PCR amplifications were performed i

PCR amplifications were performed in 0.5 ml PCR tube. The reaction mixture
consisted of bacterial DNA−10 ng, forward and reverse primers−1.5 μl each, 10
Taq
reaction buffer−10.0 μl, Taq polymerase−5 units, 5 mM dNTPs mix−2.0 μl and distilled
water—to make 100 μl. PCR-amplification was accomplished in a programmable DNA
thermocycler (Mastercycler Gradient- eppendorf™) using the following PCR program:
95 1C for 5 min, (95 1C for 1 min, 53 1C for 2 min, 72 1C for 2 min)
28 cycles, 72 1C for
5 min and stored at 4 1C. 10 μl aliquot from the PCR amplification product was resolved
by horizontal agarose gel electrophoresis using 0.7 per cent (w/v) agarose gel
(supplemented with ethidium bromide @ 1.0 mg l−1
) in TAE buffer. For this purpose,
10 μl of PCR product was mixed with 2 μl of 6
‘gel loading buffer’ (0.25%
bromophenol blue−0.25% xylene cyanol–30% glycerol in water) and mixture was
loaded into the wells of agarose gel. The gel was subjected to electrophoresis at
constant voltage (75 V) for 1 h. The molecular size of the amplified products in the gel
were visualized under UV-transilluminator (using low intensity of UV light) and
recorded with a Gel documentation system (Ultra cam). Size of amplified bands was
ascertained by co-running a molecular weight standard (100 bp DNA ladder plus,
Fermentas Life Sciences) along with the samples in the gel.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เครื่องขยายเสียง PCR ได้ดำเนินการใน 0.5 มล. หลอด PCR ผสมปฏิกิริยาประกอบด้วยงะดีเอ็นเอ-10 แบคทีเรียไปข้างหน้าและไพรเมอร์-1.5 ไมโครลิตรแต่ละย้อนกลับ 10?
Taq
ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ 10.0 ไมโครลิตร, Taq โพลิเมอร์-5 คัน 5 มิลลิ dNTPs ผสม 2.0
ไมโครลิตรและกลั่นน้ำที่จะทำให้100 ไมโครลิตร PCR-ขยายก็ประสบความสำเร็จในดีเอ็นเอโปรแกรม
thermocycler (Mastercycler Gradient- Eppendorf ™) โดยใช้โปรแกรม PCR ต่อไปนี้:
95 1C เวลา 5 นาที (95 1C เวลา 1 นาที 53 1C เป็นเวลา 2 นาที 72 1C 2 นาที) 28 รอบ 72 1C สำหรับ
5 นาทีและเก็บไว้ที่ 4 1C 10 aliquot ไมโครลิตรจากผลิตภัณฑ์ขยาย PCR
ได้รับการแก้ไขโดยข่าวคราวagarose แนวนอนโดยใช้ร้อยละ 0.7 (w / v) เจล agarose
(เสริมด้วย ethidium bromide @ 1.0 mg
l-1) ในบัฟเฟอร์ TAE เพื่อจุดประสงค์นี้
10 ไมโครลิตรของผลิตภัณฑ์ PCR ผสมกับ 2 ไมโครลิตร 6? 'เจลบัฟเฟอร์โหลด (0.25%
bromophenol สีฟ้า 0.25% ไซลีนกลีเซอรอล cyanol-30% ในน้ำ)
และส่วนผสมที่ถูกโหลดลงในหลุมของเจลagarose เจลก็จะถูกอิเล็กที่แรงดันคงที่ (75 V) เป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ขนาดโมเลกุลของผลิตภัณฑ์ที่ขยายในเจลถูกมองเห็นภายใต้ UV-transilluminator (โดยใช้ความเข้มต่ำของแสง UV) และบันทึกด้วยระบบเอกสารเจล(เวบอัลตร้า) ขนาดของวงดนตรีที่ได้รับการขยายการตรวจสอบโดยร่วมทำงานมาตรฐานน้ำหนักโมเลกุล (100 bp บันไดดีเอ็นเอบวก Fermentas Life Sciences) พร้อมด้วยตัวอย่างในเจล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

PCR amplifications จำนวน 0.5 มล. PCR ในหลอด ปฏิกิริยาผสม
มีดีเอ็นเอของแบคทีเรีย− 10 ng ไปข้างหน้าและย้อนกลับด้วย− 1.5 μ L แต่ละ 10
แทค
ปฏิกิริยาบัฟเฟอร์− 10.0 μ L , แท็กการ− 5 หน่วย , 5 dntps มิลลิเมตรผสม− 2.0 μ L และกลั่น
น้ำให้ 100 μ L . ) ประสบความสำเร็จในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอ
ตั้งโปรแกรมเทอร์มอไซเคล ์ ( mastercycler ลาด - เพนดอร์ฟ™ ) โดยใช้เทคนิคโปรแกรมต่อไปนี้ :
c 95 นาน 5 นาที ( 95 ใน 1 นาที , 53 1C 2 นาที 72 1C 2 นาที )
28 รอบ 72 c สำหรับ
5 นาทีและเก็บไว้ที่ 4 1c ส่วนลงตัว L 10 μจาก PCR เพิ่มจำนวน สินค้าถูกแก้ไขโดยวิธีเจล (
แนวนอนใช้ 0.7 เปอร์เซ็นต์ ( w / v ) เจล
( เติมโบรไมด์คู่ @ 1.0 mg L − 1
แท ) ในบัฟเฟอร์ เพื่อวัตถุประสงค์นี้
10 μ l ผลิตภัณฑ์ PCR ผสมกับ 2 μลิตร 6
โหลดบัฟเฟอร์ ' ' เจล ( 0.25 %
โบรโมฟีนอลบลู− 0.25% ไซลีน cyanol – 30 % กลีเซอรอลในน้ำ ) และส่วนผสม
โหลดลงในบ่อเจล . เจลอิเลคโตรโฟรีซีสภายใต้แรงดัน ( V
คงที่ที่ 75 ) เป็นเวลา 1 ชั่วโมงขนาดโมเลกุลของเบสเจล
ผลิตภัณฑ์ในเป็นปรากฏการณ์ภายใต้ UV transilluminator ( โดยใช้ความเข้มต่ำของแสง UV ) และ
บันทึกด้วยระบบเอกสารเจล ( Ultra CAM ) ขนาดของการขยายวงได้
โดย Co วิ่งมาตรฐานน้ำหนักโมเลกุล ( 100 คู่เบสดีเอ็นเอบันไดแล้ว
fermentas วิทยาศาสตร์ชีวภาพ ) พร้อมกับตัวอย่างในเจล