Preparation of calibration solution

Preparation of calibration solution of standards
Stock solutions of each standard were prepared individually
with appropriate solvents. All-trans-retinol was dissolved in
ethanol–0.0625% BHT; retinyl acetate (internal standard 1, IS1)
was initially dissolved with 1 volume of acetone before the addition
of 4 volumes of acetonitrile. Stock solutions of α-, δ-, and γ-
tocopherols and α-tocopherol acetate (internal standard 2, IS2)
were prepared in ethanol–0.0625% BHT. Stock solutions of the
hydrocarbon carotenoids including α-carotene and β-carotene
were prepared in hexane–0.005% BHT, and lycopene was first
dissolved in 1 volume of chloroform followed by 4 volumes of
hexane–0.005% BHT. Canthaxanthin was dissolved in tetrahydrofuran.
Other carotenoids including lutein, zeaxanthin, β-
cryptoxanthin, and echinenone (internal standard 3, IS3) were
dissolved inethanol–0.0625%BHT. Because the carotenoids and
tocopherols are very unstable and easily degraded, the concentrations
of individual calibration standard solutions were confirmed by measuring the absorption in a specific solvent and
wavelength with a UV spectrometer and checking the purity by
HPLC. If the measured concentrations dropped significantly,
fresh new stock solutions of the individual calibration standard
were prepared. Extinction coefficients used to determine concentrations
of calibration standards are listed in Table I.
Ethanol–0.0625% BHT was used to dissolve the working solution
of mixed calibrators containing γ-, δ-, and α-tocopherol (1
mg/L, 8 mg/L and 30 mg/L, respectively), all-trans-retinol (2
mg/L), lutein and lycopene (1mg/L of each), zeaxanthin and canthaxanthin
(0.5 mg/L of each), β-cryptoxanthin and α-carotene
(2 mg/L of each), and β-carotene (4 mg/L). Aliquots of the
working solution were distributed into amber vials and stored at
–70°C. Each time before use, a vial of the calibrator working
solution was thawed to room temperature and sonicated for 5
min. Seven levels of different concentrations of calibrator
mixture were prepared by diluting the calibrator working
solution in ethanol–0.0625% BHT. The concentrations of the
internal standards in the mixed internal standard solution in
ethanol–0.0625% BHT were 0.25 mg/L for retinyl acetate (IS1),
50 mg/L for α-tocopherol acetate (IS2), and 0.2 mg/L for echinenone
(IS3).
Sample preparation
Plasma samples were stored at –80°C and extracted on the day
of HPLC analysis. All sampling procedures were performed
under low ambient light conditions to minimize light-induced
degradation of antioxidants. For extraction, a 200 μL aliquot of
plasma, 100 μL of the mixed internal standard solution, and 100
μL of ethanol–BHT (0.0625%) were pipetted into an amber
microfuge vial, and vortexed for 15 s for deproteinization (8). A
volume of 1 mL of n-hexane–BHT (0.005%) was added to the
mixture, which was then vortexed and shaken alternately for 5
min, and centrifuged for 3 min at 2000 g. The vial was placed on
ice to improve phase separation after centrifugation and an
aliquot of 900 μL of the supernatant was transferred to a 4 mL

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมความพร้อมของการแก้ปัญหาการสอบเทียบมาตรฐาน
โซลูชั่นการแจ้งของแต่ละมาตรฐานได้จัดทำรายบุคคล
ที่มีตัวทำละลายที่เหมาะสม All-ทรานส์เรตินถูกละลายใน
เอทานอล 0.0625% บาท; retinyl อะซิเตท (มาตรฐานภายใน 1 IS1)
ก็เลือนหายไป 1 ครั้งแรกกับปริมาณของอะซิโตนก่อนนอกจากนี้
4 เล่ม acetonitrile การแก้ปัญหาสต็อกของα-, δ-และγ-
tocopherols และαโทโคฟีรออะซิเตท (มาตรฐานภายใน 2 is2)
ได้จัดทำเอทานอล 0.0625% บาท การแก้ปัญหาสต็อกของ
carotenoids ไฮโดรคาร์บอนรวมทั้งαแคโรทีนและแคโรทีนβ
ได้จัดทำขึ้นเฮกเซน-0.005% บาทและไลโคปีนเป็นครั้งแรกที่
ละลายใน 1 ปริมาณของคลอโรฟอร์มติดตาม 4 เล่มของ
เฮกเซน-0.005% บาท Canthaxanthin ถูกละลายใน tetrahydrofuran
นอยด์อื่น ๆ รวมทั้งลูทีนซีแซนทีน, β-
cryptoxanthin และ echinenone (มาตรฐานภายใน 3 IS3) ถูก
ละลาย inethanol-0.0625% บาท เพราะ carotenoids และ
วิตามินอีจะไม่แน่นอนมากและเสื่อมโทรมได้อย่างง่ายดายความเข้มข้น
ของการแก้ปัญหาการสอบเทียบมาตรฐานของแต่ละบุคคลได้รับการยืนยันโดยการวัดการดูดซึมในตัวทำละลายที่เฉพาะเจาะจงและ
ความยาวคลื่นที่มีสเปกโตรมิเตอร์รังสียูวีและการตรวจสอบความบริสุทธิ์โดย
วิธี HPLC ถ้าความเข้มข้นที่วัดได้ลดลงอย่างมาก,
โซลูชั่นหุ้นใหม่สดของการสอบเทียบมาตรฐานของแต่ละบุคคล
ได้จัดทำ ค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์ใช้ในการกำหนดความเข้มข้น
ของการเทียบมาตรฐานมีการระบุไว้ในตารางที่ I.
เอทานอล 0.0625% บาทถูกใช้ในการละลายวิธีการทำงาน
ของเครื่องปรับเทียบผสมที่มีγ-, δ-และαโทโคฟีรอ (1
มิลลิกรัม / ลิตร, 8 mg / L และ 30 มิลลิกรัม / ลิตรตามลำดับ) ทุกทรานส์เรติน (2
มิลลิกรัม / ลิตร), ลูทีนและไลโคปีน (1 มก / ลิตรในแต่ละ), ซีแซนทีนและ canthaxanthin
(0.5 มิลลิกรัม / ลิตรในแต่ละ), β-cryptoxanthin และα แคโรทีน
(2 มิลลิกรัม / ลิตรในแต่ละ), และβแคโรทีน (4 มิลลิกรัม / ลิตร) aliquots ของ
วิธีการทำงานมีการกระจายเข้าไปในขวดสีเหลืองอำพันและเก็บไว้ที่
-70 องศาเซลเซียส ทุกครั้งก่อนใช้ขวดของการทำงานสอบเทียบ
แก้ปัญหาที่ถูกละลายที่อุณหภูมิห้องและ sonicated เวลา 5
นาที เจ็ดระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของการสอบเทียบ
ส่วนผสมเตรียมโดยเจือจางทำงานสอบเทียบ
การแก้ปัญหาในเอทานอล 0.0625% บาท ความเข้มข้นของ
มาตรฐานภายในสารละลายมาตรฐานผสมภายใน
เอทานอล 0.0625% บาทเป็น 0.25 มิลลิกรัม / ลิตรสำหรับ retinyl อะซิเตท (IS1)
50 มิลลิกรัม / ลิตรสำหรับαโทโคฟีรออะซิเตท (is2) และ 0.2 มิลลิกรัม / ลิตรสำหรับ echinenone
(IS3)
การเตรียมสารตัวอย่าง
ตัวอย่างพลาสมาถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสและสกัดในวันที่
ของการวิเคราะห์ HPLC ขั้นตอนการเก็บตัวอย่างทั้งหมดได้ดำเนินการ
ภายใต้สภาพแสงโดยรอบต่ำเพื่อลดแสงเหนี่ยวนำให้เกิด
การย่อยสลายของสารต้านอนุมูลอิสระ สำหรับการสกัดการหาร 200 ไมโครลิตรของ
พลาสม่า 100 ไมโครลิตรของสารละลายมาตรฐานผสมภายในและ 100
ไมโครลิตรของเอทานอลบาท (0.0625%) เป็นปิเปตเป็นสีเหลืองอำพัน
microfuge ขวดและหมุนวน 15 สำหรับการย่อย (8)
ปริมาณของ 1 มิลลิลิตรของ N-เฮกเซน-บาท (0.005%) ถูกเพิ่มลงใน
ส่วนผสมซึ่งได้รับการหมุนวนแล้วและเขย่าสลับกันเป็นเวลา 5
นาทีและปั่นเป็นเวลา 3 นาทีที่ 2000 กรัม ขวดถูกวางลงบน
น้ำแข็งเพื่อปรับปรุงการแยกเฟสหลังจากการหมุนเหวี่ยงและ
หาร 900 ไมโครลิตรของสารละลายถูกย้ายไป 4 มิลลิลิตร

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การเตรียมการสร้างโซลูชั่นที่ได้มาตรฐานหุ้นโซลูชั่นของแต่ละมาตรฐานถูกเตรียมไว้เป็นรายบุคคลด้วยตัวทำละลายที่เหมาะสม ทั้งหมดทรานส์เรตินอลถูกละลายในเอทานอล–ผล % บาท ; เรติน อะซิเตท ( ภายใน มาตรฐานที่ 1 is1 )ก็เริ่มละลายด้วยอะซิโตน 1 เล่มก่อน )4 ปริมาณไน . หุ้นโซลูชั่นของแอลฟาδγ - , - และแอลฟาโทโคเฟอรอล และโทโคเฟอรอลอะซิเตท ( ภายในมาตรฐาน 2 , is2 )เตรียมในเอทานอล - ผล % บาท หุ้นโซลูชั่น ของไฮโดรคาร์บอน ได้แก่ แอลฟาแคโรทีนแคโรทีนอยด์ และบีตา - แคโรทีนเตรียมในเฮกเซน ) 0.005% บาท และไลโคปีน เป็นครั้งแรกที่ละลายใน 1 ปริมาณคลอโรฟอร์ม ตามด้วย 4 เล่มเฮกเซน ( 0.005 % บาท แคนทาแซนทินถูกละลายในเตตระไฮโดรฟแรน .แคโรทีนอยด์อื่นๆ ได้แก่ ลูทีน ซีแซนบีตา - , ,คริปโตแซนทิน และ echinenone ( ภายในมาตรฐานที่ 3 , is3 ) ได้แก่inethanol –ผล % บาท ละลาย เนื่องจากแคโรทีนอยด์ และโทโคเฟอรอลจะไม่เสถียรมากและสามารถย่อยสลาย , ความเข้มข้นของโซลูชั่นการสอบเทียบแต่ละมาตรฐานได้รับการยืนยันโดยการวัดการดูดกลืนในตัวทำละลายที่เฉพาะเจาะจงและแสงยูวีกับสเปกและการตรวจสอบความบริสุทธิ์โดย4 . ถ้าวัดความเข้มข้นลดลงอย่างมากสดใหม่หุ้นโซลูชั่นของแต่ละมาตรฐานการสอบเทียบได้เตรียม ใช้วัดความเข้มข้นค่าสัมประสิทธิ์การสูญพันธุ์มาตรฐานการสอบเทียบอยู่ในโต๊ะผมเอทานอล–ผล % บาทใช้แก้ปัญหาการทำงานให้ละลายของเทียบผสมที่มีγ - , δ - แอลฟาโทโคเฟอรอล ( 1 , และมก. / ล. 8 มิลลิกรัม / ลิตรและ 30 มิลลิกรัม / ลิตร ) , ทรานส์เรตินอล ( 2มิลลิกรัม / ลิตร ) , ลูทีนและไลโคปีน ( 1mg / L ของแต่ละ ) , ซีแซนทีน และ แคนทาแซนทิน( 0.5 มิลลิกรัมต่อลิตรของแต่ละ ) , บีตา - แคโรทีนแซนทิน และ แอลฟา( 2 มิลลิกรัมต่อลิตรของแต่ละ ) , และบีตา - แคโรทีน ( 4 มิลลิกรัม / ลิตร ) เฉยๆของทํางานโซลูชั่นถูกกระจายเป็นหลอดสีเหลืองและเก็บไว้ที่- 70 องศา ทุกครั้งก่อนใช้ ขวดของคาลิเบรเตอร์ทำงานโซลูชั่นที่ถูกละลายที่อุณหภูมิห้อง และ sonicated 5นาทีเจ็ดระดับของความเข้มข้นที่แตกต่างกันของคาลิเบรเตอร์ผสมเตรียมโดยละลายคาลิเบรเตอร์ทำงานสารละลายเอทานอล–ผล % บาท ความเข้มข้นของภายในมาตรฐานในมาตรฐานสารละลายผสมภายในเอทานอล–ผล % บาทเป็น 0.25 มก. / ล. สำหรับเรติน อะซิเตท ( is1 )50 มิลลิกรัม / ลิตร สำหรับแอลฟาโทโคเฟอรอลอะซิเตท ( is2 ) และ 0.2 มก. / ล. echinenone( is3 )ตัวอย่างการเตรียมตัวอย่างพลาสมาที่อุณหภูมิ - 80 องศา C และ สารสกัด ในวันที่การวิเคราะห์ปริมาณซูโครส ทุกขั้นตอนมีการปฏิบัติการสุ่มตัวอย่างภายใต้เงื่อนไขที่แสงน้อยและอุณหภูมิเพื่อลดแสงการย่อยสลายของสารต้านอนุมูลอิสระ สำหรับการสกัด , 200 μส่วนลงตัวของแอลพลาสม่า , 100 μลิตรผสมภายในมาตรฐานโซลูชั่นและ 100μล. บาท และเอทานอล ( ผล ) เป็น pipetted เป็นแอมเบอร์microfuge ขวด และ vortexed 15 s สูง ( 8 ) เป็นปริมาตร 1 มิลลิลิตร บีบ–บาท ( 0.005% ) คือเพิ่มไปส่วนผสมซึ่งก็ vortexed และสะเทือนสลับ 5มิน ไฟฟ้าสำหรับ 3 นาทีที่ 2000 กรัม ขวดวางอยู่บนน้ำแข็งเพื่อปรับปรุงการแยกเฟสหลังการปั่นเหวี่ยง และส่วนลงตัว 900 μ L ของน่านถูกส่งไป 4 มล.