cDNA synthesis (RT reaction) was pe

cDNA synthesis (RT reaction) was performed in a 20 μL
reaction volume containing 1 μL of RNA, 1 μL of 5 pM
primer, and 9.9 μL nuclease-free water (Invitrogen,
Carlsbad, CA) at 70°C for 10 minutes. Subsequently, 8.1
μL of a mix containing 4 μL of 5× first strand buffer [250
mM Tris-HCl (pH 8.3), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2], 2 μL
0.1 M DTT, 2 μL 5 mM dNTPs and 20 U Super Script II
reverse transcriptase (Invitrogen) was added. The reaction
was carried out at 42°C for one hour and subsequently at
70°C for 15 minutes.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ทำการสังเคราะห์ cDNA (ปฏิกิริยา RT) ใน 20 μLปฏิกิริยาไดรฟ์ข้อมูล μL 1 ของอาร์เอ็นเอ μL 1 ของ 5 pMรองพื้น และ 9.9 μL nuclease ปราศจากน้ำ (Invitrogenคาร์ลส CA) ที่ 70 ° C 10 นาที ในเวลาต่อมา 8.1ΜL ของผสมที่ประกอบด้วย μL 4 5 รายแรกสแตรนด์บัฟเฟอร์ [250มม.ตรี-HCl (pH 8.3), 375 mM KCl, 15 mM MgCl2], 2 μL0.1 M DTT, dNTPs มม. 5 μL 2 และ 20 U ที่ซุปเปอร์สคริปต์ IIมีเพิ่ม transcriptase ย้อนกลับ (Invitrogen) ปฏิกิริยามีดำเนินการ ที่ 42° C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง และในเวลาต่อมาที่70° C 15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสังเคราะห์ยีน (RT ปฏิกิริยา) ได้ดำเนินการใน 20
ไมโครลิตรปริมาณปฏิกิริยาที่มี1 ไมโครลิตรของอาร์เอ็นเอ 1 ไมโครลิตรของ 05:00
ไพรเมอร์และน้ำ Nuclease ฟรีไมโครลิตร 9.9 (Invitrogen,
Carlsbad, CA) ที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที ต่อมา 8.1
ไมโครลิตรของผสมที่มี 4 ไมโครลิตร 5 ×บัฟเฟอร์สาระแรก [250
มิลลิ Tris-HCl (pH 8.3) 375 มิลลิ KCl 15 มิลลิ MgCl2] 2 ไมโครลิตร
0.1 M DTT 2 ไมโครลิตร 5 มิลลิ dNTPs และ 20 U ซูเปอร์สคริปที่สอง
transcriptase ย้อนกลับ (Invitrogen) ถูกเพิ่มเข้ามา ปฏิกิริยาที่ได้ดำเนินการที่ 42 ° C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมงและต่อมาที่ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสังเคราะห์ cDNA ( ปฏิกิริยา RT ) แสดงใน 20 μ L
ปฏิกิริยาปริมาณบรรจุ 1 ลิตรμ RNA 1 μลิตร 5 โมงเย็น
primer และ 9.9 ลิตรนิวเคลียสμฟรีน้ำ ( Invitrogen
, Carlsbad , CA ) ที่ 70 องศา C เป็นเวลา 10 นาที ต่อมา 8.1
μลิตรผสมที่ประกอบด้วย 4 μ L 5 × 1 เส้นจากบัฟเฟอร์ [ HCL 250
มม. ( pH 8.3 ) . 375 มม. , 15 มม. ชุด ] 2 μ L
0.1 M ส่วน 2 μ L 5 มม. dntps 20 U
บท 2 ซูเปอร์reverse transcriptase ( Invitrogen ) ถูกเพิ่มเข้ามา ปฏิกิริยา
ถูกดำเนินการที่ 42 ° C เป็นเวลาหนึ่งชั่วโมง และภายหลังที่
70 ° C เป็นเวลา 15 นาที