For the determination of inhibitor

For the determination of inhibitor sensitivity, the
purified protease solutions (200 ml at 16.5 mg/ml) were
preincubated with 10-fold concentrated stock solutions
of each reagent in the ratio of 1:1 at 30°C for 30 min in
0.02 M borate–NaOH buffer (pH 10) and protease
activity was assayed as described above. PMSF, N-tosyl-L-phenylalaninechloromethyl
ketone (TPCK) and
N-tosyl-L-lysinechloromethyl ketone (TLCK) were prepared
as stock solutions in DMSO. Residual activities
were determined as a percentage of the activity in
control samples without reagent. Appropriate solvent
controls were run in parallel when required. The influence
of different metal ions at 1 and 10 mM final
concentration on protease activities were also determined
using casein as substrate, as described above for
protease inhibitors.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สำหรับการกำหนดความไวของสารยับยั้ง การได้บริสุทธิ์รติเอสโซลูชั่น (200 มลที่ 16.5 mg/ml)preincubated กับ 10-fold เข้มข้นหุ้นโซลูชั่นของแต่ละรีเอเจนต์ในอัตราส่วน 1:1 ที่ 30° C ใน 30 นาทีใน0.02 M borate – NaOH บัฟเฟอร์ (pH 10) และรติเอสกิจกรรมถูก assayed ที่อธิบายข้างต้น PMSF, N-tosyl-L-phenylalaninechloromethylคีโตน (TPCK) และมีเตรียมจุด N-tosyl-L-lysinechloromethyl (TLCK)เป็นโซลูชั่นหุ้นใน DMSO กิจกรรมส่วนที่เหลือถูกกำหนดเป็นเปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมตัวอย่างควบคุม โดยรีเอเจนต์ ตัวทำละลายที่เหมาะสมตัวควบคุมถูกเรียกใช้เมื่อจำเป็นพร้อมกัน อิทธิพลของประจุต่าง ๆ โลหะที่ 1 และ 10 มม.สุดท้ายนอกจากนี้ยังได้กำหนดสมาธิกิจกรรมรติเอสใช้เคซีนเป็นพื้นผิว ตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับinhibitors รติเอส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สำหรับการวัดค่าความไวยับยั้งการแก้ปัญหาน้ำย่อยบริสุทธิ์ (200 มล. ที่ 16.5 mg / ml) มี preincubated 10 เท่าความเข้มข้นโซลูชั่นหุ้นของแต่ละสารในอัตราส่วน1: 1 ที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีใน0.02 M borate -NaOH บัฟเฟอร์ (pH 10) และน้ำย่อยกิจกรรมได้รับการวิเคราะห์ที่อธิบายข้างต้น PMSF N-tosyl-L-phenylalaninechloromethyl คีโตน (TPCK) และN-tosyl-L-lysinechloromethyl คีโตน (TLCK) ได้จัดทำโซลูชั่นหุ้นในDMSO กิจกรรมที่เหลือได้รับการพิจารณาเป็นเปอร์เซ็นต์ของกิจกรรมในตัวอย่างโดยไม่ต้องควบคุมสาร ตัวทำละลายที่เหมาะสมควบคุมวิ่งขนานเมื่อจำเป็น อิทธิพลของโลหะไอออนที่แตกต่างกัน ณ วันที่ 1 และ 10 มิลลิสุดท้ายความเข้มข้นในการจัดกิจกรรมโปรติเอสได้รับการพิจารณานอกจากนี้ยังใช้เคซีนเป็นสารตั้งต้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับน้ำย่อย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สำหรับการกำหนดยับยั้งความไว
บริสุทธิ์เอนไซม์โปรติเอส โซลูชั่น ( 200 ml ที่ 16.5 mg / ml )
preincubated กับ 10 เท่าความเข้มข้นหุ้นโซลูชั่น
ของแต่ละสารเคมีที่ใช้ในอัตราส่วน 1 : 1 ใน 30 ° C เป็นเวลา 30 นาทีใน
0.02 M บอเรตบัฟเฟอร์ pH 10 ( NaOH ) และกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอส
ซีรั่มตามที่อธิบายไว้ข้างต้น PMSF n-tosyl-l-phenylalaninechloromethyl , คีโตน ( tpck

)n-tosyl-l-lysinechloromethyl คีโตน ( tlck ) เตรียม
เป็นหุ้นโซลูชั่นใน DMSO . กิจกรรม
ที่เหลือถูกกำหนดเป็นร้อยละของกิจกรรมใน
ตัวอย่างควบคุม โดยไม่เกิดปฏิกิริยา ตัวทำละลายที่เหมาะสมในการควบคุม
วิ่งขนานเมื่อจำเป็น อิทธิพลของไอออนโลหะที่แตกต่างกัน

1 และ 10 มม. สุดท้ายของกิจกรรมเอนไซม์โปรตีเอสยังมุ่งมั่น
โดยใช้เคซีนเป็นตั้งต้นตามที่อธิบายไว้ข้างต้นสำหรับ
protease inhibitors .