AGGLUTINATION TESTS and IMMUNOASSYS

AGGLUTINATION TESTS and IMMUNOASSYS
1. SerologyAGGLUTINATION TESTS and IMMUNOASSYS BASICS Dr.T.V.Rao MD
2. Methods for Ag-Ab detection• Precipitation• Agglutination• Hemagglutination and Hemagglutination inhibition• Viral neutralization test• Radio-immunoassays• ELISA• Immunofluorescence• Immmunoblotting• Immunochromatography 1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 2
3. Agglutination• Agglutinins – Antibodies that produce such reactions• Involves two-step process: – Sensitization or initial binding – Lattice formation or formation of large aggregates1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 3
4. Agglutination• Types of particles that participate in such reactions: –Erythrocytes –Bacterial cells –Inert carriers such as latex particles1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 4
5. Agglutination tests• Antibodies can agglutinate multivalent particulate antigens, such as Red Blood Cells (RBCs) or bacteria• Some viruses also have the ability to agglutinate with RBCs.• This behavior is called agglutination.• Serological tests based on agglutination are usually more sensitive than those based on precipitation1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 5
6. Examples• Slide Agglutination Test• Plate Agglutination Test• Tube Agglutination Test• Passive Agglutination Test• Microscopic Agglutination Test• Haemagglutination test (HAT)1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 6
7. Steps in Agglutination• Primary phenomenon (SENSITIZATION)  First reaction involving Ag-Ab combination  Single antigenic determinant on the surface particle 1) Initial reaction: rapid and reversible 2) Cross link formation  visible aggregates (stabilization)1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 7
8. Secondary phenomenon:LATTICE FORMATION – Ab + multivalent Ag  stable network (visible reaction) – conc. of Ag and Ab – Governed by physiochemical factors: • Ionic strength of milieu • pH • temperature1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 8
9. Secondary Phenomenon • Lattice Formation • The Fab portion of the Ig molecule attaches to antigens on 2 adjacent cells-visible results in agglutination • If both antigen and antibody are SOLUBLE reaction will become visible over time, ie, precipitation1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 9
10. DIRECT AGGLUTINATION- Test patient serum against large, cellular antigens to screen for the presence of antibodies.• Antigen is naturally present on the surface of the cells.• In this case, the Ag-Ab reaction forms an agglutination, which is directly visible.1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การทดสอบมูกและ IMMUNOASSYS1. MD Dr.T.V.Rao พื้นฐานการทดสอบ SerologyAGGLUTINATION และ IMMUNOASSYS2. วิธีการสำหรับ Ag Ab detection• Precipitation• Agglutination• Hemagglutination และ Hemagglutination inhibition• ไวรัสวางตัวเป็นกลาง test• วิทยุ-immunoassays• ELISA• Immunofluorescence• Immmunoblotting• Immunochromatography Dr.T.V.Rao MD 2 1/11/20133. Agglutination• Agglutinins – แอนติบอดีที่ผลิตเช่น reactions• Involves สองขั้นตอน: –ใชเสพติดหรือผูกต้น – ตาข่ายก่อตัวหรือการก่อตัวของใหญ่ aggregates1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 34. Agglutination• ชนิดของอนุภาคที่เข้าร่วมในปฏิกิริยาดังกล่าว: – เม็ดเลือดแดง – แบคทีเรียเซลล์ – ผู้เฉื่อยเช่นยาง particles1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 45. tests• มูกแอนติบอดีสามารถ agglutinate แอนติเจนของเขม่า multivalent เช่นเซลล์เม็ดเลือดแดง (เม็ด) หรือ bacteria• ไวรัสบางตัวยังมีความสามารถในการ agglutinate กับเม็ด. •ลักษณะเช่นนี้เรียกว่ามูก. การทดสอบทางวิทยา•อิงมูกมีมักจะมีความสำคัญกว่าอิง Dr.T.V.Rao MD 5 precipitation1/11/20136. Examples• ภาพนิ่งมูก Test• แผ่นมูก Test• หลอดมูก Test• แฝงมูก Test• กล้องจุลทรรศน์มูก Test• Haemagglutination ทดสอบ (หมวก) 1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 6ปฏิกิริยาเริ่มต้น 7. ขั้นตอนใน Agglutination• หลักปรากฏการณ์(ใชเสพติด) ปฏิกิริยาแรกเกี่ยวข้องกับ Ag Ab ชุดเดียวแอนติเจนดีเทอร์มิแนนต์บนอนุภาคพื้นผิว 1): การเชื่อมโยงอย่างรวดเร็ว และกลับ 2) ข้ามก่อตัวปรากฏผล (เสถียรภาพ) 1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 78. รองปรากฏการณ์: ตาข่ายเชื่อมก่อ – Ab + multivalent Ag เครือข่ายที่เสถียร (ปฏิกิริยาที่มองเห็น) – Ag และ Ab – ควบคุม โดยปัจจัย physiochemical: •แรงไอออนของฤทธิ์• pH • temperature1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 89. รองปรากฏการณ์ก่อตัวตาข่าย• Fab ส่วนของโมเลกุล Ig แนบกับแอนติเจนบน 2 ติดเซลล์เห็นผลในมูก•ถ้า antigen และแอนติบอดี ละลายปฏิกิริยาจะเห็นช่วงเวลา ie, Dr.T.V.Rao MD 9 precipitation1/11/201310. ซีรั่มผู้ป่วยทดสอบมูกตรงกับแอนติเจนของใหญ่ โทรศัพท์มือถือที่หน้าจอของแอนติบอดี• Antigen มีอยู่ตามธรรมชาติบนผิวของเซลล์. •ในกรณีนี้ ปฏิกิริยา Ag-Ab แบบมีมูก ซึ่งเป็นโดยตรง visible.1/11/2013 Dr.T.V.Rao MD 10

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การทดสอบการเกาะติดกันและ IMMUNOASSYS
1 การทดสอบและ SerologyAGGLUTINATION IMMUNOASSYS BASICS Dr.TVRao MD
2 วิธีการในการ Ag-Ab ตรวจจับปริมาณน้ำฝน•••เกาะติด hemagglutination และยับยั้ง hemagglutination • Viral ทดสอบการวางตัวเป็นกลาง•วิทยุ immunoassays •วิธี ELISA ••อิมมูโน Immmunoblotting •อิมมูโน 1/11/2013 Dr.TVRao MD 2
3. เกาะติด• Agglutinins - แอนติบอดีที่ผลิต ปฏิกิริยาดังกล่าว•เกี่ยวข้องกับกระบวนการขั้นตอนที่สอง: - แพ้หรือเริ่มต้นที่มีผลผูกพัน - Lattice ก่อหรือการก่อตัวของ aggregates1 ขนาดใหญ่ / 11/2013 Dr.TVRao MD 3
4. เกาะติด•ประเภทของอนุภาคที่มีส่วนร่วมในการเกิดปฏิกิริยาดังกล่าว -Erythrocytes เซลล์ -Bacterial - ผู้ให้บริการเฉื่อยเช่น particles1 น้ำยาง / 11/2013 Dr.TVRao MD 4
5. การทดสอบแอนติบอดีเกาะติด•สามารถเกาะติดกันแอนติเจนอนุภาค multivalent เช่นเซลล์เม็ดเลือดแดง (เม็ดเลือดแดง) หรือแบคทีเรีย•ไวรัสบางชนิดยังมีความสามารถในการเกาะติดกันกับเม็ดเลือดแดง. • ลักษณะการทำงานนี้จะเรียกว่าเกาะติดกัน. •การทดสอบทางภูมิคุ้มกันขึ้นอยู่กับการเกาะติดกันมักจะมีความสำคัญมากขึ้นกว่าผู้ที่อยู่บนพื้นฐานของ precipitation1 / 11/2013 Dr.TVRao MD 5
6. ตัวอย่างสไลด์•เกาะติดการทดสอบ•จานเกาะติดการทดสอบ•หลอดเกาะติดการทดสอบแบบ Passive •เกาะติดการทดสอบ• ทดสอบกล้องจุลทรรศน์เกาะติดการทดสอบ• Haemagglutination (HAT) 1/11/2013 Dr.TVRao MD 6
7 ขั้นตอนในการเกาะติด•ปรากฏการณ์ประถม (แพ้ทาง) ปฏิกิริยาแรกที่เกี่ยวข้องกับการรวมกัน Ag-Ab เดี่ยวปัจจัยแอนติเจนบนพื้นผิวของอนุภาค 1) ปฏิกิริยาเริ่มต้น : พลิกกลับได้อย่างรวดเร็วและ 2) การเชื่อมโยงข้ามก่อมวลรวมที่มองเห็นได้ (มีเสถียรภาพ) 1/11/2013 Dr.TVRao MD 7
8. ปรากฏการณ์รอง: LATTICE การเกิด - Ab + multivalent Ag เครือข่ายที่มีเสถียรภาพ (ปฏิกิริยามองเห็นได้) - เข้มข้น ของ AG และ Ab - ควบคุมโดยปัจจัยทางเคมีกายภาพ: •ความแรงของอิออนของสภาพแวดล้อม••ค่า pH temperature1 / 11/2013 Dr.TVRao MD 8
9. ปรากฏการณ์รอง•สร้าง Lattice •ส่วน Fab ของโมเลกุล Ig ยึดติดกับแอนติเจนเมื่อวันที่ 2 เซลล์ที่อยู่ติด ผลการ -visible ในการเกาะติดกัน•ถ้าทั้งแอนติเจนและแอนติบอดีเป็นปฏิกิริยาที่ละลายในน้ำจะกลายเป็นช่วงเวลาที่มองเห็นคือ precipitation1 / 11/2013 Dr.TVRao MD 9
10. DIRECT AGGLUTINATION- ทดสอบซีรั่มของผู้ป่วยกับขนาดใหญ่แอนติเจนมือถือเพื่อหน้าจอสำหรับการแสดงตน ของแอนติบอดี. • Antigen เป็นธรรมชาติบนพื้นผิวของเซลล์. •ในกรณีนี้ปฏิกิริยา Ag-Ab รูปแบบการเกาะติดกันซึ่งเป็นโดยตรง visible.1 / 11/2013 Dr.TVRao MD 10