the coppercontaining medium was exc

the coppercontaining medium was exchanged to Talon buffer (50 mM phosphate buffer, pH 8.0, 300 mM NaCl) by Amicon (30-kDa cutoff membrane). The 10-fold concentrated sample (15 ml) in Talon buffer was then purified by immobilized metal affinity chromatography (IMAC). The sample was first adjusted to pH 8.0 by NaOH and then filtered (0.22 lm Acrodisc Gelman) prior to loading on a Fast flow column (Clontech) containing a 2 ml bed volume of Talon™ metal affinity resin (Clontech, Mountain View, CA). The support was first equilibrated with 20 ml of Talon buffer. After binding at 4 C for 30 min, the resin was washed with 20 ml of Talon buffer under gravity feed and the bound proteins were eluted by increasing the concentration of imidazole up to 200 mM in the Talon buffer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สื่อ coppercontaining ถูกแลกเปลี่ยนกรงเล็บบัฟเฟอร์ (บัฟเฟอร์ฟอสเฟต 50 มม. pH 8.0, 300 มม. NaCl) โดย Amicon (เยื่อตัด 30 kDa) จากนั้นบริสุทธิ์อย่างเข้มข้น 10-fold (15 ml) ในบัฟเฟอร์กรงเล็บ โดยความสัมพันธ์โลหะแบบตรึง chromatography (IMAC) ตัวอย่างแรก ปรับ pH 8.0 ด้วย NaOH และซึง (0.22 lm Acrodisc Gelman) ก่อนที่จะโหลดบนคอลัมน์ไหลเร็ว (Clontech) ที่ประกอบด้วยปริมาณเตียง 2 มล.ของ Talon™ โลหะเรซิ่นความสัมพันธ์ (Clontech วิวภูเขา CA) การสนับสนุนเป็นครั้งแรก equilibrated กับ 20 ml ของบัฟเฟอร์กรงเล็บ หลังจากผูกที่ 4 C 30 นาที เรถูกล้าง ด้วย 20 ml ของกรงเล็บบัฟเฟอร์ภายใต้แรงโน้มถ่วงที่ฟีด และโปรตีนผูกถูก eluted โดยการเพิ่มความเข้มข้นของอิมิดาโซลสูงสุด 200 มม.ในบัฟเฟอร์กรงเล็บ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สื่อ coppercontaining ถูกแลกเปลี่ยนเป็นกรงเล็บบัฟเฟอร์ (ขนาด 50 มมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 8.0 300 มิลลิเมตรโซเดียมคลอไรด์) โดย Amicon (30 กิโลดาลตันเมมเบรนตัด) 10 เท่าตัวอย่างเข้มข้น (15 มล.) ในกรงเล็บบัฟเฟอร์บริสุทธิ์แล้วโดยตรึงโคโลหะความสัมพันธ์ (IMAC) กลุ่มตัวอย่างเป็นครั้งแรกที่มีการปรับค่าพีเอช 8.0 โดย NaOH แล้วกรอง (0.22 LM Acrodisc Gelman) ก่อนที่จะมีการโหลดในคอลัมน์ไหลเร็ว (Clontech) ที่มีปริมาณ 2 มิลลิลิตรเตียง Talon ™เรซินโลหะความสัมพันธ์ (Clontech Mountain View, CA) . การสนับสนุนเป็นครั้งแรก equilibrated 20 มิลลิลิตรกรงเล็บบัฟเฟอร์ หลังจากที่มีผลผูกพันที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที, เรซิ่นถูกล้างด้วย 20 มลกรงเล็บบัฟเฟอร์ภายใต้แรงโน้มถ่วงฟีดและโปรตีนที่ถูกผูกไว้ถูกชะโดยการเพิ่มความเข้มข้นของ imidazole ถึง 200 มิลลิในบัฟเฟอร์กรงเล็บ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การ coppercontaining ) แลกทาลอนบัฟเฟอร์ ( 50 mM ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ พีเอช 8.0 , 300 mM NaCl ) โดย amicon ( 30 กิโลดาลตันตัดเยื่อ ) 10 เท่าความเข้มข้นตัวอย่าง ( 15 มล. ) ในทาลอนบัฟเฟอร์แล้วทำให้บริสุทธิ์ โดยการตรึงโลหะ affinity chromatography ( iMac ) ตัวอย่างแรกปรับ pH 8.0 NaOH แล้วกรอง ( 0.22 LM acrodisc เกลแมน ) ก่อนที่จะโหลดบนไหลเร็วคอลัมน์ ( clontech ) ประกอบด้วย 2 มล. ปริมาตรของทาลอน™โลหะโดยใช้เรซิน ( clontech ภูเขา วิว ( CA ) การสนับสนุนเป็นครั้งแรก equilibrated 20 มิลลิลิตร ทาลอนบัฟเฟอร์ หลังจากผูกไว้ที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที , เรซินซัก 20 มิลลิลิตร ทาลอน บัฟเฟอร์ภายใต้แรงโน้มถ่วงและอาหารโปรตีนไว้เป็นตัวอย่าง โดยการเพิ่มความเข้มข้นของจิบะ มาโมรุถึง 200 มม. ในทาลอนบัฟเฟอร์