3. Single cell gel electrophoresis

3. Single cell gel electrophoresis (SCGE) assay
The SCGE, or comet assay, was performed according to the method proposed
by Singh et al. (1988). Human leukocytes were treated with different doses of each
detergent (range 1–2000 mg/L) at 37 1C for 1 h. Negative (distilled water) and
positive (ethyl methanesulfonate, 2 mM) controls were performed. After treatment,
the assay was performed only on samples with viability 470%, according to
the procedure proposed by Tice et al. (2000). After slide preparation and cell lysis,
DNA was subjected to 20-min unwinding and 20-min electrophoresis (pH413,
0.8 V/cm and 300 mA). The slides stained with ethidium bromide were examined
under a fluorescence microscope (Olympus CX 41RF) equipped with a BP 515–
560 nm excitation filter and an LP 580 nm barrier filter. Fifty randomly-selected
cells per slide (two slides per sample) were analysed. The extent of DNA migration
was evaluated by both ‘‘visual score’’ (based on visual classification of DNA
damage) and the comet parameter ‘‘tail intensity’’ (percentage of DNA migration
in the tail) detected using an automatic imaging system (Komet 5, Kinetic Imaging
Ltd). Significance of the effect of each dose against the negative control was
determined using Dunnett’s test.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

3. ทดสอบเซลล์เดี่ยวเจอิ (SCGE)SCGE หรือดาวหาง assay ดำเนินการตามวิธีการนำเสนอโดยสิงห์ et al. (1988) เม็ดเลือดขาวมนุษย์ได้รับการรักษา ด้วยปริมาณที่แตกต่างกันของแต่ละผงซักฟอก (ช่วง 1 – 2000 mg/L) ที่ 1C 37 สำหรับเอช 1 เป็นลบ (น้ำกลั่น) และดำเนินการควบคุมบวก (methanesulfonate เอทิล 2 มม.) หลังการรักษาทดสอบการดำเนินการเฉพาะบนตัวอย่างที่มีชีวิต 470% ตามขั้นตอนการนำเสนอโดยผ่าน et al. (2000) หลังจากเลื่อนเตรียมและเซลล์ lysisดีเอ็นเอได้ภายใต้การคลาย 20 นาทีและ 20 นาทีอิ (pH4130.8 V/cm และ 300 mA) สไลด์ที่ย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium ถูก examinedภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (Olympus CX 41RF) พร้อมกับมี BP 515 –560 nm กระตุ้นตัวกรองและตัวกรองอุปสรรค nm LP 580 ห้าสิบที่สุ่มเลือกเซลล์ต่อสไลด์ (ภาพนิ่งสองภาพต่อตัวอย่าง) มาวิเคราะห์ ขอบเขตของการย้ายดีเอ็นเอซึ่งประกอบ ด้วยทั้ง ''ภาพคะแนน '' (ตามการจัดประเภทภาพของดีเอ็นเอความเสียหาย) และพารามิเตอร์ดาวหาง ''หางเข้ม '' (เปอร์เซ็นต์ของดีเอ็นเอการโยกย้ายในหาง) ถูกตรวจพบโดยอัตโนมัติระบบภาพ (Komet 5 ภาพเคลื่อนไหวLtd) ความสำคัญของผลกระทบของแต่ละปริมาณกับการควบคุมค่าลบถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบของ Dunnett

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

3. เจลเซลล์เดี่ยว electrophoresis (SCGE) assay
SCGE หรือทดสอบดาวหางได้ดำเนินการตามวิธีการที่นำเสนอ
โดยซิงห์, et al (1988) เม็ดเลือดขาวของมนุษย์ได้รับการรักษาด้วยยาที่แตกต่างกันของแต่ละ
ผงซักฟอก (ช่วง 1-2000 mg / L) ที่ 37 1C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง เชิงลบ (น้ำกลั่น) และ
บวก (เอทิล methanesulfonate 2 มิลลิเมตร) ได้ดำเนินการควบคุม หลังจากการรักษา
การทดสอบได้ดำเนินการเฉพาะในกลุ่มตัวอย่างที่มีศักยภาพใน 470% ตาม
ขั้นตอนที่เสนอโดย Tice et al, (2000) หลังจากเตรียมภาพนิ่งและสลายเซลล์
DNA ถูกยัดเยียดให้ 20 นาทีคลี่คลายและอิเล็ก 20 นาที (pH413,
0.8 V / ซม. และ 300 MA) ภาพนิ่งย้อมด้วย ethidium bromide ถูกตรวจสอบ
ภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง (โอลิมปั CX 41RF) พร้อมกับ BP 515-
กรองกระตุ้น 560 นาโนเมตรและ 580 นาโนเมตร LP กรองอุปสรรค ห้าสิบสุ่มเลือก
เซลล์ต่อสไลด์ (สองภาพนิ่งต่อตัวอย่าง) ถูกนำมาวิเคราะห์ ขอบเขตของการย้ายถิ่นดีเอ็นเอ
ถูกประเมินโดยทั้ง '' คะแนนภาพ '' (ขึ้นอยู่กับการจัดหมวดหมู่ภาพของดีเอ็นเอ
ความเสียหาย) และพารามิเตอร์ดาวหาง '' เข้มหาง '' (ร้อยละของการย้ายถิ่นดีเอ็นเอ
ในหาง) ตรวจพบการใช้ระบบการถ่ายภาพอัตโนมัติ ( Komet 5 Kinetic Imaging
จำกัด ) ความสำคัญของผลกระทบของยาแต่ละกับการควบคุมเชิงลบที่ถูก
กำหนดโดยใช้การทดสอบ Dunnett ของ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

3 . เซลล์อิเล็กเดียว เจล ( scge ) การทดสอบการ scge หรือดาวหางโดยการปฏิบัติตามวิธีการที่เสนอโดย Singh et al . ( 1988 ) คนได้รับการรักษาด้วยยาทุกชนิดที่แตกต่างกันของแต่ละคนผงซักฟอก ( ช่วง 1 – 2 , 000 มก. / ล. ) ที่ 37 c เป็นเวลา 1 ชั่วโมงลบ ( น้ำ ) และบวก ( เอทิล methanesulfonate 2 มม. ) ในการควบคุมการ หลังจากการรักษา( แสดงเฉพาะในตัวอย่างกับความมีชีวิต 470 บาท ตามขั้นตอนที่เสนอโดยไทซ์ et al . ( 2000 ) หลังจากการเตรียมสไลด์และการสลายเซลล์ ,ดีเอ็นเอภายใต้ 20 นาทีและ 20 นาที ( ph413 คลี่คลาย electrophoresis ,0.8 โวลท์ / เซนติเมตรมา 300 ) สไลด์ย้อมด้วยทิเดียมโบรไมด์ถูกตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสง ( Olympus CX 41rf ) พร้อมกับ 515 BP จำกัด560 nm แผ่นกรองและ LP 580 นาโนเมตร กั้นกรอง 50 สุ่มเลือกเซลล์ต่อ ( ภาพนิ่ง 2 ภาพนิ่งต่อตัวอย่าง ) วิเคราะห์ . ขอบเขตของการอพยพ ดีเอ็นเอประเมินโดย "visual ทั้ง " คะแนน " " ( ตามประเภทของภาพและดีเอ็นเอความเสียหาย ) และดาวหาง "tail พารามิเตอร์ " เข้ม " " ( ร้อยละการย้ายถิ่นของดีเอ็นเอในหาง ) ตรวจพบใช้ระบบถ่ายภาพอัตโนมัติ ( ภาพจาก โกเมท 5จำกัด ) ความสำคัญของผลกระทบของแต่ละขนาดกับความไม่ชอบมาพากล คือการพิจารณาของ Dunnett test