The development of novel combinatio

The development of novel combination based therapies for HBV infection
requires new antivirals that block viral life cycle functions other than those associated with the
viral polymerase. The HBV Core, that comprises the viral capsid, nucleic acid, and host and
viral ancillary proteins, represents an attractive target. Proper assembly of the capsid is critical 20 for RNA packaging, การลอกรหัสแบบย้อนกลับ, and intracellular trafficking. It is believed that
normal assembly is nucleated by a timer of Cp dimers and proceeds without accumulating
observable populations of intermediates. Moreover, core proteins (Cp) have been shown to
interact with histones and to bind the nuclear circular covalently closed DNA (cccDNA),
possibly contributing to the regulation of cccDNA function and the maintenance of the cccDNA 25 stability. Hetero-aryl-dihydropyrirnidines (HAPs) are a class of antivirals which inhibit HBV
replication in vitro and in vivo (Deres, Science 2003; Zlotnick, PNAS 2007). HAPs enhance
the rate and the extent of core protein (Cp) assembly over a broad concentration range and act
as allosteric effectors to induce an assembly-active state or, at high concentration, stabilize
preferentially non-capsid polymers of Cp interfering with normal virion assembly, resulting in 30 an antiviral effect. Core proteins (Cp) have been shown to interact with histones and to bind the
nuclear cccDNA, possibly contributing to the regulation of cccDNA function and the
maintainance of the cccDNA stability (Bock, JMB 2001; Pollicino, Gastroenterology 2006;
Guo, Epigenetics 2011). Described herein is the discovery that at higher concentrations, above
where DNA synthesis is blocked, HAPs interfere with production of viral RNA.
In one illustrative embodiment of the invention, a method is described for
treating a patient having an infection by hepatitis B virus (HBV), the method comprising the 5 step of administering to the patient a therapeutically effective amount a compound capable of
inhibiting accumulation of HBV pregenomic RNA (pgRNA) in an HBV infected cell of the patient.
In another embodiment, a method is described for identifying a compound useful
for the treatment of infection hepatitis B virus (HBV), comprising: contacting a cell infected 10 with HBV with a test compound in a culture medium, or administering a potential compound to
an animal; retrieving a sample from the cell, the culture medium, or from tissue of the animal,
at one or more time points; analyzing the sample for one or more attributes selected from the
group consisting of HBV cccDNA concentration, amount of methylated cccDNA, acetylation
state of cccDNA, HBV cccDNA การลอกรหัส, HBV RNA concentration in cellular cytoplasm, 15 HBV RNA concentration in the cell nucleus, concentration of unassembled capsid protein, and
HBV S antigen concentration; and identifying the compound as useful for treating hepatitis B
based on the reduction or increase of one of more of the attributes.

BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS
รูป 1 HAPs: a new class of antivirals inhibiting HBV replication HAPs
misdirect HBV capsid assembly and block HBV replication.
รูป 2 HAP12 targets cccDNA การลอกรหัส (1)HAP12 treatment induces a complete suppression of HBV replication at 72 and 96 hrs with a peak >50% reduction of pgRNA การลอกรหัส at 96 hours and an approximate 30% decrease in cccDNA levels.
a) In HepG2 cells transfected with monomeric linear full length HBV pgRNA
and HBV replication are dependent on cccDNA formation, chromatinization and การลอกรหัส.
b) Cytoplasnaic HBV core particles were isolated from untreated and HAP12-treated cells at the indicated time points after transfection. Results are expressed as number of HBV DNA copies per transfected cells. c) cccDNA accumulation in untreated and HAP12-treated HepG2 cells
transfected with wild type HBV genomes. qPCR analysis was performed using selective
cccDNA primers to amplify cccDNA and beta-globin primers to normalize the DNA samples.
Results are expressed as number of cccDNA copies per transfected cells. d) mRNAs were
prepared from untreated and IFNa-treated HepG2 cells transfected with wild type HBV
genomes and harvested at the indicated times post-transfection. Specific primers were utilized






to quantify the HBV pregenomic RNA and GAPDH amplification was used to normalize for equal loading of each RNA sample. All histograms show mean values from two independent experiments; bars indicate standard deviations (SD)
รูป 3 HAP12 targets cccDNA การลอกรหัส (2) In the HepG2 H1.3 stable cell
line the HAP12 inhibitory effect on pgRNA การลอกรหัส (d) and HBV replication (b) was
confirmed, a) The HepG2 H1,3 HBV stable clone accumulates cccDNA when cultured in
conditioned medium at high confluence. HAP12 treatment is started at day 10 of
"differentiation" when HBV replication is high and the cccDNA pool is expanded. pgRNA is
transcribed from both cccDNA and integrated HBV. b) Cytoplasmic HBV core particles,
10 nuclear cccDNA (c) and total BaRNAs (d) were isolated from untreated and HAP12-treated cells
at the indicated time points. HBV-DNA, cccDNA and pgRNA results are expressed as in FIG 2.
Histograms show mean values from two independent experiments; bars indicate standard
deviations (SD).
รูป 4 HAP12 does not prevent cccDNA formation/accumulation. By treating
the HepG2 H1.3 cells with HAP12 before the establishment of the cccDNA pool it was shown
that cccDNA formation and accumulation are not targeted by HAP12. Under these conditions
the effect on HBV replication is maximal. a) HAP12 treatment is started at day 0 of
"differentiation" when HBV replication and cccDNA levels are very low. b) Cytoplasmic HBV
core particles, nuclear cccDNA (c) and total mRNAs (d) were isolated from untreated and
20 HAP12-treated cells at the indicated time points. HBV-DNA, cccDNA and pgRNA results are
expressed as in Figure 2. Histograms show mean values from two independent experiments;
bars indicate standard deviations (SD).
รูป 5 HAP12 targets cccDNA การลอกรหัส in AD38 cells. HAP12 inhibitory
effect on HBV replication (c) and pgRNA การลอกรหัส (d) was further confirmed In the AD38 25 stable cell line. a) Upon tetracycline removal, the AD38 cells express pgRNA, accumulate
subviral particles in the cytoplasm and secrete HBV virions in the cell supernatant (a). The
cccDNA pool is built up from the recycling of mature core particles to the nucleus after HBV
replication is started from the pgRNA initially transcribed from the "tet-regulated" HBV
integrated DNA (b). HAP12 treatment is started at day 0 (left panels) or day 6 (right panels). c) 30 Cytoplasmic HBV core particles, and total mRNAs (d) were isolated from untreated and
HAP12-treated cells at the indicated time points. HBV DNA, cccDNA and pgRNA results are
expressed as in Figure 2. All histograms show mean values from two independent experiments;
bars indicate standard deviations (SD).







รูป 6 HAP12 interferes with HBc binding to the cccDNA. It is herein
described that using a cccDNA ChIP assay (a), that HBc is recruited onto the cccDNA in HBV replicating HepG2 cells (b) and in the HepG2 H1.3 stable cell line. HAP12 treament (10 days) strongly inhibited cccDNA HBc occupancy in HepG2 H1.3 cells and a sharp decrease in
cccDNA-bound H3 histone acetylation. It is believe that this finding is in agreement with the
observed inhibition of cccDNA การลอกรหัส and pgRNA production in HAP12 treated cells.
HAP12 treatment is started at day 10 of HepG2 H1.3 cells "differentiation" (see legend to
figure 3). Cross-linked chromatin was prepared from untreated and HAP12-treated cells at TO
(before treatment, 10 gg "differentiation") and at T10 (10 days of exposure to HAP12, 20 gg 10 from beginning of "differentiation") and immune-precipitated with a relevant control IgG or
anti-AcH4 antibody or anti-HBc antibody (USBiological, #H)905-15). ChIPped chromatin was
analyzed by qPCR with HBV cccDNA selective primers. Results are expressed as % of input.
Histograms show mean values from two independent experiments; bars indicate standard
deviations (SD).
รูป 7 Several compounds were used to treat a transient transfection of Huh-7
cells (Huh-7 is a well differentiated hepatocyte derived cellular carcinoma cell line).
Cytoplasmic RNA was harvested and quantified by RT-per. Treatment/dynamic range/ED50: DMSO/1.6/NA; AT130/25/0.51.1M; HAP13/20/5 f_tM; HAP12/36/0.5 j_LM.


DETAILED DESCRIPTION

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การพัฒนาชุดนวนิยายใช้บำบัดการติดเชื้อด้วยขั้นต้อง antivirals ใหม่ที่บล็อกฟังก์ชันวงจรชีวิตของไวรัสที่ไม่เกี่ยวข้องกับ การ พอลิเมอเรสไวรัส ด้วยขั้นหลัก ที่ประกอบด้วยไวรัส capsid กรดนิวคลีอิก และโฮสต์ และ ไวรัสโปรตีนพิเศษ แสดงเป้าหมายน่าสนใจ ประกอบของ capsid เหมาะสมคือ 20 สำคัญในอาร์เอ็นเอบรรจุภัณฑ์ การลอกรหัสแบบย้อนกลับ และ intracellular ค้า ทำให้เชื่อว่า แอสเซมบลีปกติ nucleated โดยตัวจับเวลาของ Cp dimers และดำเนินการ โดยไม่มีการสะสม ประชากร observable ของตัวกลาง นอกจากนี้ การแสดงแกนโปรตีน (Cp) เพื่อ โต้ตอบกับ histones และการผูกกับวงนิวเคลียร์ covalently ปิดดีเอ็นเอ (cccDNA), อาจจะเอื้อต่อการควบคุมของ cccDNA ฟังก์ชันและการรักษาความมั่นคง 25 cccDNA Hetero-aryl-dihydropyrirnidines (HAPs) เป็นชั้นของ antivirals ซึ่งยับยั้งด้วยขั้น จำลองแบบในหลอดทดลอง และในสัตว์ทดลอง (Deres, 2003 วิทยาศาสตร์ Zlotnick, PNAS 2007) เพิ่ม hAPs อัตราและขอบเขตของหลักประกอบโปรตีน (Cp) ช่วงความเข้มข้นวงกว้างและพระราชบัญญัติ เป็นเบส allosteric เพื่อก่อให้เกิดสถานะใช้งานแอสเซมบลี หรือ ความเข้มข้นสูง อยู่ดี โพลิเมอร์โน้ตไม่ใช่-capsid ของ Cp รบกวนแอสเซมบลี virion ปกติ เกิด 30 ผลการต้านไวรัส มีการแสดงแกนโปรตีน (Cp) เพื่อโต้ตอบกับ histones และผูก cccDNA นิวเคลียร์ อาจจะเอื้อต่อการควบคุมของ cccDNA ฟังก์ชันและ maintainance ของความมั่นคง cccDNA (Bock, JMB 2001 Pollicino ระบาย 2006กัว Epigenetics 2011) อธิบายนี้เป็นการค้นพบว่าที่ความเข้มข้นสูง ข้างต้น ที่ถูกบล็อกการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ HAPs อาจรบกวนกับการผลิตของอาร์เอ็นเอไวรัส ในหนึ่งแสดงศูนย์รวมแห่งการประดิษฐ์ อธิบายวิธีการ รักษาผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อจากไวรัสตับอักเสบบี (ด้วยขั้น), วิธีการประกอบด้วย 5 ขั้นตอนของการดูแลผู้ป่วยจำนวน therapeutically ประสิทธิภาพของสารประกอบinhibiting สะสมด้วยขั้น pregenomic อาร์เอ็นเอ (pgRNA) ในด้วยขั้นการติดเชื้อเซลล์ของผู้ป่วยในอื่นลื่น อธิบายวิธีการระบุสารประกอบที่เป็นประโยชน์ สำหรับการรักษาเชื้อโรคไวรัส (ด้วยขั้น), ประกอบด้วย: ติดต่อเซลล์ติดเชื้อ 10 พร้อมด้วยขั้นกับการทดสอบผสมสื่อวัฒนธรรม หรือศักยภาพที่ซับซ้อนการจัดการ สัตว์ เรียกใช้ตัวอย่าง จากสื่อวัฒนธรรม เซลล์ หรือ จากเนื้อเยื่อของสัตว์ ณ จุดเวลา หนึ่ง การวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับอย่าง น้อยหนึ่งแอตทริบิวต์ที่เลือกจากการ กลุ่มที่ประกอบด้วยขั้น cccDNA ความเข้มข้น จำนวน methylated cccDNA, acetylation รัฐอาร์เอ็นเอด้วยขั้นสมาธิในไซโทพลาซึมเซลล์ การ 15 ความเข้มข้นด้วยขั้นอาร์เอ็นเอในนิวเคลียสเซลล์ ความเข้มข้นของโปรตีน unassembled capsid cccDNA การลอกรหัส cccDNA ด้วยขั้น และ ความเข้มข้นในการตรวจหาด้วยขั้น S และระบุสารประกอบที่เป็นประโยชน์ในการการรักษาตับอักเสบบี ตามการลดหรือเพิ่มของแอตทริบิวต์เพิ่มเติมคำอธิบายโดยย่อของวาดรูป 1 HAPs: คลาสใหม่ของ antivirals inhibiting HAPs จำลองด้วยขั้น misdirect ประกอบด้วยขั้น capsid และบล็อกการจำลองแบบด้วยขั้นรูป 2 HAP12 เป้าหมาย cccDNA การลอกรหัส (1) HAP12 รักษาก่อให้เกิดการปราบปรามที่สมบูรณ์ของการจำลองแบบด้วยขั้นที่ 72 และ 96 ชั่วโมงด้วยสูงสุด > ลด 50% ของ pgRNA การลอกรหัสที่ 96 ชั่วโมงและ 30% โดยประมาณการลดลงในระดับ cccDNA) ใน HepG2 เซลล์ transfected มีความยาวเต็มเส้น monomeric pgRNA ด้วยขั้น และจำลองด้วยขั้นจะขึ้นอยู่กับผู้แต่ง cccDNA, chromatinization และการลอกรหัสขอนุภาคหลักด้วยขั้น Cytoplasnaic ได้แยกจากเซลล์ไม่ถูกรักษา และถือ ว่า HAP12 ที่จุดเวลาที่ระบุหลัง transfection ผลลัพธ์จะแสดงเป็นจำนวนสำเนาดีเอ็นเอด้วยขั้นต่อเซลล์ transfected c) cccDNA สะสมในเซลล์ HepG2 ไม่ถูกรักษา และรับการ รักษา HAP12transfected กับ genomes ประเภทป่าด้วยขั้น วิเคราะห์ qPCR ทำใช้งาน ไพรเมอร์ cccDNA ขยาย cccDNA และเบต้า-globin ไพรเมอร์เพื่อลดขนาดตัวอย่างดีเอ็นเอผลลัพธ์จะแสดงเป็นจำนวนสำเนา cccDNA ต่อเซลล์ transfected d) mRNAs ได้เตรียมจากไม่ถูกรักษา และถือ ว่า IFNa HepG2 เซลล์ transfected มีชนิดป่าด้วยขั้นgenomes และเก็บเกี่ยวผลผลิตในการระบุเวลาการ transfection ที่หลัง มีใช้เฉพาะไพรเมอร์ วัดปริมาณด้วยขั้นขยายอาร์เอ็นเอและ GAPDH pregenomic ถูกใช้เพื่อลดขนาดสำหรับการโหลดเท่าของแต่ละอย่างอาร์เอ็นเอ ฮิสโตแกรมทั้งหมดแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระสอง แถบแสดงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)รูป 3 HAP12 เป้าหมาย cccDNA การลอกรหัส (2) เซลล์ใน HepG2 H1.3 มั่นคง บรรทัด HAP12 ลิปกลอสไขผล pgRNA การลอกรหัส (d) และถูกจำลองแบบด้วยขั้น (b)ยืนยัน การ) HepG2 H1 โคลนมั่นคงด้วยขั้น 3 สะสมราคา cccDNA เมื่ออ่างในกลางอากาศที่สูงบรรจบ เริ่มวันที่ 10 ของการรักษา HAP12"สร้างความแตกต่าง" เมื่อมีการจำลองแบบด้วยขั้นสูงและสระว่ายน้ำ cccDNA ถูกขยาย pgRNA เป็น ทับศัพท์จาก cccDNA ทั้งสอง และรวมด้วยขั้น ข cytoplasmic ด้วยขั้นหลักอนุภาค BaRNAs (d) 10 cccDNA นิวเคลียร์ (c) และผลรวมถูกแยกจากเซลล์ไม่ถูกรักษา และรับการ รักษา HAP12 จุดเวลาที่ระบุ มีแสดงผลด้วยขั้น DNA, cccDNA และ pgRNA ในฟิก 2 ฮิสโตแกรมแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระสอง แถบแสดงมาตรฐาน ค่าเบี่ยงเบน (SD)รูป 4 HAP12 ป้องกันการก่อตัว/สะสม cccDNA โดยการรักษา เซลล์ HepG2 H1.3 กับ HAP12 ก่อนการจัดตั้งสระว่ายน้ำ cccDNA จะถูกแสดงว่า cccDNA ก่อตัวและสะสมจะไม่กำหนดเป้าหมาย โดย HAP12 ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้ ผลการจำลองแบบด้วยขั้นสูงสุดได้ ) เริ่มต้นในวันที่ 0 ของรักษา HAP12 "สร้างความแตกต่าง" เมื่อระดับการจำลองแบบและ cccDNA ด้วยขั้นต่ำมาก ข cytoplasmic ด้วยขั้น หลักอนุภาค นิวเคลียร์ cccDNA (c) และรวม mRNAs (d) ถูกแยกจากไม่ถูกรักษา และ 20 ถือว่า HAP12 เซลล์ที่จุดเวลาที่ระบุ ผลดีเอ็น เอด้วยขั้น cccDNA และ pgRNA แสดงในรูปที่ 2 ฮิสโตแกรมแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระสอง แถบแสดงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD)รูป 5 HAP12 เป้าหมายการลอกรหัส cccDNA ในเซลล์ AD38 ลิปกลอสไข HAP12 ผลการจำลองแบบด้วยขั้น (c) และ pgRNA การลอกรหัส (d) ถูกเพิ่มเติมยืนยันในเดอะ AD38 25 เซลล์มั่นคงบรรทัด ก) เมื่อเอาเตตราไซคลีน การ AD38 เซลล์ด่วน pgRNA สะสม อนุภาค subviral ในไซโทพลาซึม และหลั่งด้วยขั้น virions ในเซลล์ supernatant (a) ที่ สระว่ายน้ำ cccDNA ถูกสร้างขึ้นจากการรีไซเคิลของอนุภาคหลักผู้ใหญ่กับนิวเคลียสที่หลังด้วยขั้น จำลองแบบเริ่มต้นจาก pgRNA ทับศัพท์จากด้วยขั้น "ควบคุม tet" ครั้งแรก รวม DNA (b) รักษา HAP12 เริ่มต้นที่วันที่ 0 (แผงด้านซ้าย) หรือวัน 6 (ติดตั้งด้านขวา) c) อนุภาคหลักด้วยขั้น Cytoplasmic 30 และ mRNAs รวม (d) ถูกแยกจากไม่ถูกรักษา และ เซลล์ที่ HAP12 ถือว่า ณจุดเวลาที่ระบุ ผล DNA ด้วยขั้น cccDNA และ pgRNA แสดงในรูปที่ 2 ฮิสโตแกรมทั้งหมดแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระสอง แถบแสดงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) รูป 6 HAP12 รบกวน HBc ผูกกับ cccDNA ซึ่งเป็นอธิบายว่า ใช้ cccDNA เป็นชิ assay (ก) ว่า HBc จะพิจารณาลงใน cccDNA ด้วยขั้นจำลองเซลล์ HepG2 (b) และ ในบรรทัดมีเสถียรภาพเซลล์ HepG2 H1.3 พบ HAP12 (10 วัน) ขอห้ามพัก HBc cccDNA ในเซลล์ HepG2 H1.3 และความคมชัดลดลง cccDNA ผูกกับ H3 ฮิสโตน acetylation จึงเชื่อว่า การค้นพบนี้สอดคล้องกับการcccDNA การลอกรหัสและ pgRNA ผลิตใน HAP12 ยับยั้งการสังเกตถือว่าเซลล์ รักษา HAP12 เริ่มต้นที่วันที่ 10 ของ HepG2 H1.3 เซลล์ "สร้างความแตกต่าง" (ดูคำอธิบายสัญลักษณ์ทาง รูปที่ 3) โครมาติน cross-linked ถูกเตรียมจากเซลล์ไม่ถูกรักษา และถือ ว่า HAP12 ที่เป็น (ก่อนการรักษา gg 10 "สร้างความแตกต่าง") และ ที่อาคาร T10 (วันที่ 10 ของการสัมผัสกับ HAP12, gg 20 10 จากจุดเริ่มต้นของการ "สร้างความแตกต่าง") และ ตะกอนภูมิคุ้มกัน มีการควบคุมที่เกี่ยวข้อง IgG หรือ ต่อต้าน-AcH4 แอนติบอดีหรือ anti-HBc แอนติบอดี (USBiological, #H) 905-15) โครมาตินที่ทำได้ วิเคราะห์ โดย qPCR กับไพรเมอร์เลือก cccDNA ด้วยขั้น ผลลัพธ์จะแสดงเป็น%ของอินพุต ฮิสโตแกรมแสดงค่าเฉลี่ยจากการทดลองอิสระสอง แถบแสดงมาตรฐาน ค่าเบี่ยงเบน (SD) รูป 7 สารประกอบต่าง ๆ ที่ใช้ในการรักษา transfection ชั่วคราว Huh-7เซลล์ (Huh-7 เป็น hepatocyte ดีสังเกตมา carcinoma เซลลูลาร์เซลล์รายการ)อาร์เอ็นเอ cytoplasmic ถูกเก็บเกี่ยว และ quantified โดย RT เปอร์เซ็นต์รักษา/ไดนามิก ช่วง/ED50: DMSO/1.6/NA AT130/25/0.51.1M F_tM HAP13 20/5 HAP12/36/0.5 j_LM คำอธิบายโดยละเอียด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การพัฒนาของการรวมกันนวนิยายตามการรักษาเชื้อไวรัสตับอักเสบบี
ต้องต้านไวรัสใหม่ที่ฟังก์ชั่นป้องกันวงจรชีวิตของเชื้อไวรัสอื่น ๆ นอกเหนือจากผู้ที่เกี่ยวข้องกับ
โพลิเมอร์ไวรัส แกนไวรัสตับอักเสบบีที่ประกอบด้วย capsid ไวรัสกรดนิวคลีอิกและโฮสต์และ
โปรตีนเสริมไวรัสหมายถึงเป้าหมายที่น่าสนใจ การชุมนุมที่เหมาะสมของ capsid เป็นสิ่งสำคัญสำหรับบรรจุภัณฑ์ 20 RNA, การลอกรหัสแบบย้อนกลับและการค้าภายในเซลล์ เป็นที่เชื่อว่า
การชุมนุมปกติ nucleated โดยจับเวลาของ dimers Cp และเงินสะสมโดยไม่ต้อง
สังเกตประชากรของตัวกลาง นอกจากนี้โปรตีนหลัก (ซีพี) ได้รับการแสดงที่จะ
มีปฏิสัมพันธ์กับ histones และการผูกนิวเคลียร์วงกลมดีเอ็นเอปิด covalently (cccDNA)
อาจจะเอื้อต่อการควบคุมการทำงานของ cccDNA และการบำรุงรักษาความมั่นคง cccDNA 25 แตกต่าง-aryl-dihydropyrirnidines (PPHA จะ) เป็นชั้นของไวรัสตับอักเสบบีที่ยับยั้ง
การจำลองแบบในหลอดทดลองและในร่างกาย (Deres วิทยาศาสตร์ 2003; Zlotnick, PNAS 2007) PPHA จะเสริมสร้าง
อัตราและขอบเขตของโปรตีนหลัก (CP) การชุมนุมในช่วงที่มีความเข้มข้นในวงกว้างและทำหน้าที่
เป็นเอฟเฟค allosteric ที่จะทำให้เกิดการชุมนุมของรัฐที่ใช้งานหรือที่มีความเข้มข้นสูงมีเสถียรภาพ
โพลิเมอร์พิเศษที่ไม่ capsid ของ Cp ยุ่งกับการชุมนุม virion ปกติ ส่งผลให้ในวันที่ 30 มีผลต้านไวรัส โปรตีนหลัก (ซีพี) ได้รับการแสดงที่จะมีปฏิสัมพันธ์กับ histones และการผูก
cccDNA นิวเคลียร์อาจจะเอื้อต่อการควบคุมการทำงานของ cccDNA และ
การบำรุงรักษาของความมั่นคง cccDNA (เบียร์ JMB 2001; Pollicino ระบบทางเดินอาหาร 2006;
Guo, Epigenetics 2011) . อธิบายไว้ในที่นี้คือการค้นพบว่าที่ความเข้มข้นที่สูงขึ้นดังกล่าวข้างต้น
ที่การสังเคราะห์ดีเอ็นเอถูกบล็อค PPHA จะยุ่งเกี่ยวกับการผลิตของอาร์เอ็นเอไวรัส.
หนึ่งในศูนย์รวมเป็นตัวอย่างของการประดิษฐ์, วิธีการอธิบายไว้สำหรับ
รักษาผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี (HBV ) วิธีการที่ประกอบไปด้วย 5 ขั้นตอนของการบริหารจัดการที่จะป่วยเป็นจำนวนเงินที่มีประสิทธิภาพการรักษาความสามารถในการสาร
ยับยั้งการสะสมของไวรัสตับอักเสบบีอาร์เอ็นเอ pregenomic (pgRNA) ในเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบีของผู้ป่วย.
ศูนย์รวมในอีกวิธีการที่อธิบายไว้ในการระบุ สารที่มีประโยชน์
สำหรับการรักษาของการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี (HBV) ประกอบด้วย: ติดต่อเซลล์ที่ติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี 10 ด้วยสารทดสอบในอาหารเลี้ยงเชื้อหรือการบริหารจัดการสารที่มีศักยภาพใน
สัตว์; เรียกตัวอย่างจากเซลล์กลางวัฒนธรรมหรือจากเนื้อเยื่อของสัตว์
ที่หนึ่งหรือมากกว่าจุดเวลา; การวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับหนึ่งหรือคุณลักษณะอื่น ๆ เลือกจาก
กลุ่มที่ประกอบด้วยความเข้มข้นของไวรัสตับอักเสบบี cccDNA ปริมาณของ cccDNA สาร acetylation
สถานะของ cccDNA, ไวรัสตับอักเสบบี cccDNA การลอกรหัสความเข้มข้นของไวรัสตับอักเสบบีอาร์เอ็นเอในพลาสซึมของเซลล์ความเข้มข้น 15 อาร์เอ็นเอไวรัสตับอักเสบบีในนิวเคลียสของเซลล์ ความเข้มข้นของโปรตีน capsid แต่อย่างใดและ
ความเข้มข้นของแอนติเจนไวรัสตับอักเสบบีเอส; และระบุสารประกอบที่เป็นประโยชน์สำหรับการรักษาไวรัสตับอักเสบบี
อยู่บนพื้นฐานของการลดลงหรือเพิ่มขึ้นหนึ่งในคุณลักษณะ. คำอธิบายสั้น ๆ ของภาพวาดรูป 1 PPHA จะ: คลาสใหม่ของไวรัส PPHA จะยับยั้งการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบี แนะผิดประกอบ capsid ไวรัสตับอักเสบบีและไวรัสตับอักเสบบีป้องกันการจำลองแบบ . รูป 2 HAP12 เป้าหมาย cccDNA การลอกรหัส (1) การรักษา HAP12 ก่อให้เกิดการปราบปรามที่สมบูรณ์ของการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีที่ 72 และ 96 ชั่วโมงมีจุดสูงสุด> ลด 50% ของ pgRNA การลอกรหัสที่ 96 ชั่วโมงและลดลงประมาณ 30% ในระดับ cccDNA . ) ในเซลล์ HepG2 transfected ที่มีความยาวเต็มรูปแบบเชิงเส้น monomeric pgRNA ไวรัสตับอักเสบบี และการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีจะขึ้นอยู่กับการก่อ cccDNA chromatinization และการลอกรหัส. ข) Cytoplasnaic ไวรัสตับอักเสบบีอนุภาคแกนถูกแยกจากได้รับการรักษาและเซลล์ HAP12 รับการรักษาที่จุดเวลาที่ระบุหลังจาก transfection ผลการค้นหาจะแสดงเป็นจำนวนสำเนาดีเอ็นเอของไวรัสตับอักเสบบีต่อเซลล์ transfected ค) การสะสม cccDNA ในการรักษาและ HAP12 รับการรักษาเซลล์ HepG2 transfected กับจีโนมของไวรัสตับอักเสบบีชนิดป่า การวิเคราะห์ qPCR ได้รับการดำเนินการโดยใช้การเลือก cccDNA ไพรเมอร์เพื่อขยาย cccDNA และไพรเมอร์เบต้า globin ที่จะปรับตัวอย่างดีเอ็นเอ. ผลการค้นหาจะแสดงเป็นจำนวนสำเนา cccDNA ต่อเซลล์ transfected ง) mRNAs ถูกจัดทำขึ้นจากการรักษาและ IFNA รับการรักษาเซลล์ HepG2 transfected กับไวรัสตับอักเสบบีชนิดป่าจีโนมและเก็บเกี่ยวในช่วงเวลาที่ระบุการโพสต์ transfection ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงถูกนำมาใช้เพื่อวัดปริมาณไวรัสตับอักเสบบีอาร์เอ็นเอและ pregenomic ขยาย GAPDH ถูกใช้ในการปกติสำหรับการโหลดที่เท่ากันของแต่ละตัวอย่างอาร์เอ็นเอ histograms ทั้งหมดแสดงค่าเฉลี่ยจากสองการทดลองอิสระ บาร์บ่งบอกถึงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD) รูป 3 HAP12 เป้าหมาย cccDNA การลอกรหัส (2) ใน HepG2 H1.3 มือถือที่มีเสถียรภาพเส้นผลยับยั้ง HAP12 pgRNA ในการลอกรหัส (ง) และการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบี (ข) ได้รับการยืนยัน) HepG2 H1,3 ไวรัสตับอักเสบบีที่มีเสถียรภาพโคลนสะสม cccDNA เมื่อเพาะเลี้ยงในกลางปรับอากาศที่บรรจบกันสูง การรักษา HAP12 จะเริ่มต้นในวันที่ 10 ของ"ความแตกต่าง" เมื่อการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีสูงและสระว่าย cccDNA มีการขยาย pgRNA มีการคัดลอกจากทั้ง cccDNA และไวรัสตับอักเสบบีแบบบูรณาการ ข) อนุภาคแกนนิวเคลียสไวรัสตับอักเสบบี, 10 cccDNA นิวเคลียร์ (ค) และรวม Barnas (ง) ที่แยกได้จากการได้รับการรักษาและเซลล์ HAP12 รับการรักษาที่จุดเวลาที่ระบุ ไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอ, cccDNA และผล pgRNA จะแสดงเป็นในรูปที่ 2 แสดงค่า Histograms เฉลี่ยจากสองการทดลองอิสระ บาร์บ่งบอกถึงมาตรฐานการเบี่ยงเบน (SD). รูป 4 HAP12 ไม่ได้ป้องกันการก่อตัว cccDNA / สะสม โดยการรักษาเซลล์ HepG2 H1.3 กับ HAP12 ก่อนที่ตั้งของสระว่ายน้ำ cccDNA มันแสดงให้เห็นว่าการก่อตัวและการสะสม cccDNA ไม่ได้กำหนดเป้าหมายโดย HAP12 ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้มีผลในการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีเป็นสูงสุด ) การรักษา HAP12 จะเริ่มต้นในวันที่ 0 ของ"ความแตกต่าง" เมื่อการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบีและระดับ cccDNA ที่ต่ำมาก ข) นิวเคลียสไวรัสตับอักเสบบีอนุภาคหลัก cccDNA นิวเคลียร์ (ค) และรวม mRNAs (ง) ที่แยกได้จากการได้รับการรักษาและ20 เซลล์ HAP12 รับการรักษาที่จุดเวลาที่ระบุ ไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอ, cccDNA และผล pgRNA จะแสดงในรูปที่ 2 แสดงค่า Histograms เฉลี่ยจากสองการทดลองอิสระบาร์บ่งบอกถึงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD). รูป 5 HAP12 เป้าหมาย cccDNA การลอกรหัสในเซลล์ AD38 HAP12 ยับยั้งผลกระทบต่อการจำลองแบบไวรัสตับอักเสบบี (ค) และ pgRNA การลอกรหัส (ง) ได้รับการยืนยันต่อไปใน AD38 25 สายพันธุ์ของเซลล์ที่มีเสถียรภาพ ) เมื่อกำจัด tetracycline, เซลล์ AD38 แสดง pgRNA สะสมอนุภาค subviral ในพลาสซึมและหลั่ง virions ไวรัสตับอักเสบบีในสารละลายเซลล์ () สระว่ายน้ำ cccDNA ถูกสร้างขึ้นมาจากการรีไซเคิลของอนุภาคหลักผู้ใหญ่นิวเคลียสหลังจากไวรัสตับอักเสบบีจำลองแบบจะเริ่มต้นจากการคัดลอก pgRNA ครั้งแรกจาก "เทตควบคุม" ไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอแบบบูรณาการ (ข) การรักษา HAP12 จะเริ่มต้นในวันที่ 0 (แผงซ้าย) หรือ 6 วัน (แผงขวา) ค) 30 นิวเคลียสอนุภาคแกนไวรัสตับอักเสบบีและรวม mRNAs (ง) ที่แยกได้จากได้รับการรักษาและเซลล์ HAP12 รับการรักษาที่จุดเวลาที่ระบุ ไวรัสตับอักเสบบีดีเอ็นเอ cccDNA และผล pgRNA จะแสดงในรูปที่ 2 histograms ทั้งหมดแสดงค่าเฉลี่ยจากสองการทดลองอิสระบาร์บ่งบอกถึงความเบี่ยงเบนมาตรฐาน (SD). รูป 6 HAP12 รบกวน HBc ผูกพันกับ cccDNA มันเป็นที่นี้อธิบายว่าการใช้การทดสอบ cccDNA ชิป (ก) ที่ HBc ได้รับคัดเลือกเข้าสู่ cccDNA ไวรัสตับอักเสบบีในการจำลองเซลล์ HepG2 (ข) และ HepG2 H1.3 เซลล์ที่มีเสถียรภาพ HAP12 treament (10 วัน) ยับยั้งการเข้าพัก cccDNA HBc ในเซลล์ HepG2 H1.3 และลดลงอย่างรวดเร็วใน H3 cccDNA ที่ถูกผูกไว้ acetylation สโตน มันเป็นความเชื่อว่าการค้นพบนี้อยู่ในข้อตกลงกับการยับยั้งการสังเกตของ cccDNA การลอกรหัสและการผลิต pgRNA HAP12 ในเซลล์ได้รับการรักษา. HAP12 การรักษาจะเริ่มต้นในวันที่ 10 ของเซลล์ HepG2 H1.3 "ความแตกต่าง" (ตำนานดูไปคิด 3) โครมาเชื่อมโยงที่เตรียมจากได้รับการรักษาและเซลล์ HAP12 รับการรักษาที่ไป(ก่อนการรักษา 10 GG "ความแตกต่าง") และที่ T10 (10 วันของการสัมผัสกับ HAP12 20 GG 10 จากจุดเริ่มต้นของ "ความแตกต่าง") และภูมิคุ้มกันตกตะกอน กับ IgG ควบคุมที่เกี่ยวข้องหรือแอนติบอดีต่อต้าน AcH4 หรือแอนติบอดีต่อต้าน HBc (USBiological, #H) 905-15) โครมาติบิ่นได้รับการวิเคราะห์โดย qPCR กับไวรัสตับอักเสบบี cccDNA ไพรเมอร์ที่เลือก ผลการค้นหาจะแสดงเป็น% ของการป้อนข้อมูล. Histograms แสดงค่าเฉลี่ยจากสองการทดลองอิสระ บาร์บ่งบอกถึงมาตรฐานการเบี่ยงเบน (SD). 7 รูปสารประกอบหลายคนใช้ในการรักษา transfection ชั่วคราวของ Huh-7 เซลล์ (Huh-7 เป็นตับแตกต่างกันมาสายพันธุ์ของเซลล์มะเร็งมือถือ). นิวเคลียส RNA ถูกเก็บเกี่ยวและปริมาณโดย RT-ต่อ . รักษา / ช่วงไดนามิก / ED50: DMSO / 1.6 / NA; AT130 / 25 / 0.51.1M; HAP13 / 20/5 f_tM; HAP12 / 36 / 0.5 j_LM. คำอธิบายรายละเอียด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การพัฒนาของนวนิยายชุดพื้นฐานรักษา HBV เชื้อ ต้องใช้ยาต้านไวรัสใหม่
บล็อควงจรฟังก์ชั่นอื่นๆที่เกี่ยวข้องกับ
โดยไวรัส ที่ศูนย์หลักที่ประกอบด้วยกรดนิวคลีอิก และเปลือกไวรัส , ไวรัสโฮสต์และ
เสริมโปรตีน เป็นเป้าหมายที่น่าสนใจ ประกอบที่เหมาะสมของเปลือกเป็นสําคัญสําหรับบรรจุภัณฑ์ระดับ 20 ,การการลอกรหัสแบบย้อนกลับ และการค้ามนุษย์ เชื่อกันว่า
ประกอบปกติแบบโดยการจับเวลาของ CP และเงินโดยไม่ต้องสายสะสม
ประชากรสังเกตของตัวกลาง นอกจากนี้โปรตีนหลัก ( CP ) มีการแสดง
โต้ตอบกับฮิสโตนและผูกปิดวงกลม covalently นิวเคลียร์ดีเอ็นเอ (
cccdna )อาจจะมีผลต่อการควบคุมการทำงาน cccdna และการบำรุงรักษาของ cccdna 25 มี . อื่น dihydropyrirnidines กลืนกัน ( ระหว่าง ) เป็นระดับของยาต้านซึ่งยับยั้ง HBV
ซ้ำได้ในหลอดทดลองและในสัตว์ทดลอง ( มี zlotnick สารโพลีนิวเคลียร์ , วิทยาศาสตร์ , 2003 ; 2550 ) ระหว่างเพิ่ม
อัตราและขอบเขตหลักของโปรตีน ( CP ) ประกอบในช่วงความเข้มข้นกว้างและพระราชบัญญัติ
เป็นอัลโลสอีกครั้งหนึ่งเพื่อก่อให้เกิดรัฐประกอบที่ใช้งานหรือที่ความเข้มข้นสูง มั่นคง
preferentially ปลอดเพลี้ยพอลิเมอร์ของ CP รบกวนประกอบไวริออนปกติ เป็นผลใน 30 ผลกระทบต่างๆ โปรตีนหลัก ( CP ) ได้รับการแสดงเพื่อโต้ตอบกับฮิสโตนและผูกพัน
cccdna นิวเคลียร์ อาจเอื้อต่อการควบคุมการทำงานและ cccdna
ในการ cccdna เสถียรภาพ ( บ็อค JMB pollicino ระบบทางเดินอาหาร , 2001 , 2006 ;
ก๊วย , แห่งปี 2011 ) ที่อธิบายไว้ในที่นี้ คือการค้นพบว่า ที่ความเข้มข้นสูงข้างบน
ที่การสังเคราะห์ดีเอ็นเอถูกปิดกั้น ระหว่างขัดขวางการผลิตไวรัส RNA
รวมในหนึ่งตัวอย่างของสิ่งประดิษฐ์ วิธีการอธิบายไว้
การรักษาผู้ป่วยที่มีการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี ( HBV ) ซึ่งประกอบด้วย 5 ขั้นตอน วิธีการดูแลคนไข้จำนวนสารประกอบที่สามารถยับยั้งการสะสมของ HBV DNA
pregenomic มีประสิทธิภาพ therapeutically ( pgrna ) ในเซลล์ของผู้ป่วยติดเชื้อ HIV .
ในศูนย์รวมอื่น วิธีการสำหรับการอธิบาย สารประกอบที่เป็นประโยชน์
สำหรับการรักษาของการติดเชื้อไวรัสตับอักเสบบี ( HBV ) ประกอบด้วย : ติดต่อเซลล์ที่ติดเชื้อ HIV 10 พร้อมกับการทดสอบสารในสื่อวัฒนธรรม หรือเรื่องสารประกอบที่มีศักยภาพ
สัตว์ ; รับตัวอย่างจากเซลล์ สื่อวัฒนธรรม หรือจากเนื้อเยื่อของสัตว์
ในหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งจุด เวลา การวิเคราะห์ตัวอย่างสำหรับหนึ่งหรือมากกว่าหนึ่งแอททริบิวต์ที่
กลุ่มที่ประกอบด้วยศูนย์ cccdna ความเข้มข้น ปริมาณ methylated cccdna ทิเลชัน
, รัฐ cccdna HBV cccdna การลอกรหัส HBV DNA , , ความเข้มข้นในมือถือขนาด 15 ตรวจพบ RNA ในเซลล์นิวเคลียสปริมาณความเข้มข้นของ unassembled แคปซิดโปรตีน และตรวจพบแอนติเจนของ S
; และระบุสารประกอบที่เป็นประโยชน์สำหรับการรักษาโรคไวรัสตับอักเสบบี
ตามการลดลงหรือเพิ่มขึ้นของหนึ่งของแอตทริบิวต์ อธิบายรายละเอียดของภาพวาด


รูป 1 ระหว่าง : คลาสใหม่ของยาต้านยับยั้ง HIV ระหว่างการส่งผิดศูนย์ประกอบและป้องกันเพลี้ย

พบซ้ำรูป 2 hap12 เป้าหมาย cccdna การลอกรหัส ( 1 ) hap12 การทำให้สมบูรณ์ของการปราบปรามเพียงอย่างเดียวที่ 72 และ 96 ชั่วโมงกับจุดสูงสุด > ลด 50% ของ pgrna การลอกรหัสที่ 96 ชั่วโมง และลดลงประมาณ 30% ใน cccdna ระดับ .
) ในเซลล์มะเร็งตับด้วยวิธีเชิงเส้น transfected ความยาวเต็มรูปแบบและการ pgrna
ศูนย์ศูนย์จะขึ้นอยู่กับการสร้าง cccdna ,และ chromatinization การลอกรหัส .
b ) cytoplasnaic HBV ของอนุภาคที่แยกได้จากเซลล์และการรักษา hap12 ที่ระบุเวลาจุดหลังค . ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นหมายเลขของ HBV DNA ชุดต่อ transfected เซลล์ c ) cccdna ในการสะสมและรักษาเซลล์มะเร็งตับ และ hap12
transfected กับจีโนมพบชนิดป่าการวิเคราะห์การใช้ qpcr เลือก
cccdna ไพรเมอร์เพื่อขยายและปรับ cccdna เบตาโกลบินชนิดดีเอ็นเอ .
) ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นจำนวน cccdna สำเนาต่อ transfected เซลล์ D ) รหัสถูกเตรียมจากสาร ifna
และรักษาเซลล์มะเร็งตับ transfected กับจีโนม HBV
ชนิดป่าและเก็บเกี่ยวที่พบครั้งหลังค .ไพรเมอร์ที่จำเพาะที่ใช้






ที่มี HBV pregenomic RNA และ gapdh ขยายใช้ให้โหลดที่เท่ากันของแต่ละประเภทตัวอย่าง หมายถึงค่าฮิสโตแกรมแสดงทั้งหมดจากสองการทดลองอิสระ ; แถบที่บ่งชี้ค่าความเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )
รูป 3 hap12 เป้าหมาย cccdna การลอกรหัส ( 2 ) ในเซลล์มะเร็งตับ h1.3
ที่มั่นคงบรรทัด hap12 ยับยั้งผลกระทบต่อ pgrna การลอกรหัส ( D ) และการศึกษาซ้ำ ( B )
ยืนยัน ) มะเร็งตับ h1,3 HBV มั่นคงโคลนสะสม cccdna เมื่อเพาะเลี้ยงในอาหารที่บรรจบ
ปรับสูง hap12 รักษาเริ่มต้นในวันที่ 10 ของ
" ความแตกต่าง " เมื่อตรวจพบการสูงและ cccdna พูลเพิ่ม pgrna คือ
การทับศัพท์จากทั้ง cccdna HBV และบูรณาการb ) พบ HBV แกนอนุภาคนิวเคลียร์
10 cccdna ( C ) และบาร์เนิสรวม ( D ) ที่แยกได้จากเซลล์และการรักษา hap12
ที่ระบุเวลาจุด hbv-dna cccdna pgrna , และผลลัพธ์ที่แสดงในรูปที่ 2
ฮิสโตแกรมแสดงหมายถึงค่าจาก 2 การทดลองอิสระ ; แถบที่บ่งชี้ค่าความเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )
.
รูป 4 hap12 ไม่ได้ป้องกันการสะสม cccdna .การรักษามะเร็งตับด้วย
h1.3 เซลล์ที่มี hap12 ก่อนที่ตั้งของ cccdna สระพบ
ที่ก่อตัว cccdna และการสะสมไม่ใช่เป้าหมายโดย hap12 . ภายใต้เงื่อนไขเหล่านี้มีผลต่อการ
HBV อยู่สูงสุด ) hap12 รักษาเริ่มต้นที่ 0
" ความแตกต่าง " และเมื่อตรวจพบการ cccdna ระดับต่ำมาก b ) พบ HBV
แกนอนุภาคนิวเคลียร์ cccdna ( C ) และรหัสรวม ( D ) ที่แยกได้จากดิบและ
20 hap12 รักษาเซลล์ที่ระบุเวลาจุด hbv-dna cccdna pgrna , และผล
แสดงในรูปที่ 2 ฮิสโตแกรมแสดงหมายถึงค่าจาก 2 การทดลองอิสระ ;
แถบแสดงส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )
รูป 5 hap12 เป้าหมาย cccdna การลอกรหัสใน ad38 เซลล์ hap12 ยับยั้ง
ผลการศึกษาซ้ำ ( C ) และ pgrna การลอกรหัส ( D ) ยังยืนยันใน ad38 25 มีเซลล์ไลน์ ) เมื่อถอดเตตราไซคลีน เซลล์ ad38 ด่วน pgrna สะสม
อนุภาค subviral ในไซโตปลาสซึมและหลั่งตรวจพบไวรัสในเซลล์สูง ( )
cccdna พูลถูกสร้างขึ้นจากการรีไซเคิลของผู้ใหญ่ของอนุภาคในนิวเคลียส หลังจากตรวจพบ
คำตอบคือ เริ่มจาก pgrna เริ่มคัดลอกจาก " เครื่องควบคุม " HBV DNA แบบบูรณาการ
( B ) hap12 รักษาเริ่มต้นที่ 0 ( ซ้ายแผง ) หรือวันที่ 6 ( แผง ) C ) 30 พบ HBV ของอนุภาค และรหัสรวม ( D ) ที่แยกได้จากดิบและ
hap12 รักษาเซลล์ที่ระบุเวลาจุด HBV DNA และผลลัพธ์ cccdna pgrna
แสดงในรูปที่ 2หมายถึงค่าฮิสโตแกรมแสดงทั้งหมดจากสองการทดลองอิสระ ;
แถบแสดงส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )







รูป 6 hap12 รบกวน HBC ผูกกับ cccdna . มันเป็นเครื่องที่ใช้ชิป cccdna
อธิบายวิธี ( ) ที่ถูกเกณฑ์เข้า HBC cccdna ประสบความสำเร็จในการศึกษาเซลล์มะเร็งตับ ( B ) และเซลล์มะเร็งตับ h1.3 มั่นคงในบรรทัดhap12 treament ( 10 วัน ) ขอยับยั้ง cccdna เข้าพักในการตรวจมะเร็งตับ h1.3 เซลล์และลดลงคมชัดใน
cccdna ผูกพัน H3 หมอกแดดทิเลชัน . มันคือเชื่อว่า การค้นพบนี้สอดคล้องกับ
สังเกตการยับยั้ง cccdna การลอกรหัส pgrna และการผลิตใน hap12 รักษาเซลล์
hap12 รักษาเริ่มต้นในวันที่ 10 ของ h1.3 เซลล์มะเร็งตับ " ความแตกต่าง " ( ดูตำนาน

รูปที่ 3 ) ข้ามการเชื่อมโยงโซ่และเตรียมได้จากเซลล์ที่ได้รับสาร hap12

( ก่อนการรักษา , 10 GG " ความแตกต่าง " ) และที่ t10 ( 10 วันของการเปิดรับ hap12 20 GG 10 จากจุดเริ่มต้นของ " ความแตกต่าง " ) และภูมิคุ้มกันที่ตกตะกอนด้วยการควบคุมที่เกี่ยวข้องหรือแอนติบอดี IgG
anti-ach4 หรือแอนติบอดีต่อต้าน ( usbiological HBC , # H ) 905-15 ) บิ่นคือ
โครมาตินวิเคราะห์ข้อมูลโดย qpcr กับ HBV cccdna เลือกรองพื้น ผลลัพธ์ที่ได้จะแสดงเป็นเปอร์เซ็นต์ของการป้อนข้อมูล
ฮิสโตแกรมแสดงหมายถึงค่าจาก 2 การทดลองอิสระ ; แถบที่บ่งชี้ค่าความเบี่ยงเบนมาตรฐาน ( SD )
.
รูป 7 หลายสารที่ใช้รักษาสำหรับชั่วคราวของ huh-7
เซลล์ ( huh-7 เป็นเซลล์ตับและเซลล์มะเร็งแตกต่าง
บรรทัด )นี้คือการเก็บเกี่ยวและปริมาณ RNA โดย RT ต่อ . การรักษา / Dynamic Range / ed50 : DMSO / 1.6/na ; at130 / 25 / 0.51.1m ; hap13 / 20 / 5 f_tm ; hap12 / 36 / 0.5 j_lm .



รายละเอียด