- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
MethodsSampling sitesAll sampling s
Methods
Sampling sites
All sampling sites were located on King George Island
(62°020S 58°210W/62.033°S 58.35°W), the major island of
the Shetland South Archipelago (Figure 1). A total of 34
soil and 14 water samples were collected in January of
2009. The temperature and altitude of the sampling sites
varied from 0 to 11.9°C and from 0 to 182 m, respectively.
For soil samples, sterile 50 ml tubes were filled
with soil, sealed and stored at −20°C. For water samples,
200–500 ml of water were collected from terrestrial
sources and processed in situ using the 55-PLUS™
MONITOR system (Millipore, Billerica, MA, USA,) with
cellulose filter for yeasts and molds, as specified by the
manufacturer. The dishes were then stored at 4°C until
processing.
Sample processing, yeast cultivation and isolation
Five grams of each soil sample was suspended in 5 ml
of sterile water by vigorous agitation on a vortex for
10 min. Following decantation of the coarse particulate
material, 200 μl of the suspension was seeded onto
plates containing YM medium (0.3% yeast extract,
0.3% malt extract, 0.5% peptone) supplemented with
2% glucose and 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm).
The plates were incubated at 4, 10, 15 and 22°C. Duplicate
of water sampling dishes were incubated at 4
and 10°C. The plates were incubated for 3 months and
periodically inspected for colony development. Once a
colony became visible, it was immediately transferred
to fresh YM-cm plates and incubated at the same
temperature as the source-plate. The procedure was
repeated for each soil sample to maximize the number
of isolates.
Long-term preservation of the yeast isolates was
achieved via two methods; the gelatin drop method
[42,43] and cryopreservation at −80°C in 30% glycerol.
Determination of growth temperatures and carbon
source assimilation
Yeast growth at different temperatures was assessed by a
method based on comparison of colony sizes on solid
media, which is applicable to the determination of minimum
inhibitory concentration in yeasts [44]. The yeasts
were seeded onto YM plates, incubated at 4, 10, 15, 22,
30 and 37°C, and the colony sizes were recorded daily.
For each yeast at each temperature, a plot of colony size
vs. incubation time was constructed; the temperatures at
which colony diameter increased significantly were considered
as positive for growth, while the temperature at
which the slope changed most rapidly was considered as
the “best” or “optimal” for the growth. Glucose fermentation
test were performed using a Durham tube. The
assimilation of 29 different carbon sources was determined
using the API ID 32C gallery (bioMérieux, Lyon,
France) as specified by the manufacturer. Briefly, a colony
portion was suspended in 400 μl of sterile water.
Following adjustment to A600nm≈0.5 (equivalent to 2
McFarland standard), 250 μl of the suspension was
added to an ampule of api C medium. Each well of the
strip was seeded with 135 μl of this final suspension and
incubated in a humid chamber. The turbidity (+) or lack
thereof (−) in the wells was used as indicator of growth
and was determined by visual inspection relative to the
negative control well. A bionumber code was obtained
from the data using the apiweb™ software.
DNA extraction, amplification, sequencing and analysis
50 ml of each yeast culture (A600nm = 0.6 to 0.8) was
centrifuged at 7,000 x g for 10 min, the pellet was suspended
in 5 ml of TE buffer and 300 μl aliquots of the
cellular suspension were mixed with 250 μl of 0.5 mm
diameter glass beads, vortexed for 10 min and centrifuged
at 12,000 x g for 5 min. The DNA was obtained
from 300 μl of the supernatant using the Wizard Genomic
DNA Purification kit (Promega, Madison, USA) as
specified by the manufacturer. The concentration and
integrity of the DNA samples were analyzed by electrophoresis
in 1.5% agarose gels. The D1/D2 and ITS1-
5.8S-ITS2 regions of rDNA were amplified with the primers
pairs F63/LR3 [45] and ITS1/ITS4 [46], respectively,
using Taq polymerase (Fermentas International
INC.) in thermal cyclers (Applied Biosystems). The
resulting amplicons were separated by electrophoresis in
1.5% agarose gels immersed in TAE buffer containing
ethidium bromide (0.5 μg/ml) and were purified from
the gels as described in Boyle and Lew [47]. Most of the
nucleotide sequences were determined using the sequencing
service of Macrogen INC. In some cases, the DNA
Sequencing Kit Dynamic Termination Cycle (Amersham
Biosciences Limited) and a Genetic analyzer 3100 Avant
automatic sequencer (Applied Biosystem) were used
Sampling sites
All sampling sites were located on King George Island
(62°020S 58°210W/62.033°S 58.35°W), the major island of
the Shetland South Archipelago (Figure 1). A total of 34
soil and 14 water samples were collected in January of
2009. The temperature and altitude of the sampling sites
varied from 0 to 11.9°C and from 0 to 182 m, respectively.
For soil samples, sterile 50 ml tubes were filled
with soil, sealed and stored at −20°C. For water samples,
200–500 ml of water were collected from terrestrial
sources and processed in situ using the 55-PLUS™
MONITOR system (Millipore, Billerica, MA, USA,) with
cellulose filter for yeasts and molds, as specified by the
manufacturer. The dishes were then stored at 4°C until
processing.
Sample processing, yeast cultivation and isolation
Five grams of each soil sample was suspended in 5 ml
of sterile water by vigorous agitation on a vortex for
10 min. Following decantation of the coarse particulate
material, 200 μl of the suspension was seeded onto
plates containing YM medium (0.3% yeast extract,
0.3% malt extract, 0.5% peptone) supplemented with
2% glucose and 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm).
The plates were incubated at 4, 10, 15 and 22°C. Duplicate
of water sampling dishes were incubated at 4
and 10°C. The plates were incubated for 3 months and
periodically inspected for colony development. Once a
colony became visible, it was immediately transferred
to fresh YM-cm plates and incubated at the same
temperature as the source-plate. The procedure was
repeated for each soil sample to maximize the number
of isolates.
Long-term preservation of the yeast isolates was
achieved via two methods; the gelatin drop method
[42,43] and cryopreservation at −80°C in 30% glycerol.
Determination of growth temperatures and carbon
source assimilation
Yeast growth at different temperatures was assessed by a
method based on comparison of colony sizes on solid
media, which is applicable to the determination of minimum
inhibitory concentration in yeasts [44]. The yeasts
were seeded onto YM plates, incubated at 4, 10, 15, 22,
30 and 37°C, and the colony sizes were recorded daily.
For each yeast at each temperature, a plot of colony size
vs. incubation time was constructed; the temperatures at
which colony diameter increased significantly were considered
as positive for growth, while the temperature at
which the slope changed most rapidly was considered as
the “best” or “optimal” for the growth. Glucose fermentation
test were performed using a Durham tube. The
assimilation of 29 different carbon sources was determined
using the API ID 32C gallery (bioMérieux, Lyon,
France) as specified by the manufacturer. Briefly, a colony
portion was suspended in 400 μl of sterile water.
Following adjustment to A600nm≈0.5 (equivalent to 2
McFarland standard), 250 μl of the suspension was
added to an ampule of api C medium. Each well of the
strip was seeded with 135 μl of this final suspension and
incubated in a humid chamber. The turbidity (+) or lack
thereof (−) in the wells was used as indicator of growth
and was determined by visual inspection relative to the
negative control well. A bionumber code was obtained
from the data using the apiweb™ software.
DNA extraction, amplification, sequencing and analysis
50 ml of each yeast culture (A600nm = 0.6 to 0.8) was
centrifuged at 7,000 x g for 10 min, the pellet was suspended
in 5 ml of TE buffer and 300 μl aliquots of the
cellular suspension were mixed with 250 μl of 0.5 mm
diameter glass beads, vortexed for 10 min and centrifuged
at 12,000 x g for 5 min. The DNA was obtained
from 300 μl of the supernatant using the Wizard Genomic
DNA Purification kit (Promega, Madison, USA) as
specified by the manufacturer. The concentration and
integrity of the DNA samples were analyzed by electrophoresis
in 1.5% agarose gels. The D1/D2 and ITS1-
5.8S-ITS2 regions of rDNA were amplified with the primers
pairs F63/LR3 [45] and ITS1/ITS4 [46], respectively,
using Taq polymerase (Fermentas International
INC.) in thermal cyclers (Applied Biosystems). The
resulting amplicons were separated by electrophoresis in
1.5% agarose gels immersed in TAE buffer containing
ethidium bromide (0.5 μg/ml) and were purified from
the gels as described in Boyle and Lew [47]. Most of the
nucleotide sequences were determined using the sequencing
service of Macrogen INC. In some cases, the DNA
Sequencing Kit Dynamic Termination Cycle (Amersham
Biosciences Limited) and a Genetic analyzer 3100 Avant
automatic sequencer (Applied Biosystem) were used
0/5000
วิธี
ฝีมืออเมริกา
ไซต์สุ่มตัวอย่างทั้งหมดที่อยู่บนเกาะคิงจอร์จ
(62 ° 020S 58 ° 210W/62.033 ° S 58.35 ° W), เกาะหลักของ
เชทแลนด์ใต้หมู่เกาะ (รูปที่ 1) จำนวน 34
14 ตัวอย่างน้ำและดินถูกเก็บรวบรวมในเดือนมกราคมของ
2009 อุณหภูมิและระดับความสูงของอเมริกาสุ่ม
แตกต่างจาก 0 ถึง 11.9° C และ 0 เมตร 182 ตามลำดับ.
ตัวอย่างดิน 50 ml ใส่หลอดเต็มไป
กับดิน ปิดสนิท และเก็บไว้ที่ −20 องศาเซลเซียส สำหรับตัวอย่างน้ำ,
200-500 ml ของน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมจากภาคพื้นดิน
แหล่ง และประมวลผลในซิใช้ 55 - PLUS ™
ตรวจสอบระบบ (มาก Billerica, MA สหรัฐอเมริกา,) ด้วย
กรองเซลลูโลส yeasts และแม่พิมพ์ งาน
ผู้ผลิต อาหารถูกเก็บไว้ที่ 4° C จนถึงแล้ว
ประมวลผล
ตัวอย่างประมวลผล ยีสต์และการแยก
5 กรัมของตัวอย่างดินแต่ละถูกระงับใน 5 ml
น้ำผ่านการฆ่าเชื้อโดยอาการกังวลต่อคึกคักใน vortex สำหรับ
10 นาที ต่อ decantation ของหยาบฝุ่น
วัสดุ μl 200 ของการระงับได้ seeded บน
ประกอบด้วย YM ปานกลาง (0.3% ยีสต์ extract,
0.3% มอลต์สกัด peptone 0.5%) เสริมด้วยแผ่น
2% กลูโคสและ 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm)
แผ่นถูก incubated ที่ 4, 10, 15 และ 22 องศาเซลเซียส ซ้ำ
น้ำ อาหารสุ่มตัวอย่างที่ incubated ที่ 4
และ 10 องศาเซลเซียส แผ่นก็ incubated 3 เดือน และ
เป็นระยะ ๆ ตรวจสอบพัฒนาอาณานิคม ครั้ง
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ ถูกโอนย้ายทันที
สด YM-ซม.แผ่น และ incubated ที่เดียว
อุณหภูมิเป็นแผ่นต้นฉบับ ขั้นตอนถูก
ฝีมืออเมริกา
ไซต์สุ่มตัวอย่างทั้งหมดที่อยู่บนเกาะคิงจอร์จ
(62 ° 020S 58 ° 210W/62.033 ° S 58.35 ° W), เกาะหลักของ
เชทแลนด์ใต้หมู่เกาะ (รูปที่ 1) จำนวน 34
14 ตัวอย่างน้ำและดินถูกเก็บรวบรวมในเดือนมกราคมของ
2009 อุณหภูมิและระดับความสูงของอเมริกาสุ่ม
แตกต่างจาก 0 ถึง 11.9° C และ 0 เมตร 182 ตามลำดับ.
ตัวอย่างดิน 50 ml ใส่หลอดเต็มไป
กับดิน ปิดสนิท และเก็บไว้ที่ −20 องศาเซลเซียส สำหรับตัวอย่างน้ำ,
200-500 ml ของน้ำที่ถูกเก็บรวบรวมจากภาคพื้นดิน
แหล่ง และประมวลผลในซิใช้ 55 - PLUS ™
ตรวจสอบระบบ (มาก Billerica, MA สหรัฐอเมริกา,) ด้วย
กรองเซลลูโลส yeasts และแม่พิมพ์ งาน
ผู้ผลิต อาหารถูกเก็บไว้ที่ 4° C จนถึงแล้ว
ประมวลผล
ตัวอย่างประมวลผล ยีสต์และการแยก
5 กรัมของตัวอย่างดินแต่ละถูกระงับใน 5 ml
น้ำผ่านการฆ่าเชื้อโดยอาการกังวลต่อคึกคักใน vortex สำหรับ
10 นาที ต่อ decantation ของหยาบฝุ่น
วัสดุ μl 200 ของการระงับได้ seeded บน
ประกอบด้วย YM ปานกลาง (0.3% ยีสต์ extract,
0.3% มอลต์สกัด peptone 0.5%) เสริมด้วยแผ่น
2% กลูโคสและ 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm)
แผ่นถูก incubated ที่ 4, 10, 15 และ 22 องศาเซลเซียส ซ้ำ
น้ำ อาหารสุ่มตัวอย่างที่ incubated ที่ 4
และ 10 องศาเซลเซียส แผ่นก็ incubated 3 เดือน และ
เป็นระยะ ๆ ตรวจสอบพัฒนาอาณานิคม ครั้ง
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ ถูกโอนย้ายทันที
สด YM-ซม.แผ่น และ incubated ที่เดียว
อุณหภูมิเป็นแผ่นต้นฉบับ ขั้นตอนถูก
การแปล กรุณารอสักครู่..
Methods
Sampling sites
All sampling sites were located on King George Island
(62°020S 58°210W/62.033°S 58.35°W), the major island of
the Shetland South Archipelago (Figure 1). A total of 34
soil and 14 water samples were collected in January of
2009. The temperature and altitude of the sampling sites
varied from 0 to 11.9°C and from 0 to 182 m, respectively.
For soil samples, sterile 50 ml tubes were filled
with soil, sealed and stored at −20°C. For water samples,
200–500 ml of water were collected from terrestrial
sources and processed in situ using the 55-PLUS™
MONITOR system (Millipore, Billerica, MA, USA,) with
cellulose filter for yeasts and molds, as specified by the
manufacturer. The dishes were then stored at 4°C until
processing.
Sample processing, yeast cultivation and isolation
Five grams of each soil sample was suspended in 5 ml
of sterile water by vigorous agitation on a vortex for
10 min. Following decantation of the coarse particulate
material, 200 μl of the suspension was seeded onto
plates containing YM medium (0.3% yeast extract,
0.3% malt extract, 0.5% peptone) supplemented with
2% glucose and 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm).
The plates were incubated at 4, 10, 15 and 22°C. Duplicate
of water sampling dishes were incubated at 4
and 10°C. The plates were incubated for 3 months and
periodically inspected for colony development. Once a
colony became visible, it was immediately transferred
to fresh YM-cm plates and incubated at the same
temperature as the source-plate. The procedure was
repeated for each soil sample to maximize the number
of isolates.
Long-term preservation of the yeast isolates was
achieved via two methods; the gelatin drop method
[42,43] and cryopreservation at −80°C in 30% glycerol.
Determination of growth temperatures and carbon
source assimilation
Yeast growth at different temperatures was assessed by a
method based on comparison of colony sizes on solid
media, which is applicable to the determination of minimum
inhibitory concentration in yeasts [44]. The yeasts
were seeded onto YM plates, incubated at 4, 10, 15, 22,
30 and 37°C, and the colony sizes were recorded daily.
For each yeast at each temperature, a plot of colony size
vs. incubation time was constructed; the temperatures at
which colony diameter increased significantly were considered
as positive for growth, while the temperature at
which the slope changed most rapidly was considered as
the “best” or “optimal” for the growth. Glucose fermentation
test were performed using a Durham tube. The
assimilation of 29 different carbon sources was determined
using the API ID 32C gallery (bioMérieux, Lyon,
France) as specified by the manufacturer. Briefly, a colony
portion was suspended in 400 μl of sterile water.
Following adjustment to A600nm≈0.5 (equivalent to 2
McFarland standard), 250 μl of the suspension was
added to an ampule of api C medium. Each well of the
strip was seeded with 135 μl of this final suspension and
incubated in a humid chamber. The turbidity (+) or lack
thereof (−) in the wells was used as indicator of growth
and was determined by visual inspection relative to the
negative control well. A bionumber code was obtained
from the data using the apiweb™ software.
DNA extraction, amplification, sequencing and analysis
50 ml of each yeast culture (A600nm = 0.6 to 0.8) was
centrifuged at 7,000 x g for 10 min, the pellet was suspended
in 5 ml of TE buffer and 300 μl aliquots of the
cellular suspension were mixed with 250 μl of 0.5 mm
diameter glass beads, vortexed for 10 min and centrifuged
at 12,000 x g for 5 min. The DNA was obtained
from 300 μl of the supernatant using the Wizard Genomic
DNA Purification kit (Promega, Madison, USA) as
specified by the manufacturer. The concentration and
integrity of the DNA samples were analyzed by electrophoresis
in 1.5% agarose gels. The D1/D2 and ITS1-
5.8S-ITS2 regions of rDNA were amplified with the primers
pairs F63/LR3 [45] and ITS1/ITS4 [46], respectively,
using Taq polymerase (Fermentas International
INC.) in thermal cyclers (Applied Biosystems). The
resulting amplicons were separated by electrophoresis in
1.5% agarose gels immersed in TAE buffer containing
ethidium bromide (0.5 μg/ml) and were purified from
the gels as described in Boyle and Lew [47]. Most of the
nucleotide sequences were determined using the sequencing
service of Macrogen INC. In some cases, the DNA
Sequencing Kit Dynamic Termination Cycle (Amersham
Biosciences Limited) and a Genetic analyzer 3100 Avant
automatic sequencer (Applied Biosystem) were used
Sampling sites
All sampling sites were located on King George Island
(62°020S 58°210W/62.033°S 58.35°W), the major island of
the Shetland South Archipelago (Figure 1). A total of 34
soil and 14 water samples were collected in January of
2009. The temperature and altitude of the sampling sites
varied from 0 to 11.9°C and from 0 to 182 m, respectively.
For soil samples, sterile 50 ml tubes were filled
with soil, sealed and stored at −20°C. For water samples,
200–500 ml of water were collected from terrestrial
sources and processed in situ using the 55-PLUS™
MONITOR system (Millipore, Billerica, MA, USA,) with
cellulose filter for yeasts and molds, as specified by the
manufacturer. The dishes were then stored at 4°C until
processing.
Sample processing, yeast cultivation and isolation
Five grams of each soil sample was suspended in 5 ml
of sterile water by vigorous agitation on a vortex for
10 min. Following decantation of the coarse particulate
material, 200 μl of the suspension was seeded onto
plates containing YM medium (0.3% yeast extract,
0.3% malt extract, 0.5% peptone) supplemented with
2% glucose and 100 μg/ml chloramphenicol (YM-cm).
The plates were incubated at 4, 10, 15 and 22°C. Duplicate
of water sampling dishes were incubated at 4
and 10°C. The plates were incubated for 3 months and
periodically inspected for colony development. Once a
colony became visible, it was immediately transferred
to fresh YM-cm plates and incubated at the same
temperature as the source-plate. The procedure was
repeated for each soil sample to maximize the number
of isolates.
Long-term preservation of the yeast isolates was
achieved via two methods; the gelatin drop method
[42,43] and cryopreservation at −80°C in 30% glycerol.
Determination of growth temperatures and carbon
source assimilation
Yeast growth at different temperatures was assessed by a
method based on comparison of colony sizes on solid
media, which is applicable to the determination of minimum
inhibitory concentration in yeasts [44]. The yeasts
were seeded onto YM plates, incubated at 4, 10, 15, 22,
30 and 37°C, and the colony sizes were recorded daily.
For each yeast at each temperature, a plot of colony size
vs. incubation time was constructed; the temperatures at
which colony diameter increased significantly were considered
as positive for growth, while the temperature at
which the slope changed most rapidly was considered as
the “best” or “optimal” for the growth. Glucose fermentation
test were performed using a Durham tube. The
assimilation of 29 different carbon sources was determined
using the API ID 32C gallery (bioMérieux, Lyon,
France) as specified by the manufacturer. Briefly, a colony
portion was suspended in 400 μl of sterile water.
Following adjustment to A600nm≈0.5 (equivalent to 2
McFarland standard), 250 μl of the suspension was
added to an ampule of api C medium. Each well of the
strip was seeded with 135 μl of this final suspension and
incubated in a humid chamber. The turbidity (+) or lack
thereof (−) in the wells was used as indicator of growth
and was determined by visual inspection relative to the
negative control well. A bionumber code was obtained
from the data using the apiweb™ software.
DNA extraction, amplification, sequencing and analysis
50 ml of each yeast culture (A600nm = 0.6 to 0.8) was
centrifuged at 7,000 x g for 10 min, the pellet was suspended
in 5 ml of TE buffer and 300 μl aliquots of the
cellular suspension were mixed with 250 μl of 0.5 mm
diameter glass beads, vortexed for 10 min and centrifuged
at 12,000 x g for 5 min. The DNA was obtained
from 300 μl of the supernatant using the Wizard Genomic
DNA Purification kit (Promega, Madison, USA) as
specified by the manufacturer. The concentration and
integrity of the DNA samples were analyzed by electrophoresis
in 1.5% agarose gels. The D1/D2 and ITS1-
5.8S-ITS2 regions of rDNA were amplified with the primers
pairs F63/LR3 [45] and ITS1/ITS4 [46], respectively,
using Taq polymerase (Fermentas International
INC.) in thermal cyclers (Applied Biosystems). The
resulting amplicons were separated by electrophoresis in
1.5% agarose gels immersed in TAE buffer containing
ethidium bromide (0.5 μg/ml) and were purified from
the gels as described in Boyle and Lew [47]. Most of the
nucleotide sequences were determined using the sequencing
service of Macrogen INC. In some cases, the DNA
Sequencing Kit Dynamic Termination Cycle (Amersham
Biosciences Limited) and a Genetic analyzer 3100 Avant
automatic sequencer (Applied Biosystem) were used
การแปล กรุณารอสักครู่..
นั้น ( − ) ในบ่อที่ถูกใช้เป็นตัวชี้วัดการเติบโต
และตั้งใจ โดยตรวจสอบเทียบกับ
ลบควบคุมอย่างดี เป็น bionumber รหัสได้จากข้อมูลการใช้ apiweb
™ซอฟต์แวร์ การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ลำดับ ( , ,
50 มิลลิลิตร ในแต่ละวัฒนธรรมยีสต์ ( a600nm = 0.6 - 0.8 ) ที่ระดับ 7 , 000 x
G สำหรับ 10 นาที เม็ด ถูกพักงาน
ปลอดเชื้อ 50 มล. หลอดเต็ม
กับดิน , ปิดผนึกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 ° C −ตัวอย่างน้ำ
200 – 500 มิลลิลิตร น้ำที่เก็บจากแหล่งบก
และประมวลผลในแหล่งกำเนิดที่ใช้ 55-plus ™
ตรวจสอบระบบ ( มิลลิ , โตเกียว , MA , USA ) กับ
เซลลูโลสกรองยีสต์และรา ตามที่ระบุไว้โดย
ผู้ผลิต อาหาร แล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C จนกระทั่ง
การประมวลผล การประมวลผล
ตัวอย่าง ,การแยกยีสต์
5 กรัมของดินแต่ละตัวอย่างถูกระงับใน 5 มล. ของน้ำหมัน โดยการกวน
เข้มแข็งใน Vortex สำหรับ 10 นาทีต่อไปนี้ decantation ของวัสดุอนุภาค
หยาบ , 200 μ L ของช่วงล่างได้เมล็ดลงบนจานที่มีขนาดกลาง (
) 0.3% ยีสต์สกัด , สารสกัดจากมอลต์
0.3 เปอร์เซ็นต์ 0.5 % ตามลำดับ ) ที่เติมกลูโคส 2
% และ 100 μ g / ml คลอแรมเฟนิคอล ( YM ซม. )วิธีการสุ่มตัวอย่างเว็บไซต์เว็บไซต์
ทั้งหมดตั้งอยู่บนเกาะคิงจอร์จ
( 62 / 020s 58 องศา 210w / 62.033 / s 58.35 ° W ) , เกาะหลักของหมู่เกาะเช็ตใต้
( รูปที่ 1 ) ทั้งหมด 34
ดินและ 14 เก็บตัวอย่างในเดือนมกราคม
2009 อุณหภูมิและความสูงของตัวอย่างเว็บไซต์
หลากหลายจาก 0 ถึง 11.9 องศา C และจาก 0 ถึง 182 เมตร ตามลำดับ
ตัวอย่างดิน
จานถูกบ่มที่ 4 , 10 , 15 และ 22 องศา ซ้ำ
น้ำตัวอย่างอาหารที่อุณหภูมิ 4
10 องศา จานถูกบ่มเป็นเวลา 3 เดือนและ
ตรวจสอบเป็นระยะ ๆเพื่อการพัฒนาประเทศอาณานิคม เมื่อ
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ทันทีโอน
สด YM ซม. แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิเดียวกัน
เป็นแหล่งแผ่น ขั้นตอนคือ
ซ้ำสำหรับแต่ละตัวอย่างดินเพื่อเพิ่มจำนวน
ของเชื้อ
ระยะยาวรักษายีสต์ไอโซเลทคือ
บรรลุผ่านสองวิธี ; เจลาตินทิ้งวิธี
[ 42,43 ] ผู้ป่วยที่ 80 °− C 30% รอล .
กำหนดอุณหภูมิของแหล่งคาร์บอน
การการเจริญเติบโตของยีสต์ที่อุณหภูมิต่างกัน คือการประเมินโดย
ซึ่งมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางโคโลนีเพิ่มขึ้นถือว่า
เป็นบวกสำหรับการเจริญเติบโตในขณะที่อุณหภูมิที่เปลี่ยนอย่างรวดเร็วที่สุดของ
ถูกถือว่าเป็น " ดี " หรือ " เหมาะสม " สำหรับการเจริญเติบโต ทดสอบการใช้ในการหมัก
เดอร์แฮมหลอด
รับของ 29 แหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกันตั้งใจ
ใช้ API ID 32c แกลเลอรี่ ( biom é rieux Lyon
,ฝรั่งเศส ) ตามที่ระบุโดยผู้ผลิต สั้น ๆ , อาณานิคม
ส่วนถูกระงับใน 400 μลิตรน้ำหมัน .
ต่อไปนี้การ a600nm ≈ 0.5 ( เทียบเท่ากับมาตรฐาน 2
แมคฟาร์แลนด์ ) , 250 μลิตรถูกระงับ
เพิ่มไปยังแอมป์ API C กลาง แต่ละคนดีของ
แถบได้เมล็ดกับ 135 μ L นี้ระงับและสุดท้าย
) ห้องชื้น ความขุ่น ( ) หรือขาด
นั้น ( − ) ในบ่อที่ถูกใช้เป็นตัวชี้วัดการเติบโต
และตั้งใจ โดยตรวจสอบเทียบกับ
ลบควบคุมอย่างดี เป็น bionumber รหัสได้จากข้อมูลการใช้ apiweb
™ซอฟต์แวร์ การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ลำดับ ( , ,
50 มิลลิลิตร ในแต่ละวัฒนธรรมยีสต์ ( a600nm = 0.6 - 0.8 ) ที่ระดับ 7 , 000 x
G สำหรับ 10 นาที เม็ด ถูกพักงาน
การเปรียบเทียบวิธีการยึดอาณานิคมขนาดสื่อของแข็ง
ซึ่งใช้ได้กับการหาความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้งยีสต์
[ 44 ] ส่วนยีสต์
ถูก seeded ลงแผ่น ) บ่มที่ 4 , 10 , 15 , 20 , 30 และ 37 /
c และอาณานิคมขนาดบันทึกได้ทุกวัน
แต่ละยีสต์ที่อุณหภูมิแต่ละจุดของอาณานิคมและระยะเวลาก่อสร้างขนาด
; อุณหภูมิที่ความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอโดยใช้ electrophoresis
ใน 1.5% เจลโรส . D1 / D2 และ its1 -
5.8s-its2 ภูมิภาคของ rDNA ถูกขยายด้วยไพรเมอร์คู่ f63
/ lr3 [ 45 ] และ its1 / its4 [ 46 ] )
( ใช้แท็กการ fermentas ระหว่างประเทศ
Inc . ) ใน cyclers ความร้อน ( Applied Biosystems )
ผล amplicons ถูกแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสใน
1ใน 5 ml ของบัฟเฟอร์ TE และ 300 μผมเฉยๆของ
ระงับเซลล์ผสม 250 μ l
เส้นผ่าศูนย์กลาง 0.5 มิลลิเมตร ลูกปัดแก้ว vortexed 10 นาทีไฟฟ้า
ที่ 12 , 000 x g 5 นาที ดีเอ็นเอได้
จาก 300 μ L ของที่นำการใช้ตัวช่วยสร้างดีเอ็นเอจีโนม
ชุดฟอก ( promega เมดิสัน สหรัฐอเมริกา )
ที่ระบุโดยผู้ผลิต ความเข้มข้นและ
ซีเควนเซอร์แบบอัตโนมัติ ( biosystem ประยุกต์ ) ใช้
5 % เจล ( แช่ในบัฟเฟอร์ที่มีแท
ทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5 μกรัม / มิลลิลิตร ) และมีความบริสุทธิ์จาก
เจลตามที่อธิบายไว้ใน บอยล์ และลิว [ 47 ] ที่สุดของลำดับนิวคลีโอไทด์
วิเคราะห์โดยใช้ลำดับ
บริการ macrogen Inc . ในบางกรณี , ดีเอ็นเอลำดับชุดแบบไดนามิกสิ้นสุดรอบ
ชีววิทยาศาสตร์ที่ จำกัด ) และวิเคราะห์พันธุกรรม 3100 Avant
และตั้งใจ โดยตรวจสอบเทียบกับ
ลบควบคุมอย่างดี เป็น bionumber รหัสได้จากข้อมูลการใช้ apiweb
™ซอฟต์แวร์ การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ลำดับ ( , ,
50 มิลลิลิตร ในแต่ละวัฒนธรรมยีสต์ ( a600nm = 0.6 - 0.8 ) ที่ระดับ 7 , 000 x
G สำหรับ 10 นาที เม็ด ถูกพักงาน
ปลอดเชื้อ 50 มล. หลอดเต็ม
กับดิน , ปิดผนึกและเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 20 ° C −ตัวอย่างน้ำ
200 – 500 มิลลิลิตร น้ำที่เก็บจากแหล่งบก
และประมวลผลในแหล่งกำเนิดที่ใช้ 55-plus ™
ตรวจสอบระบบ ( มิลลิ , โตเกียว , MA , USA ) กับ
เซลลูโลสกรองยีสต์และรา ตามที่ระบุไว้โดย
ผู้ผลิต อาหาร แล้วเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C จนกระทั่ง
การประมวลผล การประมวลผล
ตัวอย่าง ,การแยกยีสต์
5 กรัมของดินแต่ละตัวอย่างถูกระงับใน 5 มล. ของน้ำหมัน โดยการกวน
เข้มแข็งใน Vortex สำหรับ 10 นาทีต่อไปนี้ decantation ของวัสดุอนุภาค
หยาบ , 200 μ L ของช่วงล่างได้เมล็ดลงบนจานที่มีขนาดกลาง (
) 0.3% ยีสต์สกัด , สารสกัดจากมอลต์
0.3 เปอร์เซ็นต์ 0.5 % ตามลำดับ ) ที่เติมกลูโคส 2
% และ 100 μ g / ml คลอแรมเฟนิคอล ( YM ซม. )วิธีการสุ่มตัวอย่างเว็บไซต์เว็บไซต์
ทั้งหมดตั้งอยู่บนเกาะคิงจอร์จ
( 62 / 020s 58 องศา 210w / 62.033 / s 58.35 ° W ) , เกาะหลักของหมู่เกาะเช็ตใต้
( รูปที่ 1 ) ทั้งหมด 34
ดินและ 14 เก็บตัวอย่างในเดือนมกราคม
2009 อุณหภูมิและความสูงของตัวอย่างเว็บไซต์
หลากหลายจาก 0 ถึง 11.9 องศา C และจาก 0 ถึง 182 เมตร ตามลำดับ
ตัวอย่างดิน
จานถูกบ่มที่ 4 , 10 , 15 และ 22 องศา ซ้ำ
น้ำตัวอย่างอาหารที่อุณหภูมิ 4
10 องศา จานถูกบ่มเป็นเวลา 3 เดือนและ
ตรวจสอบเป็นระยะ ๆเพื่อการพัฒนาประเทศอาณานิคม เมื่อ
อาณานิคมกลายเป็นมองเห็นได้ทันทีโอน
สด YM ซม. แผ่นและบ่มที่อุณหภูมิเดียวกัน
เป็นแหล่งแผ่น ขั้นตอนคือ
ซ้ำสำหรับแต่ละตัวอย่างดินเพื่อเพิ่มจำนวน
ของเชื้อ
ระยะยาวรักษายีสต์ไอโซเลทคือ
บรรลุผ่านสองวิธี ; เจลาตินทิ้งวิธี
[ 42,43 ] ผู้ป่วยที่ 80 °− C 30% รอล .
กำหนดอุณหภูมิของแหล่งคาร์บอน
การการเจริญเติบโตของยีสต์ที่อุณหภูมิต่างกัน คือการประเมินโดย
ซึ่งมีขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางโคโลนีเพิ่มขึ้นถือว่า
เป็นบวกสำหรับการเจริญเติบโตในขณะที่อุณหภูมิที่เปลี่ยนอย่างรวดเร็วที่สุดของ
ถูกถือว่าเป็น " ดี " หรือ " เหมาะสม " สำหรับการเจริญเติบโต ทดสอบการใช้ในการหมัก
เดอร์แฮมหลอด
รับของ 29 แหล่งคาร์บอนที่แตกต่างกันตั้งใจ
ใช้ API ID 32c แกลเลอรี่ ( biom é rieux Lyon
,ฝรั่งเศส ) ตามที่ระบุโดยผู้ผลิต สั้น ๆ , อาณานิคม
ส่วนถูกระงับใน 400 μลิตรน้ำหมัน .
ต่อไปนี้การ a600nm ≈ 0.5 ( เทียบเท่ากับมาตรฐาน 2
แมคฟาร์แลนด์ ) , 250 μลิตรถูกระงับ
เพิ่มไปยังแอมป์ API C กลาง แต่ละคนดีของ
แถบได้เมล็ดกับ 135 μ L นี้ระงับและสุดท้าย
) ห้องชื้น ความขุ่น ( ) หรือขาด
นั้น ( − ) ในบ่อที่ถูกใช้เป็นตัวชี้วัดการเติบโต
และตั้งใจ โดยตรวจสอบเทียบกับ
ลบควบคุมอย่างดี เป็น bionumber รหัสได้จากข้อมูลการใช้ apiweb
™ซอฟต์แวร์ การสกัดดีเอ็นเอและการวิเคราะห์ลำดับ ( , ,
50 มิลลิลิตร ในแต่ละวัฒนธรรมยีสต์ ( a600nm = 0.6 - 0.8 ) ที่ระดับ 7 , 000 x
G สำหรับ 10 นาที เม็ด ถูกพักงาน
การเปรียบเทียบวิธีการยึดอาณานิคมขนาดสื่อของแข็ง
ซึ่งใช้ได้กับการหาความเข้มข้นต่ำสุดในการยับยั้งยีสต์
[ 44 ] ส่วนยีสต์
ถูก seeded ลงแผ่น ) บ่มที่ 4 , 10 , 15 , 20 , 30 และ 37 /
c และอาณานิคมขนาดบันทึกได้ทุกวัน
แต่ละยีสต์ที่อุณหภูมิแต่ละจุดของอาณานิคมและระยะเวลาก่อสร้างขนาด
; อุณหภูมิที่ความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอโดยใช้ electrophoresis
ใน 1.5% เจลโรส . D1 / D2 และ its1 -
5.8s-its2 ภูมิภาคของ rDNA ถูกขยายด้วยไพรเมอร์คู่ f63
/ lr3 [ 45 ] และ its1 / its4 [ 46 ] )
( ใช้แท็กการ fermentas ระหว่างประเทศ
Inc . ) ใน cyclers ความร้อน ( Applied Biosystems )
ผล amplicons ถูกแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสใน
1ใน 5 ml ของบัฟเฟอร์ TE และ 300 μผมเฉยๆของ
ระงับเซลล์ผสม 250 μ l
เส้นผ่าศูนย์กลาง 0.5 มิลลิเมตร ลูกปัดแก้ว vortexed 10 นาทีไฟฟ้า
ที่ 12 , 000 x g 5 นาที ดีเอ็นเอได้
จาก 300 μ L ของที่นำการใช้ตัวช่วยสร้างดีเอ็นเอจีโนม
ชุดฟอก ( promega เมดิสัน สหรัฐอเมริกา )
ที่ระบุโดยผู้ผลิต ความเข้มข้นและ
ซีเควนเซอร์แบบอัตโนมัติ ( biosystem ประยุกต์ ) ใช้
5 % เจล ( แช่ในบัฟเฟอร์ที่มีแท
ทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5 μกรัม / มิลลิลิตร ) และมีความบริสุทธิ์จาก
เจลตามที่อธิบายไว้ใน บอยล์ และลิว [ 47 ] ที่สุดของลำดับนิวคลีโอไทด์
วิเคราะห์โดยใช้ลำดับ
บริการ macrogen Inc . ในบางกรณี , ดีเอ็นเอลำดับชุดแบบไดนามิกสิ้นสุดรอบ
ชีววิทยาศาสตร์ที่ จำกัด ) และวิเคราะห์พันธุกรรม 3100 Avant
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- my notes at work.
- I promise i will never never share my lo
- Missing the band in the waist but easily
- จิ่น
- so now, i need a good girl that is good
- ลูกพี่ลูกน้อง
- Poor heart
- เวลาที่ฉันไม่ว่าง
- ซูลี่
- คุรอาจแนะนำหนังให้ฉันได้
- ฉันชื่อ บงกช นาคนวล เมื่อตอนปิดเทอม 3 เด
- โมเลกุลของสารที่สามารถจับกับตัวรับและสาม
- 6.3.2 Substitution
- การเมือง
- Inner cushion is filled with polyester f
- so now, i need a good girl that is good
- หมู
- ค่าเสื่อมราคาเครื่องจักรและอุปกรณ์
- In the past, Simple life Abundant fruit
- so now, i need a good girl that is good
- เพื่อนคือคนสำคัญ
- เป็นคนมนุษย์สัมพันธ์ดี
- so now, i need a good girl that is good
- the act of buying something for someone
