Materials and methods Blood samples

Materials and methods Blood samples The optimization of microparticle detection was performed using healthy controls. Written informed consent was obtained from 10 healthy donors (six female and four male donors) under a study protocol approved by the local Institutional Review Board. Citrated blood (18 mL) was collected in an atraumatic fashion using a 21-gauge needle. The first 3 mL were discarded. The samples were processed within two hours.
Preparation of platelet-poor plasma Platelet-poor plasma was obtained using three different centrifugation protocols (Table 1). Each centrifugation protocol included two steps. The initial step for protocol 1 consisted of two centrifugations at 5000 × g for five minutes at room temperature. After the first centrifugation at 5000 × g for five minutes, the supernatant was transferred into a new tube, leaving 200 µL above the cell pellet, and was centrifuged again for five minutes at 5000 × g. In protocol 2, platelet-poor plasma was obtained by an initial single centrifugation at 5000 × g for 15 minutes, and in protocol 3 by centrifugation at 1500 × g for 15 minutes. After centrifugation, the supernatant was transferred into a new tube, while discarding the last 500 µL at the base of the centrifuged tube. Aliquots of 500 µL were stored at −80°C. After thawing quickly at 37°C, a microparticle pellet was obtained from the platelet-poor plasma by a second centrifugation step at 17,000 × g for either 20 or two minutes. Subsequently, the supernatant was discarded and the microparticle pellet was reconstituted in Annexin V buffer (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) at 4°C. All buffers were sterile-filtered with a 0.2 µm filter (Whatman, Piscataway, NJ).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการเลือดตัวอย่างดำเนินการเพิ่มประสิทธิภาพของการตรวจหา microparticle ใช้ควบคุมสุขภาพ แจ้งความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรได้รับจาก 10 สุขภาพผู้บริจาค (หญิง 6 และผู้บริจาคชายสี่) ภายใต้โพรโทคอการศึกษาที่ได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบสถาบันท้องถิ่น Citrated เลือด (18 mL) รวบรวมแฟชั่น atraumatic การใช้เข็ม 21 วัด ML 3 แรกถูกละทิ้ง ตัวอย่างถูกประมวลผลภายใน 2 ชั่วโมงเตรียมของพลาสม่าพลาสม่าเกล็ดเลือดต่ำเกล็ดเลือดต่ำได้รับโดยใช้โพรโทคออื่น centrifugation สาม (ตาราง 1) แต่ละโพรโทคอ centrifugation รวมสองขั้นตอน ขั้นตอนการเริ่มต้นสำหรับโพรโทคอล 1 ของ centrifugations สองที่ 5000 × g ประกอบด้วยห้านาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจาก centrifugation แรกที่ 5000 × g 5 นาที supernatant ถูกโอนเข้าหลอดใหม่ ปล่อย 200 µL ข้างเม็ดเซลล์ และถูก centrifuged อีกห้านาทีที่ 5000 × g ในโพรโทคอล 2 พลาสมาเกล็ดเลือดต่ำได้รับ โดยการเริ่มต้นเดี่ยว centrifugation ที่ 5000 × g 15 นาที และโพรโทคอล 3 โดย centrifugation ที่ 1500 × g 15 นาที หลังจาก centrifugation, supernatant มีการโอนย้ายเป็นหลอดใหม่ ในขณะที่ละทิ้ง µL 500 ล่าสุดที่ฐานของท่อ centrifuged Aliquots 500 µL ถูกเก็บไว้ที่ −80 องศาเซลเซียส หลัง thawing อย่างรวดเร็วที่ 37° C เม็ด microparticle ถูกรับจากพลาสมาเกล็ดเลือดต่ำ โดยขั้นตอน centrifugation 2 ที่ 17,000 × g 20 หรือ 2 นาที ต่อมา supernatant ถูกละทิ้ง และเม็ด microparticle ถูก reconstituted ในบัฟเฟอร์ Annexin V (Becton สัน แฟรงคลินทะเลสาบ NJ) ที่ 4 องศาเซลเซียส ข้อมูลทั้งหมดถูกกอซกรองกับตัวกรอง 0.2 µm (Whatman ปิสกาตาเวย์ NJ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการเก็บตัวอย่างเลือดเพิ่มประสิทธิภาพของการตรวจสอบ microparticle ได้ดำเนินการโดยใช้การควบคุมที่ดีต่อสุขภาพ ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรที่ได้รับจากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี 10 (หกหญิงและชายสี่ผู้บริจาค) ภายใต้โปรโตคอลการศึกษาได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการตรวจสอบสถาบันท้องถิ่น Citrated เลือด (18 มิลลิลิตร) ที่ถูกเก็บรวบรวมในแฟชั่น atraumatic ใช้เข็ม 21 วัด 3 อันดับแรกมิลลิลิตรถูกโยนทิ้ง กลุ่มตัวอย่างที่ถูกประมวลผลภายในสองชั่วโมง.
เตรียมพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีพลาสม่าเกล็ดเลือดที่ไม่ดีที่ได้รับใช้สามโปรโตคอลการหมุนเหวี่ยงที่แตกต่างกัน (ตารางที่ 1) แต่ละโปรโตคอลปั่นรวมสองขั้นตอน ขั้นตอนเริ่มต้นสำหรับโปรโตคอล 1 ประกอบด้วยสอง centrifugations ที่ 5000 ×กรัมห้านาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากที่ปั่นเป็นครั้งแรกที่ 5000 ×กรัมสำหรับห้านาทีใสถูกย้ายลงในหลอดใหม่ออก 200 ไมโครลิตรเหนือตะกอนเซลล์และได้รับการหมุนเหวี่ยงอีกครั้งสำหรับห้านาทีที่ 5000 ×กรัม ใน 2 โปรโตคอลพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีที่ได้รับโดยการหมุนเหวี่ยงเดียวเริ่มต้นที่ 5000 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีและในโปรโตคอล 3 โดยการหมุนเหวี่ยงที่ 1500 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาที หลังจากที่หมุนเหวี่ยงใสถูกย้ายลงในหลอดใหม่ในขณะที่ทิ้งสุดท้าย 500 ไมโครลิตรที่ฐานของหลอดหมุนเหวี่ยงที่ aliquots 500 ไมโครลิตรถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียส หลังจากที่ละลายได้อย่างรวดเร็วที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเม็ด microparticle ที่ได้รับจากพลาสม่าของเกล็ดเลือดที่ไม่ดีโดยขั้นตอนการหมุนเหวี่ยงที่สองที่ 17,000 ×กรัมทั้ง 20 หรือสองนาที ต่อจากนั้นใสที่ถูกทิ้งและเม็ด microparticle ที่ถูกสร้างขึ้นใน Annexin บัฟเฟอร์ V (Becton ดิกคินสัน, แฟรงคลินเลคส์, นิวเจอร์ซีย์) ที่ 4 ° C บัฟเฟอร์ทั้งหมดถูกกรองผ่านการฆ่าเชื้อด้วย 0.2 ไมครอนกรอง (Whatman พิสแคต, นิวเจอร์ซีย์)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการที่เหมาะสมในการตรวจตัวอย่างเลือด microparticle ได้ดําเนินการโดยใช้การควบคุมสุขภาพ เขียนความยินยอมที่ได้รับจากผู้บริจาคมีสุขภาพดี 10 ( หกหญิง สี่ชายผู้บริจาค ) ภายใต้การศึกษาท้องถิ่นโปรโตคอลได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการตรวจสอบสถาบัน citrated เลือด ( 18 + ) เก็บข้อมูลในแฟชั่น atraumatic ใช้เข็ม 21 วัดครั้งแรกที่ 3 ml ถูกละทิ้ง . ตัวอย่างการประมวลผลภายในสองชั่วโมง การเตรียมของพลาสมาเกล็ดเลือด
น่าสงสารน่าสงสารพลาสม่าได้ใช้โปรโตคอลที่แตกต่างกันสาม ดังนี้ ( ตารางที่ 1 ) แต่ละโปรโตคอล ปั่นรวมสองขั้นตอน ขั้นตอนแรกสำหรับขั้นตอนที่ 1 ประกอบด้วยสอง centrifugations 5000 × G สำหรับ 5 นาทีที่อุณหภูมิห้องหลังจากปั่นครั้งแรกที่ 5000 × G สำหรับห้านาที นำ ถูกส่งตัวไปเป็นหลอดใหม่ เหลือ 200 µผมเหนือระดับเซลล์เม็ด และอีกห้านาทีที่ 5 ×กรัม ในขั้นตอนที่ 2 ผู้ป่วยยากจนพลาสมาได้โดยปั่นเดี่ยวเริ่มต้นที่ 5000 × G สำหรับ 15 นาที ในขั้นตอนที่ 3 โดยปั่น 1500 ×กรัมเป็นเวลา 15 นาทีหลังการปั่นเหวี่ยง , น่าน ถูกส่งตัวไปเป็นหลอดใหม่ในขณะที่การล่าสุด 500 µ L ที่ฐานของระดับท่อ เฉยๆของ 500 µลิตรที่อุณหภูมิ 80 องศา บริษัท เวสเทิร์น หลังการละลายอย่างรวดเร็วที่อุณหภูมิ 37 องศา C , microparticle เม็ดได้จากพลาสมาเกล็ดเลือดจนก้าวปั่นที่สองที่ 17000 × G สำหรับทั้ง 20 หรือสองนาที ต่อมาและน่านถูกทิ้งและ microparticle เม็ดสามารถของเซลล์ V ในบัฟเฟอร์ ( เบคตอนดิกคินสัน Franklin Lakes , NJ ) ที่อุณหภูมิ 4 องศา ทั้งหมดบัฟเฟอร์เป็นหมันกรองด้วยตัวกรอง ( whatman µ 0.2 M ,
Piscataway , NJ )