All reagents were at least analytic

All reagents were at least analytical grade; organic solvents
used for HPLC analysis were of HPLC grade. All carotenoid determinations
in the different samples were done in duplicate.
The analytical method used for carotenoid determination is
described elsewhere (Dias, Camões, & Oliveira, 2009). In brief,
the samples were extracted four times with a methanol:tetrahydrofurane
mixture (1:1) after addition of basic magnesium carbonate
and an internal standard (b-apo-80-carotenal for fruits,
echinenone for vegetables). The solvent was evaporated (35 C
in a rotary evaporator) and the solid residue dissolved in 0.5
or 5 ml dichloromethane (accordingly to predicted carotenoid
mass fraction). The volume was made up to 5 or 50 ml, respectively,
with solvents to obtain a final composition near to the
mobile phase (see below). These extracts were injected in the
HPLC system. Fruit extracts (2 ml) were saponified with 5%
potassium hydroxide for 1 h at room temperature, under nitrogen
in the dark, in a pyrogallol antioxidant medium. After
extraction with petroleum ether and washing with water, the
solvent was evaporated and the residue dissolved in mobile
phase for analysis.Reverse phase HPLC with UV/Vis diode array detection at
450 nm was used for separation and quantification. AWaters HPLC
system, composed of a 600 controller and pump, a 717plus auto
sampler, a 2996 photodiode array detector and Empower software,
was used. The mobile phase, acetonitrile:methanol (containing
0.05 mol dm3 ammonium acetate):dichloromethane, 75:20:5, v/
v/v, containing 0.1% BHT and 0.05% triethylamine, was filtered
through a 0.45 lm PTFE membrane filter and degassed in an ultrasonic
bath. Two columns, a Waters Spherisorb ODS2 PEEK (poly
ether ether ketone) lined (Alltech, cat. No. 8161), 5 lm,
100  4.6 mm serial connected to a reverse phase C18 (Vydac,
cat. No. 201TP54), 5 lm, 250  4.6 mm, were used. Flow rate was
1.5 ml/min, injection volume 50 ll and stop time 30 min (except
for orange: 105 min). Each sample solution was injected twice.
Using the HPLC system software, carotenoids were identified by
comparison with carotenoid standards: retention time, visible
absorption spectra (kmax) and spectral fine structure – ratio of the
height of the longest wavelength absorption peak and that of the
middle absorption peak, taking the minimum between the two
peaks as the baseline (Britton, 1995). External standards calibration,
based on peak areas, was used for quantification. For each
analyte, six working standard solutions (0.05, 1, 2, 3, 4 and 5 lg/
ml were used to construct calibration curves using the least
squares method. Internal standard recovery was used to correct
sample carotenoid mass fraction. All standard solutions were
stored at 70 C under nitrogen and in the dark. On each occasion
of analysis, stock standard solutions were prepared from the solid
standards, and individual working solutions of each carotenoid injected
onto the HPLC system to verify purity and mass
concentration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เปื้อนทั้งหมดได้เกรดน้อยวิเคราะห์ ตัวทำละลายอินทรีย์ใช้สำหรับ HPLC ได้วิเคราะห์ HPLC เกรด วิเคราะห์ปริมาณ carotenoid ทั้งหมดในตัวอย่างต่าง ๆ ทำสำเนาเป็นวิธีวิเคราะห์ที่ใช้สำหรับการกำหนด carotenoidอธิบายอื่น (ของ Dias, Camões, & Oliveira, 2009) โดยสังเขปตัวอย่างที่สกัดสี่ครั้ง ด้วยเมทานอล: tetrahydrofuraneส่วนผสม (1:1) หลังจากเพิ่มพื้นฐานแมกนีเซียมคาร์บอเนตและมีมาตรฐานภายใน (b-อาโป-80-carotenal ผลไม้echinenone สำหรับผัก) ถูกตัวทำละลายระเหย (35 Cในระเหยโรตารี่) และกากของแข็งละลายใน 0.5หรือ 5 มล. dichloromethane (carotenoid ตามการคาดการณ์ส่วน) ไดรฟ์ข้อมูลถูกสร้างขึ้นถึง 5 หรือ 50 ml ตามลำดับด้วยตัวทำละลายจะได้รับองค์ประกอบสุดท้ายใกล้เฟสเคลื่อนที่ (ดูด้านล่าง) ถูกฉีดสารสกัดเหล่านี้ในการระบบ HPLC สารสกัดจากผลไม้ (2 ml) ถูก saponified กับ 5%โพแทสเซียมไฮดรอกไซด์สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง ภายใต้ไนโตรเจนในมืด ใน pyrogallol สื่อสารต้านอนุมูลอิสระ หลังจากสกัด ด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์และซัก ด้วยน้ำ การมีระเหยตัวทำละลาย และสารตกค้างละลายในมือถือระยะสำหรับการวิเคราะห์ กลับเฟส HPLC มี UV/Vis ไดโอดอาร์เรย์การตรวจจับที่450 nm ใช้ในการแยกและการนับ AWaters HPLCระบบ ประกอบด้วยตัวควบคุม 600 และปั๊ม อัตโนมัติ 717plusแซมเพลอร์ 2996 โฟโตไดโอดอาร์เรย์จับ และ ซอฟต์แวร์แก่ใช้ ระยะเคลื่อน acetonitrile:methanol (ประกอบด้วย0.05 mol dm 3 แอมโมเนียอะซิเตท): dichloromethane, 75:20:5, v /v/v ที่ประกอบด้วยบาท 0.1% และ 0.05% triethylamine ถูกกรองผ่านตัวกรองเมมเบรน PTFE lm 0.45 และ degassed ในตัวบาท สองคอลัมน์ แบบน้ำ Spherisorb ODS2 PEEK (โพลีเรียงรายอีเทอร์อีเทอร์คีโตน) (ลเท แมว หมายเลข 8161), 5 lmเชื่อมต่อประจำเครื่อง 4.6 มม. 100 ย้อนกลับขั้นตอน C18 (Vydacแมว หมายเลข 201TP54), 5 ใช้ lm, 250 4.6 มม. อัตราการไหล1.5 ml/min ฉีดปริมาณ 50 ll และหยุดเวลา 30 นาที (ยกเว้นสำหรับสีส้ม: 105 นาที) แก้ปัญหาแต่ละอย่างถูกฉีดสองครั้งใช้ซอฟต์แวร์ระบบ HPLC แคโรทีนอยด์ถูกระบุโดยเปรียบเทียบกับมาตรฐาน carotenoid: เวลาเก็บข้อมูล การมองเห็นสเปกตรัมการดูดซึม (kmax) และสเปกตรัมปรับโครงสร้างอัตราส่วนของการความสูงของการดูดซึมสูงที่ยาวที่สุดของความยาวคลื่นและของกลางการดูดซึมสูงสุด การขั้นต่ำระหว่างสองยอดเป็นพื้นฐาน (Britton, 1995) การสอบเทียบมาตรฐานภายนอกอิงจากพื้นที่สูงสุด ใช้สำหรับนับ สำหรับแต่ละanalyte โซลูชั่นการทำงานของมาตรฐานหก (lg 0.05, 1, 2, 3, 4 และ 5 /มล.ใช้ในการสร้างกราฟสอบเทียบที่ใช้น้อยที่สุดวิธีการสี่เหลี่ยม การกู้คืนมาตรฐานภายในใช้ในการแก้ไขตัวอย่างเศษส่วนมวล carotenoid โซลูชั่นมาตรฐานทั้งหมดได้เก็บไว้ที่ 70 C ภาย ใต้ไนโตรเจน และ ในมืด ในแต่ละครั้งการวิเคราะห์ ละลายมาตรฐานวจัดทำจาก solidมาตรฐาน และการแก้ไขปัญหาทำงานแต่ละแต่ละ carotenoid ที่ฉีดเข้าระบบ HPLC เพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์และมวลความเข้มข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

น้ำยาทั้งหมดอยู่ในชั้นประถมศึกษาวิเคราะห์อย่างน้อย; ตัวทำละลายอินทรีย์
ใช้ในการวิเคราะห์ HPLC เป็นของเกรด HPLC ทั้งหมดหาความ carotenoid
ในตัวอย่างที่แตกต่างกันได้ทำในที่ซ้ำกัน
วิธีการวิเคราะห์ที่ใช้สำหรับการวัด carotenoid จะ
อธิบายอื่น ๆ (เดียCamões & Oliveira 2009) ในช่วงสั้น ๆ
ตัวอย่างถูกสกัดสี่ครั้งด้วยเมทานอล: tetrahydrofurane
ส่วนผสม (1: 1) หลังจากที่นอกเหนือจากแมกนีเซียมคาร์บอเนตพื้นฐาน
และมาตรฐานภายใน (B-APO-80-carotenal สำหรับผลไม้,
echinenone สำหรับผัก) ตัวทำละลายระเหย (35 องศาเซลเซียส
ในเครื่องระเหยแบบหมุน) และสารตกค้างที่เป็นของแข็งที่ละลายใน 0.5
หรือ 5 มิลลิลิตรไดคลอโรมีเทน (ตามที่คาดการณ์ carotenoid
ส่วนมวล) ปริมาณที่ถูกสร้างขึ้นถึง 5 หรือ 50 มล. ตามลำดับ
ด้วยตัวทำละลายเพื่อให้ได้องค์ประกอบสุดท้ายใกล้กับ
เฟสเคลื่อนที่ (ดูด้านล่าง) สารสกัดเหล่านี้ถูกฉีดใน
ระบบ HPLC สารสกัดจากผลไม้ (2 มล.) ได้รับการกราฟต์ 5%
โพแทสเซียมไฮดรอกไซเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องภายใต้ไนโตรเจน
ในที่มืดในกลางสารต้านอนุมูลอิสระ pyrogallol หลังจากที่
สกัดด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์และล้างด้วยน้ำ
ตัวทำละลายระเหยและสารตกค้างที่ละลายในมือถือ
เฟส analysis.Reverse HPLC เฟสที่มี UV / Vis ไดโอดตรวจจับอาร์เรย์ที่
450 นาโนเมตรถูกนำมาใช้สำหรับการแยกและการหาปริมาณ AWaters HPLC
ระบบประกอบด้วยตัวควบคุม 600 และปั๊มอัตโนมัติ 717plus
ตัวอย่างเป็น 2996 เครื่องตรวจจับโฟโตไดโอดอาร์เรย์และช่วยให้ซอฟต์แวร์
ที่ใช้ เฟสเคลื่อนที่, acetonitrile: เมทานอล (ที่มี
0.05 mol dm 3 แอมโมเนียมอะซิเตท?): ไดคลอโรมีเทน, 75: 20: 5 v /
v / V ที่มี 0.1% บาทและ% triethylamine 0.05, ถูกกรอง
ผ่าน 0.45 LM กรองเมมเบรน PTFE และกำจัดก๊าซในล้ำ
อาบน้ำ คอลัมน์ที่สองเป็นน้ำ Spherisorb ODS2 PEEK (โพลี
คีโตนอีเทอร์อีเทอร์) เรียงราย (ออลเทค, แมว. เลขที่ 8161) 5 LM,
100? 4.6 มมอนุกรมเชื่อมต่อกับเฟสย้อนกลับ C18 (Vydac,
แมว. เลขที่ 201TP54) 5 LM 250? 4.6 มมถูกนำมาใช้ อัตราการไหลเป็น
1.5 มล. / นาทีฉีดปริมาณ 50 LL และหยุดเวลา 30 นาที (ยกเว้น
สำหรับ orange: 105 นาที) วิธีการแก้ปัญหาแต่ละตัวอย่างถูกฉีดสองครั้ง
การใช้ซอฟแวร์ระบบ HPLC, carotenoids ถูกระบุโดย
เปรียบเทียบกับมาตรฐาน carotenoid: เวลาการเก็บรักษาที่มองเห็น
การดูดซึมสเปกตรัม (kmax) และปรับโครงสร้างสเปกตรัม - อัตราส่วนของ
ความสูงของคลื่นดูดซึมสูงสุดที่ยาวที่สุดและของ
ยอดการดูดซึมกลางการขั้นต่ำ ระหว่างสอง
ยอดเป็นพื้นฐาน (บริตตัน, 1995) การสอบเทียบมาตรฐานภายนอก
ขึ้นอยู่กับพื้นที่สูงสุดที่ใช้สำหรับปริมาณ สำหรับแต่ละ
วิเคราะห์หกทำงานแก้ปัญหามาตรฐาน (0.05, 1, 2, 3, 4 และ 5 LG /
มล. ถูกนำมาใช้ในการสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบการใช้น้อย
วิธีสี่เหลี่ยม. กู้คืนมาตรฐานภายในถูกใช้ในการแก้ไข
ตัวอย่างส่วนมวล carotenoid. โซลูชั่นมาตรฐานทั้งหมด ถูก
เก็บไว้ที่? 70? C ภายใต้ไนโตรเจนและในที่มืด. เนื่องในโอกาสที่แต่ละ
ของการวิเคราะห์การแก้ปัญหามาตรฐานหุ้นที่เตรียมจากของแข็ง
มาตรฐานและการแก้ปัญหาการทำงานของแต่ละบุคคล carotenoid ฉีด
เข้าสู่ระบบ HPLC เพื่อตรวจสอบความบริสุทธิ์และมวล
ความเข้มข้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สารเคมีเกรดวิเคราะห์ทั้งหมดเป็นอย่างน้อย ; ตัวทำละลายอินทรีย์ใช้สำหรับการวิเคราะห์ HPLC ได้เกรด 4 . การวิเคราะห์ปริมาณแคโรทีนอยด์ทั้งหมดในตัวอย่างที่แตกต่างกัน ทำในที่ซ้ำกันการวิเคราะห์ปริมาณคาโรทีนอยด์จะใช้วิธีอธิบายไว้ในที่อื่น ( ดิ แคมõ ES และ โอลิเวียร่า , 2009 ) ในช่วงสั้น ๆตัวอย่างที่สกัดด้วย methanol : tetrahydrofurane สี่ครั้งส่วนผสม ( 1 : 1 ) หลังจากเติมคาร์บอเนตแมกนีเซียมขั้นพื้นฐานและภายในมาตรฐาน ( b-apo-80-carotenal สำหรับผลไม้echinenone ผัก ) ตัวทำละลายที่ระเหยได้ ( 35 องศาเซลเซียสในเครื่องระเหยแบบหมุน ) และกากของแข็งที่ละลายใน 0.5หรือสิ่ง 5 ml ( ตามคาดคาโรทีนอยด์เศษส่วนมวล ) ปริมาณได้ถึง 5 หรือ 50 มิลลิลิตร ตามลำดับด้วยตัวทำละลายเพื่อให้ได้องค์ประกอบสุดท้ายที่ใกล้ ๆ กับเฟสเคลื่อนที่ ( ดูด้านล่าง ) สารสกัดเหล่านี้ถูกส่งในระบบ HPLC . สารสกัดจากผลไม้ ( 2 มล. ) 5 เปอร์เซ็นต์การดูดซึมโพแทสเซียมโซดาไฟ เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้องภายใต้ไนโตรเจนในที่มืด ในที่ซึ่งสารต้านอนุมูลอิสระปานกลาง หลังจากสกัดด้วยอีเทอร์ และล้างด้วยน้ำปิโตรเลียม ,เป็นตัวทำละลายระเหยและสารตกค้างละลายในโทรศัพท์มือถือขั้นตอนในการวิเคราะห์ กลับเฟส HPLC ด้วย UV / VIS ไดโอดอาร์เรย์ที่ตรวจจับ450 nm ใช้สำหรับการแยกและปริมาณ . awaters HPLCระบบ ประกอบด้วย 600 และรถยนต์ 717plus ควบคุมปั๊มตัวอย่าง ที่ 1 โฟโตไดโอดเรย์ตรวจจับและช่วยให้ซอฟต์แวร์คือใช้ โทรศัพท์มือถือ : เมทานอล ( ที่มีไนเฟส0.05 mol dm3 แอมโมเนียมอะซิเตท ) : ไดคลอโรมีเทน 75:20:5 , V /ปริมาตร / ปริมาตร ประกอบด้วย 0.1% บาท 0.05 เปอร์เซ็นต์ไตรเอตทิลามีน , กรองผ่านเยื่อกรองและ 0.45 LM PTFE degassed ในอัลตราโซนิกบาท สองคอลัมน์ , น้ำ spherisorb ods2 แอบมอง ( โพลีอีเทอร์อีเทอร์คีโตน ) เส้น ( เพราะแมว เลขที่การผลิต ) , LM 5 ,100 4.6 มิลลิเมตรต่อเนื่องเชื่อมต่อกับกลับเฟส ( vydac c18 ,แมว ไม่ 201tp54 ) 5 , LM , 250 4.6 มม. มาใช้ อัตราการไหล1.5 ml / min การฉีดปริมาณ 50 และจะหยุดเวลา 30 นาที ( ยกเว้นสีส้ม : 105 นาที ) แต่ละตัวอย่างสารละลายที่ฉีดสองครั้งการใช้ซอฟต์แวร์ระบบ HPLC , คาร์โรทีนอยด์ถูกระบุโดยเปรียบเทียบกับมาตรฐานในเวลาการเก็บรักษา , มองเห็นได้การดูดกลืนรังสี ( kmax ) และการปรับอัตราส่วนของโครงสร้างฯความสูงของคลื่นที่ยาวที่สุดและการดูดซึมสูงสุดของพีคการดูดกลืนกลาง , การติดต่อกันระหว่างสองยอดเป็น 0 ( บริตตัน , 1995 ) มาตรฐานสำหรับการสอบเทียบขึ้นอยู่กับพื้นที่สูงสุด ใช้ปริมาณ . สำหรับแต่ละครู 6 โซลูชั่นมาตรฐานการทำงาน ( 0.5 , 1 , 2 , 3 , 4 และ 5 LG /มลใช้เพื่อสร้างเส้นโค้งสอบเทียบโดยใช้น้อยที่สุดวิธีกำลังสอง . การกู้คืนแบบมาตรฐานภายในถูกใช้ให้ถูกต้องตัวอย่างเชื้อที่เศษส่วนมวล . โซลูชั่นมาตรฐานคือที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียส ภายใต้ไนโตรเจนและในที่มืด ในแต่ละโอกาสวิเคราะห์หุ้นโซลูชั่นมาตรฐานที่เตรียมจากของแข็งมาตรฐานและการทำงานของแต่ละบุคคลในการฉีด โซลูชั่นลงระบบ HPLC เพื่อยืนยันความบริสุทธิ์ และมวลชนสมาธิ