBS, pH 7.5) ป้วน coli E. ที่ lysate 2 ชั่วโมงห้องอุณหภูมิ สารถูกล้างเอา% 1นมใน PBS, pH 7.5 ประกอบด้วย 0.1% Tween-20 (PBST)(5 ครั้ง), และ incubated กับแพะป้องกันมนุษย์ IgG (H + L) HRPสังยุค (Invitrogen) ที่เจือจางของ 1:4,000 (ใน 1% เอานมใน PBST) 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก 5 washesกับนมขาดมันเนย 1% ใน PBST แถบอยู่แล้วพัฒนามีพื้นผิวเล็กน้อย และปฏิกิริยาหยุดกับกลั่นน้ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

antigenicity ของบริสุทธิ์ recombinant MMP-เช่นโปรตีน
โดย immunoblotting MMP เหมือนบริสุทธิ์และ Rek-แยก
โปรตีนฟิวชั่นที่ติดแท็กได้ electrophoresed ที่ 10% โซเดียม
electrophoresis เจลโดเดซิลซัลเฟต polyacrylamide (SDSPAGE)
ตามที่อธิบาย Laemmli, 31 และจากนั้นโอนไปยัง
membrane32 ไนโตรเซลลูโลสที่ถูกตัดเป็นเส้นสำหรับ immunoblotting
โปรตีนฟิวชั่นที่ติดแท็กบริสุทธิ์ถูกตรวจพบโดย
ทำปฏิกิริยากับโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้าน NUSA เมาส์
(Novagen) ตามโปรโตคอลของผู้ผลิต ชั่วครู่
หลังจากการปิดกั้นแผ่นเมมเบรนที่มี (3%) วัวซีรั่ม
อัลบูมิ (BSA) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอสพีเอช 7.5)
บ่มกับแอนติบอดี NUSA ป้องกันและละเอียดกับ
มะรุม peroxidase (HRP) -labeled แพะป้องกัน เมาส์ IgG
(ซานตาครูซเทคโนโลยีชีวภาพ, Inc, ซานตาครูซ, CA) ปฏิกิริยา
ได้รับการมองเห็นด้วย 3,3 ¢ tetrahydrochloride -diaminobenzidine
(DAB) พื้นผิว สำหรับการสาธิตของ antigenicity ของ
cleaved recombinant MMP เหมือนโปรตีนปฏิกิริยาได้รับ
การตรวจสอบกับ 1: 100 เจือจางซีรั่มรวบรวมของ Gnathostomiasis
ผู้ป่วยหรือ pooled ซีรั่มควบคุมเชิงลบ (ใน 1% นมไขมันต่ำ
ในพีบีเอสพีเอช 7.5) การดูดซึมที่มีเชื้อ E. coli lysate 2 ชั่วโมงที่ห้อง
อุณหภูมิ เยื่อหุ้มถูกล้างด้วย 1% ไขมันต่ำ
นมในพีบีเอสพีเอช 7.5 ที่มี 0.1% Tween-20 (PBST)
(5 ครั้ง) และบ่มกับแพะต่อต้านมนุษย์ IgG (H + L) HRP
คอนจูเกต (Invitrogen) ที่เจือจาง 1: 4,000 (1% ไขมันต่ำ
นมใน PBST) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก 5 ล้าง
ด้วย 1% นมไขมันต่ำใน PBST แถบได้รับการพัฒนาแล้ว
มีป้ายพื้นผิวและปฏิกิริยาหยุดกลั่น
น้ำ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เจื้อยของรีคอมบิแนนท์โปรตีนบริสุทธิ์อื่น เช่น
แพง . และของบริสุทธิ์รักอื่นชอบ
ฟิวชั่นแท็กโปรตีนเป็น electrophoresed บน 10% โซเดียมโดเดซิลซัลเฟตโพลีอะคริลาไมด์เจลอิเลคโตรโฟรีซีส (

sdspage ) ตามที่อธิบายไว้โดย laemmli , 31 และจากนั้นโอนไปยัง
ไนโตร membrane32 ที่ถูกตัดเป็นแผ่นสำหรับ
Lines .และฟิวชั่นแท็กโปรตีนถูกตรวจพบโดย
ปฏิกิริยากับโมโนโคลนอลแอนติบอดีต่อต้านนูเมาส์
( novagen ) ตามขั้นตอนของผู้ผลิต สั้น ๆ ,
หลังจากการปิดกั้นเยื่อแผ่นด้วย ( 3% ) และเซรั่ม
อัลบูมิน ( BSA ) ในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS , pH 7.5 )
เพาะกับ anti - นูแอนติบอดี และละเอียดด้วย
มะรุม เปอร์ออกซิเดส ( HRP ) - ป้ายแพะป้องกันเมาส์ IgG
( Santa Cruz ) , อิงค์ , ซานตาครูซ , CA ) ปฏิกิริยา
เป็นปรากฏการณ์ที่มีค่าความจริง diaminobenzidine สำหรับ tetrahydrochloride
( DAB ) สาร สำหรับการสาธิตของเจื้อยของ
เป็น recombinant โปรตีนอื่น เช่น ปฏิกิริยาคือ
เมื่อกับ 100 รวมของ 1
( เจือจางผู้ป่วยหรือ pooled เซราควบคุมเชิงลบ ( ใน 1 % นม
ใน PBS , pH 7.5 ) ดูดซึมกับ E . coli lysate ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง

เยื่อหุ้มอยู่ซัก 1 %
นม skimmed ใน PBS , pH 7.5 , ที่ประกอบด้วย 0.1% tween-20 ( pbst )
( 5 ครั้ง ) และแยกแพะต่อต้านมนุษย์ IgG ( H l )
) ช ( Invitrogen ) ที่เจือจาง 1:4000 ( skimmed
% 1นมใน pbst ) เป็นเวลา 2 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก 5 ถล่ม
1 % นมใน pbst , รางแล้วพัฒนา
กับป้ายพื้นผิวและปฏิกิริยาหยุด
กลั่นน้ำ