2. Material and methods2.1. Ferment

2. Material and methods
2.1. Fermentation of the rice bran
2.1.1. Preparation of inoculum
The fungus R. oryzae (CCT 1217), was obtained from the André
Tosello Foundation (FAT), Campinas, Brazil. The cultures were maintained
at 4 C in slants of potato dextrose agar (PDA, Acumedia).
The spores were spread by adding 5 mL of an aqueous emulsion
(Tween 80 at 0.2%v/v) and they were incubated for 7 days at 30 C
until a whole new sporulation of the fungus by adding 0.2 mL of
the emulsion in Petri dishes containing potato dextrose agar. Spore
suspension for fermentation was achieved by adding 10 mL of an
aqueous emulsion of Tween 80 (0.2%) to each plate. The release of
spores was obtained by scraping the plates with a Drigalski handle
and the concentrated spores solution was estimated by enumeration
in a Neubauer chamber (L. Opitik, Germany).
2.1.2. Fermentation process
The rice bran (rice variety BR-IRGA 417) used as substrate in
fermentation was provided by industries from Rio Grande do Sul,
with their particles size standardised to particles smaller than 32
mesh, and packed in 100 g in tray bioreactors (12  8  4 cm3) arranged
in 2 cm layers, covered with sterilized gauze and cotton to
allow aeration and prevent external contamination. The reactors
containing the substrate were added in a nutrient solution (2 g/L
KH2PO4, 1 g/L MgSO4 and 8 g/L (NH4)2SO4 in 0.4 N HCl) sterilized
by filtration in Millipore membrane of 0.45 lm (Oliveira et al.,
2010).
The spores solution of the fungus R. oryzae was added at an initial
concentration of 4  106 spores/gbran. Distilled water was
added to the medium in order to adjust the humidity to 50%. The
bioreactors were placed in a fermentation chamber at 30 C with
controlled humidity. Upon expiry of the incubation time (0–
120 h, with sampling every 24 h), the fermented biomass was
stored at 18 C.
2.1.3. Biomass
The biomass generated during the fermentation process was
indirectly estimated by the glucosamine content (Aidoo, Henry, &
Wood, 1981). The glucosamine content was estimated spectrophotometrically
(Biospectro, Brazil) at 530 nm using a standard curve
of glucosamine (Sigma, USA) in water (1–15 mg/mL). The amount
of glucosamine in rice bran (not fermented) was subtracted
from the fermented bran with the biomass being expressed as
mgglucosamine/gbran in dry base.
2.2. Extraction of phenolic compounds
Phenolic compounds from fermented rice bran were extracted
with methanol at a ratio of 1:10 (w/v), following the method described
by Souza, Oliveira, Rocha, and Furlong (2010). Samples of
5 g were subjected to orbital shaking (150 rpm) at room temperature
for 3 h with methanol and the extract obtained was filtered
through filter paper (Whatman n 4) into a separating funnel and
washed three times with 10 mL of hexane. The methanolic extract
was evaporated on a rota-evaporator at 50 C under reduced pressure
and the phenolic compounds were resuspended with 10 ml of
distilled water in an ultrasonic bath for 10 min. The resulting extract
was clarified with 5 ml of 0.1 M ZnSO4 and 5 mL of 0.1 M
Ba(OH)2, and allowed to rest for 20 min. After centrifugation
(10 min, 25 C, 3200g,) the supernatant containing the phenolic
compound was collected, lyophilized and quantified spectrophotometrically
at 750 nm with Folin–Ciocalteau reagent (Qell, Brazil)
using ferulic acid (Sigma, Japan) as standard (2–20 lg/ml).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1 การหมักรำข้าว2.1.1 การเตรียม inoculumการเชื้อรา R. แห้งระดับต่าง ๆ (CCT 1217), ได้รับจาก AndréTosello มูลนิธิ (FAT), Campinas บราซิล มีรักษาวัฒนธรรมที่ C 4 ใน slants ของมันฝรั่งขึ้น agar (PDA, Acumedia)เพาะเฟิร์นจะถูกแพร่กระจาย โดยเพิ่ม 5 mL ของอิมัลชันอควี(Tween 80 ที่ 0.2%v/v) และพวกเขาได้ incubated สำหรับวันที่ 30 Cจน sporulation ใหม่ของเชื้อราโดยการเพิ่ม 0.2 mL ของอิมัลชันใน Petri อาหารที่มีมันฝรั่งขึ้น agar สปอร์หยุดการหมักสำเร็จ โดยเพิ่ม 10 mL ของการอควีอิมัลชัน Tween 80 (0.2%) ให้แต่ละแผ่น ปล่อยของเพาะเฟิร์นกล่าว โดย scraping แผ่น มีหู Drigalskiและแก้ปัญหาเพาะเฟิร์นเข้มข้นถูกประเมิน โดยการแจงนับในห้องมี Neubauer (L. Opitik เยอรมนี)2.1.2 การหมักรำข้าว (ข้าวหลากหลาย BR IRGA 417) ที่ใช้เป็นพื้นผิวในหมักได้รับอุตสาหกรรมจากริโอแกรนด์โดเนมีขนาดอนุภาคกับอนุภาคที่มีขนาดเล็กกว่า 32 แบบตาข่าย และ 100 กรัมบรรจุในในถาด bioreactors (12 8 4 cm3) จัดในชั้น 2 ซม. ปกคลุม ด้วย sterilized ผ้าพันแผลและผ้าฝ้ายเพื่ออนุญาต aeration และป้องกันการปนเปื้อนภายนอก เตาปฏิกรณ์ประกอบด้วยพื้นผิวถูกเพิ่มในโซลูชันธาตุอาหาร (2 กรัม/ลิตร1 บัญชี MgSO4, KH2PO4 และ 8 g/L (NH4) 2SO4 ใน 0.4 N HCl) sterilizedโดยการกรองในเมมเบรนมากของ 0.45 lm (Oliveira et al.,2010).The spores solution of the fungus R. oryzae was added at an initialconcentration of 4  106 spores/gbran. Distilled water wasadded to the medium in order to adjust the humidity to 50%. Thebioreactors were placed in a fermentation chamber at 30 C withcontrolled humidity. Upon expiry of the incubation time (0–120 h, with sampling every 24 h), the fermented biomass wasstored at 18 C.2.1.3. BiomassThe biomass generated during the fermentation process wasindirectly estimated by the glucosamine content (Aidoo, Henry, &Wood, 1981). The glucosamine content was estimated spectrophotometrically(Biospectro, Brazil) at 530 nm using a standard curveof glucosamine (Sigma, USA) in water (1–15 mg/mL). The amountof glucosamine in rice bran (not fermented) was subtractedfrom the fermented bran with the biomass being expressed asmgglucosamine/gbran in dry base.2.2. Extraction of phenolic compoundsPhenolic compounds from fermented rice bran were extractedwith methanol at a ratio of 1:10 (w/v), following the method describedby Souza, Oliveira, Rocha, and Furlong (2010). Samples of5 g were subjected to orbital shaking (150 rpm) at room temperaturefor 3 h with methanol and the extract obtained was filteredthrough filter paper (Whatman n 4) into a separating funnel andwashed three times with 10 mL of hexane. The methanolic extractwas evaporated on a rota-evaporator at 50 C under reduced pressureและสารฟีนอมี resuspended กับ 10 ml ของกลั่นน้ำในการอาบน้ำของอัลตราโซนิก 10 นาที สารสกัดจากผลมีขึ้ ด้วย 5 ml ของ 0.1 M ZnSO4 และ 5 มิลลิลิตร 0.1 เมตรBa (OH) 2 และได้รับอนุญาตให้พักสำหรับ 20 นาที หลังจาก centrifugation(10 นาที 25 C, 3200g,) supernatant ประกอบด้วยการฟีนอบริเวณเก็บรวบรวม lyophilized และ quantified spectrophotometricallyที่ 750 nm กับ Folin-Ciocalteau รีเอเจนต์ (Qell บราซิล)ใช้กรด ferulic (ซิก ญี่ปุ่น) เป็นมาตรฐาน (lg 2 – 20 ml)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . วัสดุและวิธีการ
2.1 . การหมักของน้ำมันรำข้าว
2.1.1 . การเตรียมเชื้อเชื้อรา R . oryzae
( CCT ไปยัง ) ที่ได้รับจากมูลนิธิอังเดร
tosello ( ไขมัน ) , Campinas , บราซิล วัฒนธรรมยังคง
ที่ 4  C ใน slants ของอาหารเลี้ยงเชื้อ potato dextrose agar ( PDA , acumedia  ) .
สปอร์ที่ถูกแพร่กระจายโดยการเพิ่ม 5 มิลลิลิตรของสารละลาย
อิมัลชัน ( ทวีน 80 ที่ 02 % v / v ) และพวกเขาถูกบ่มที่ 30  c
7 วัน จนถึงการสร้างใหม่ทั้งหมดของเชื้อรา โดยการเพิ่ม 0.2 มล.
อิมัลชันในจานเลี้ยงเชื้อที่มี Portals . สปอร์
ระงับเพื่อหมักทำโดยการเพิ่ม 10 มล. ของ
อิมัลชันน้ำ Tween 80 ( 0.2% ) แต่ละจาน ปล่อย
สปอร์ได้โดยขูดจานกับ drigalski จัดการ
และสารละลายเข้มข้นสปอร์ประมาณโดยการ
ในนูเบาเออร์ แชมเบอร์ ( L . opitik , เยอรมนี )
2.1.2 . กระบวนการหมัก
รำข้าวข้าวพันธุ์ br-irga 417 ) ที่ใช้เป็นวัตถุดิบในการหมักโดย
อุตสาหกรรมจากรักที่ริมขอบฟ้า
ที่มีอนุภาคขนาดมาตรฐาน , ของอนุภาคขนาดเล็กกว่า 32
ตาข่าย