Because NO is one of modulators of

Because NO is one of modulators of apoptosis of inflammatory cells [16], we next examined whether SNP treatment induce apoptosis of myeloid cells infiltrated in damaged muscle. Using immunofluorecence staining and cell counting, we found SNP injection induced more severe inflammatory cells apoptosis in damaged muscle: CD11b+caspase-3+ cells were about 55.6%, and 76.4% of the total of CD11b+ cells, on the day 4 and 7 post-injury, respectively. However, double staining cells increased to 84.5%, and 82.5% respectively after SNP treating (Fig.7). These data suggest that NO acts as an anti-inflammatory role by blocking the intramuscular infiltration, and by inducing the apoptosis of innate leukocytes.

Nitric Oxide Inhibits the Production of Pro-inflammatory Cytokines and Chemokines in the Notexin-Injuried Muscle

Monocytes and macrophages dominate a basic inflammatory response to muscle damage, which are a rich source of diverse cytokines and chemokines at the site of inflammation [17]. To evaluate more directly how the muscle inflammation response is affected by NO molecule, we next analyzed the expression of selected pro-inflammatory cytokines involving TNF-α, IL-1 and IL-6; anti-inflammatory cytokines involving TGF-β and IL-10, and the macrophage-sourced chemokines involving MIP-1α, MCP-1 and MCP-3, which have been associated with the preferential biological role during the muscle damage-induced inflammation response. In agreement with previous reports [15], our qPCR analysis demonstrated the up-regulation of mRNA level of TGF-β (on day 4 and 7) and IL-10 (on day 4) in TA muscle after myoinjury. However, we did not find SNP and L-NAME treatment effected on mRNA levels of TGF-β and IL-10 in Notexin-injected TA muscle (data not shown).

Noteworthy, SNP treatment resulted in a significant down-regulation of mRNA levels of pro-inflammatory TNF-α and IL-6 in damaged muscle, compared to that of muscle damaged alone, and this inhibition tendency maintained during the muscle necrosis (day 4) and repair processes (day 7) (Fig. 8A). In contrast, L-NAME stimulated a conspicuous production of TNF-α and IL-6, as mRNA levels of them in damaged TA muscle of mice treating with L-NAME were nearly the double of that damaged alone (Fig. 8A).

Similarly to what was observed above, we noticed that, after changing NO level in vivo artificially, the expression of macrophage-sourced chemokines in TA muscle was changed on day 4 and 7 post-injury: SNP treatment effectively diminished mRNA levels of MIP-1α, MCP-1, and MCP-3 (Fig. 8B). Conversely, L-NAME treatment resulted in a striking increase in the production of these genes (Fig. 8B). Taken together, these results collectively confirm that NO is crucial for the negative regulation of pro-inflammatory cytokines and chemokines production in damaged muscle tissue.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื่องจากไม่เป็นหนึ่งของข้อของ apoptosis ของเซลล์อักเสบ [16], เราถัดไปตรวจสอบว่า SNP รักษาก่อให้เกิด apoptosis ของเซลล์ชนิดไมอิลอยด์ถูกแทรกซึมในกล้ามเนื้อเสียหาย ใช้ immunofluorecence ย้อมสีและการนับเซลล์ เราพบ SNP ฉีดเกิด apoptosis เซลล์อักเสบรุนแรงมากขึ้นในกล้ามเนื้อเสียหาย: CD11b + caspase-3 + เซลล์มีประมาณ 55.6%, 76.4% ของผลรวมของ CD11b + เซลล์ บริเวณที่ 4 และ 7 หลังบาดเจ็บ ตามลำดับ อย่างไรก็ตาม คู่ย้อมสีเซลล์เพิ่ม 84.5% และ 82.5 อาศานั้น%ตามลำดับหลังจาก SNP ที่รักษา (Fig.7) แนะนำข้อมูลเหล่านี้ที่ไม่กระทำเป็นบทบาทแก้อักเสบ โดยบล็อกแทรกซึมบาดทะยักจาก และ inducing apoptosis ของ leukocytes ข้อสอบไนตริกออกไซด์ยับยั้งการผลิต Cytokines Pro-อักเสบและ Chemokines ในกล้ามเนื้อ Notexin Injuriedบังเอิญและ monocytes ครองความเสียหายของกล้ามเนื้อ ตอบอักเสบเป็นพื้นฐานซึ่งเป็นแหล่งอุดมไปด้วยหลากหลาย cytokines และ chemokines ที่ไซต์ของ [17] การประเมินเพิ่มเติมโดยตรงวิธีการตอบสนองการอักเสบของกล้ามเนื้อได้รับผลกระทบ โดยโมเลกุลไม่ เราถัดไปวิเคราะห์ค่าของ cytokines pro-อักเสบเลือกที่เกี่ยวข้องกับ TNF-α IL-1 และ IL-6 cytokines แก้อักเสบที่เกี่ยวข้องกับ TGF-β และ IL-10 และที่ macrophage มา chemokines เกี่ยว MIP 1α, MCP 1 และ MCP-3 ที่มีสัมพันธ์กับบทบาททางชีวภาพต้องระหว่างการตอบสนองของกล้ามเนื้ออักเสบทำให้เกิดความเสียหาย เราวิเคราะห์ qPCR สาธิตกฎระเบียบระดับ mRNA ของ TGF-β (ในวันที่ 4 และ 7) และ IL-10 (ในวันที่ 4) ในกล้ามเนื้อตาหลัง myoinjury ยังคงรายงานก่อนหน้านี้ [15], อย่างไรก็ตาม เราไม่พบ SNP และชื่อ L รักษาผลระดับ mRNA ของ TGF-βและ IL-10 ในกล้ามเนื้อฉีด Notexin TA (ข้อมูลไม่แสดง)น่าสนใจ ผลรักษา SNP ในลงควบคุมอย่างมีนัยสำคัญที่ระดับ mRNA ของ TNF-αและ IL-6 pro-อักเสบในเสียกล้ามเนื้อ เปรียบเทียบการที่กล้ามเนื้อเสียหายคนเดียว และแนวโน้มนี้ยับยั้งการเก็บรักษาระหว่างการตายเฉพาะส่วนของกล้ามเนื้อ (4 วัน) และกระบวนการซ่อมแซม (7 วัน) (Fig. 8A) ในทางตรงกันข้าม ชื่อ L ถูกกระตุ้นเป้าการผลิต TNF-αและ IL-6 เป็นระดับ mRNA ของกล้ามเนื้อตาเสียหายของหนูรักษา ด้วยชื่อ L เกือบถูกคู่ที่เสียหายเพียงอย่างเดียว (Fig. 8A)ในทำนองเดียวกัน กับสิ่งที่พบข้างต้น เราพบว่า หลังจากเปลี่ยนระดับไม่ในสัตว์ทดลองเหือด นิพจน์ของ macrophage มา chemokines ในกล้ามเนื้อตาถูกเปลี่ยนแปลงบน 4 และ 7 หลังบาดเจ็บ: SNP รักษามีประสิทธิภาพลดลงระดับ mRNA ของ MIP-1α, MCP 1 และ MCP-3 (Fig. 8B) ในทางกลับกัน ชื่อ L รักษาผลในการเพิ่มความโดดเด่นในการผลิตของยีนเหล่านี้ (Fig. 8B) ปวง ผลลัพธ์เหล่านี้โดยรวมยืนยันว่า ไม่มีความสำคัญในการควบคุมค่าลบของผลิต cytokines และ chemokines pro-อักเสบในเนื้อเยื่อกล้ามเนื้อเสียหาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เพราะไม่มีเป็นหนึ่งใน modulators ของการตายของเซลล์อักเสบ [16] เราต่อไปตรวจสอบว่าการรักษา SNP เหนี่ยวนำให้เกิดการตายของเซลล์เม็ดเลือดขาวชนิดแทรกซึมเข้าไปในกล้ามเนื้อได้รับความเสียหาย ใช้การย้อมสี immunofluorecence และการนับเซลล์เราพบว่าการฉีด SNP เหนี่ยวนำให้เซลล์อักเสบรุนแรงมากขึ้น apoptosis ในกล้ามเนื้อเสียหาย: CD11b + caspase-3 + เซลล์อยู่ประมาณ 55.6% และ 76.4% ของจำนวน CD11b + เซลล์ในวันที่ 4 และ 7 โพสต์ -injury ตามลำดับ อย่างไรก็ตามเซลล์ย้อมสีคู่ที่เพิ่มขึ้นถึง 84.5% และ 82.5% ตามลำดับหลังจาก SNP รักษา (รูปที่ 7) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่าการกระทำที่ไม่เป็นบทบาทต้านการอักเสบโดยการปิดกั้นการแทรกซึมเข้ากล้ามเนื้อและกระตุ้นให้เกิดการตายของเซลล์เม็ดเลือดขาวโดยธรรมชาติ. ไนตริกออกไซด์ช่วยยับยั้งการผลิต Cytokines Pro อักเสบและ Chemokines ใน Notexin-บาดเจ็บกล้ามเนื้อMonocytes และ macrophages ครอง ตอบสนองการอักเสบขั้นพื้นฐานไปสู่ความเสียหายของกล้ามเนื้อซึ่งเป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยความหลากหลายและ cytokines chemokines ที่เว็บไซต์ของการอักเสบ [17] เพื่อประเมินโดยตรงวิธีการตอบสนองต่อการอักเสบของกล้ามเนื้อได้รับผลกระทบโดยโมเลกุลไม่มีเราต่อไปวิเคราะห์การแสดงออกของ cytokines pro อักเสบเลือกที่เกี่ยวข้องกับ TNF-α, IL-1 และ IL-6; cytokines ต้านการอักเสบที่เกี่ยวข้องกับ TGF-βและ IL-10 และ chemokines macrophage ที่มาเกี่ยวข้องกับ MIP-1α, MCP-1 และ MCP-3 ซึ่งได้รับการที่เกี่ยวข้องกับบทบาททางชีวภาพที่พิเศษในระหว่างการตอบสนองต่อการอักเสบความเสียหายที่เกิดขึ้นในกล้ามเนื้อ ในข้อตกลงกับรายงานก่อนหน้านี้ [15] การวิเคราะห์ของเราแสดงให้เห็นถึง qPCR ขึ้นระเบียบของระดับ mRNA ของ TGF-β (ในวันที่ 4 และ 7) และ IL-10 (ในวันที่ 4) ในกล้ามเนื้อ TA หลังจาก myoinjury แต่เราไม่พบการรักษา SNP และ L-NAME ได้รับผลกระทบในระดับ mRNA ของ TGF-βและ IL-10 ในกล้ามเนื้อ TA Notexin ฉีด (ไม่ได้แสดงข้อมูล). สำคัญการรักษา SNP ผลอย่างมีนัยสำคัญในกฎระเบียบลงของระดับ mRNA โปรอักเสบ TNF-αและ IL-6 ในกล้ามเนื้อเสียหายเทียบกับที่ของกล้ามเนื้อได้รับความเสียหายเพียงอย่างเดียวและแนวโน้มการยับยั้งการบำรุงรักษาในช่วงนี้เนื้อร้ายของกล้ามเนื้อ (4 วัน) และกระบวนการซ่อมแซม (7 วัน) (รูป. 8A) ในทางตรงกันข้าม, L-NAME กระตุ้นการผลิตที่เห็นได้ชัดเจนของ TNF-αและ IL-6 เป็นระดับ mRNA ของพวกเขาในกล้ามเนื้อ TA เสียหายของหนูรักษาด้วย L-ชื่อเป็นเกือบสองเท่าของที่ได้รับความเสียหายเพียงอย่างเดียว (รูป. 8A). ในทำนองเดียวกัน กับสิ่งที่เป็นข้อสังเกตข้างต้นเราสังเกตเห็นว่าหลังจากที่มีการเปลี่ยนแปลงระดับในร่างกาย NO เทียม, การแสดงออกของ chemokines macrophage มาในกล้ามเนื้อ TA ก็เปลี่ยนในวันที่ 4 และ 7 โพสต์ได้รับบาดเจ็บรักษา SNP ลดลงอย่างมีประสิทธิภาพระดับ mRNA ของ MIP-1α, MCP-1, และ MCP-3 (รูป. 8B) ตรงกันข้ามการรักษา L-ชื่อผลในการเพิ่มขึ้นโดดเด่นในการผลิตของยีนเหล่านี้ (รูป. 8B) ที่ร่วมกันผลลัพธ์เหล่านี้รวมเรียกว่ายืนยันว่าไม่เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการควบคุมเชิงลบของ cytokines โปรอักเสบและการผลิต chemokines ในเนื้อเยื่อของกล้ามเนื้อได้รับความเสียหาย

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพราะไม่ได้เป็นหนึ่งของ modulators การตายแบบ apoptosis ของการอักเสบเซลล์ [ 16 ] เราถัดไปตรวจสอบว่า SNP รักษาให้เกิด apoptosis ของชนิดเซลล์แทรกซึมเข้าไปในกล้ามเนื้อเสียหาย การใช้ immunofluorecence staining และเซลล์นับ เราพบฉีดกระตุ้นการอักเสบรุนแรงมากขึ้น SNP ( เซลล์กล้ามเนื้อที่เสียหาย : cd11b การศึกษาลักษณะเซลล์เกี่ยวกับ 55.6 ร้อยละ 764 % ของทั้งหมดของ cd11b เซลล์ ในวันที่ 4 และ 7 หลังการบาดเจ็บ ตามลำดับ อย่างไรก็ตาม คู่จากเซลล์เพิ่มขึ้น 84.5 ร้อยละ 82.5 ตามลำดับ หลังการรักษา ( SNP fig.7 ) ข้อมูลเหล่านี้ชี้ให้เห็นว่า ไม่ทำหน้าที่เป็นบทบาทที่ต้านการอักเสบโดยการปิดกั้นการแทรกซึม การฉีด และกระตุ้นการเซลล์ของเม็ดเลือดขาว . .

ไนตริก ออกไซด์ยับยั้งการผลิต cytokines โปรอักเสบ และคีโมไคนส์ใน notexin บาดเจ็บกล้ามเนื้อ

โมโนไซท macrophages ครองพื้นฐานและการตอบสนองการอักเสบของกล้ามเนื้อเสีย ซึ่งเป็นแหล่งที่อุดมไปด้วยสารที่มีความหลากหลายและคีโมไคนส์ ที่เว็บไซต์ของการอักเสบ [ 17 ] ประเมินโดยตรงว่ากล้ามเนื้ออักเสบ การตอบสนองจะได้รับผลกระทบ โดยไม่มีโมเลกุลเราต่อไปวิเคราะห์การแสดงออกของ pro-inflammatory cytokines TNF - ที่เกี่ยวข้องกับαและ anti-inflammatory cytokines IL-1 , สร้าง ; ที่เกี่ยวข้องกับ tgf - บีตา และเตอร์และแมคโครฟาจที่มาเกี่ยวข้องกับ mip-1 αคีโมไคนส์ , และ mcp-3 ได้ดี ซึ่งมีความเกี่ยวข้องกับสิทธิพิเศษทางชีวภาพบทบาทระหว่างความเสียหายของกล้ามเนื้อกระตุ้นการตอบสนองการอักเสบ สอดคล้องกับรายงานก่อนหน้านี้ [ 15 ]การวิเคราะห์ของเราแสดงให้เห็นถึง qpcr การควบคุมระดับ mRNA ของ tgf - บีตา ( ในวันที่ 4 และ 7 ) และเตอร์ ( วันที่ 4 ) ทากล้ามเนื้อหลัง myoinjury . แต่ก็ไม่พบว่ามีผลต่อระดับสารรักษาและ SNP mRNA และ tgf - บีตาเตอร์ใน notexin ฉีดทากล้ามเนื้อ ( ข้อมูลไม่แสดง ) .

อํานาจSNP รักษามีผลใน down-regulation อย่างมีนัยสำคัญของระดับ mRNA ของ pro-inflammatory และ TNF - αสร้างกล้ามเนื้อเสียหาย เมื่อเทียบกับที่ของกล้ามเนื้อเสียหาย เท่านั้น และการรักษานี้มีแนวโน้มในกล้ามเนื้อของ ( วันที่ 4 ) และกระบวนการซ่อมแซม ( 7 วัน ) ( ภาพที่ 8A ) ในทางตรงกันข้าม , L-NAME กระตุ้นการผลิตเม็ดเลือดขาว และสร้างจุดเด่นของα ,เป็นระดับ mRNA ของพวกเขาในความเสียหายตา กล้ามเนื้อของหนูเลี้ยงให้เกือบสองเท่าของที่เสียหายคนเดียว ( ภาพที่ 8A )

เหมือนกับสิ่งที่พบข้างต้น เราสังเกตเห็นว่า หลังจากเปลี่ยนระดับโดยไม่ตั้งใจ การแสดงออกของแมคโครฟาจที่มาคีโมไคนส์ในทากล้ามเนื้อมีการเปลี่ยนแปลงในวันที่ 4 และ 7 โพสต์การรักษาบาดเจ็บ : SNP ได้อย่างมีประสิทธิภาพลดลงระดับ mRNA ของα mip-1 ,ได้ดี และ mcp-3 ( รูปที่ใส่ ) ในทางกลับกัน ให้มีผลในการเพิ่มการรักษาที่โดดเด่นในการผลิตของยีนเหล่านี้ ( รูปที่ใส่ ) ถ่ายด้วยกัน ผลลัพธ์เหล่านี้ร่วมกัน ยืนยันว่าไม่สําคัญสําหรับควบคุมเชิงลบของการผลิต cytokines pro-inflammatory คีโมไคนส์ในความเสียหายกล้ามเนื้อเนื้อเยื่อ