Sample preparationA textured soybea

Sample preparation
A textured soybean (46% protein, determined by Kjeldahl method)
sample was purchased in a local supermarket, prepared following the
commercial instructions (hydrated and microwave cooked, total moisture
78%) and squeezed to eliminate as much water as possible. The
final protein content of the hydrated textured soybean determined by
Kjeldahl was 12.5% (w⁄w).
Porkmusclewas acquired in a local retail market and used to prepare
reference binary mixtures containing 0.1%, 0.5%, 2.5%, 10.0% and 50.0%
(w/w) of hydrated textured soybean in pork meat (corresponding to
0.0125%, 0.0625%, 0.313%, 1.25% and 6.25% (w/w) of dried soybean
protein, respectively) to a final weight of 100 g. Positive (100% soybean)
and negative (100% pork) control samples were also prepared. To validate
themethodology, blind validationmixtures containing 1.0% (2 mixtures),
5.0% and 25.0% (w/w) of hydrated soybean in pork meat
(corresponding to 0.125%, 0.625% and 3.125% (w/w) of dried soybean,
respectively) were prepared in the same way as the reference mixtures.
The binary and validation mixtures were triturated and homogenised
using a blender after the addition of 15 mL of sterile phosphatebuffered
saline solution (136 mM NaCl, 1.4 mM KH2PO4, 8.09 mM
Na2HPO4·12H2O and 2.6 mM KCl, pH 7.2) and stored at −20 °C
until analysis.
Samples of commercial processed meat products were purchased
in local supermarkets and included hamburgers (n = 14), meatballs
(n=4), nuggets (n=3), canned (n=5) and bottled (n=12) Frankfurt
type sausages and raw/barbecue sausages (n = 4). All samples were
ground, homogenised and stored at −20 °C until analysis.
To avoid contaminations, all samples andmixtureswere ground and
homogenised separately in a knife mill Grindomix GM200 (Retsch,
Haan, Germany) using different knives and different blender containers,
previously treated with DNA decontaminator solution.
2.2. DNA extraction
DNA was extracted using theWizard method with minor modifications
as described byMafra, Silva,Moreira, Ferreira da Silva, and Oliveira
(2008b). The extractions were performed in duplicate for each
sample and binarymixtures. All extractions included a blank extraction
for the control of reagents and contaminations during extraction
procedure.
2.3. DNA quantification and purity
The DNA was quantified by spectrophotometry using a Shimadzu
UV-1800 spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan).
The DNA concentration was determined by UV absorbance at 260 nm
(1 absorbance unit corresponds to 50 ng/μL of dsDNA). The purity of
the extracts was evaluated based on the ratio of the absorbance at 260
and 280 nm.
2.4. Oligonucleotide primers
The oligonucleotide primers used in thiswork were LE3/LE4 for qualitative
PCR detection of soybean lectin gene (Table 1). For quantitative
real-time PCR assays, the oligonucleotide primers and probes Lectin-F/
Lectin-R and Lectin-TMP were used for soybean lectin gene amplification,
whilst EUK-F/EUK-R and S5 were used to amplify a fragment of
nuclear 18S rRNA gene (Table 1). According to López-Andreo, Lugo,
Garrido-Pertierra, Prieto, and Puyet (2005), the complete 18S rRNA
gene from 50 selected eukaryotic organisms, incorporating mammals,
birds, reptiles, amphibians, arthropods, molluscs, green plants, and
fungi was used to select conserved regions to design the primers and
probes for the quantitation of the total eukaryotic DNA in the samples.
The oligonucleotide primers and probes were synthesised by Eurofins
MWG Operon (Ebersberg, Germany).
2.5. End-point PCR
The PCR amplifications were carried out in 25 μL total reaction
volume containing 2 μL of DNA (50–100 ng) extract, 15 mM Tris–HCl
(pH 8.3), 50 mM KCl, 0.5 μM of each primer (LE3 and LE4) (Table 1),
0.2 mM of each dNTP (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), 1.5 mM MgCl2
and 1 U of DNA polymerase AmpliTaq Gold® (Applied Biosystems,
Branchburg, NJ, USA). The reactions were performed in a thermal cycler
PTC-100 (MJ Research, Inc., Watertown, MA, USA) using the following
programme: initial denaturation at 95 °C for 5 min, 35 cycles of 30 s at
95 °C, 30 s at 60 °C and 30 s at 72 °C, and a final extension at 72 °C for
5 min. The amplified fragments were analysed by electrophoresis in a
2.0% agarose gel carried out in TAE buffer (40 mM Tris-acetate, 1 mM
EDTA) for 60 min at 120 V, stained with ethidium bromide (0.4 μg/mL
for 5 min) and destained in distilled water for 30 min. The agarose gel
was visualised under UV light and a digital image was obtained using
a Kodak Digital Science™ DC120 (Rochester, NY, USA). Each extract
was amplified in duplicate assays.
2.6. Real-time PCR
The amplifications by real-time PCRwere carried out in 20 μL total reaction
volume containing 2 μL (50 ng) of DNA extract, 1× iQ™Supermix
(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA), 600 nM and 900 nM of each
primer EUK-F/EUK-R and Lectin-F/Lectin-R, respectively, and 200 nM
and 100nM of each probe S5 and Lectin-TMP, respectively for eukaryotic
and lectin genes (Table 1). Parallel reactions were prepared for each
target sequence. The assays were performed on a fluorimetric thermal
cycler iCycler iQ™ Real-time Detection System (Bio-Rad Laboratories,

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เตรียมตัวอย่างถั่วเหลืองผิว (46% โปรตีน กำหนด โดยวิธี Kjeldahl)ตัวอย่างที่ซื้อที่ซุปเปอร์มาร์เก็ต เตรียมพร้อมต่อการคำแนะนำเชิงพาณิชย์ (hydrated และไมโครเวฟ อาหารความชื้นรวม78%) และค็อฟเพื่อกำจัดน้ำที่มากที่สุด ที่สุดท้ายโปรตีนของถั่วเหลืองผิวผลิตภัณฑ์ที่กำหนดโดยKjeldahl ได้ 12.5% (w⁄w)Porkmusclewas มาในตลาดภายใน และใช้ในการเตรียมอ้างอิงน้ำยาผสมไบนารีที่ประกอบด้วย 0.1%, 0.5%, 2.5%, 10.0% และ 50.0%(w/w) ของถั่วเหลืองผิวผลิตภัณฑ์ในเนื้อหมู (ที่สอดคล้องกับ0.0125%, 0.0625%, 0.313%, 1.25% และ 6.25% (w/w) ของถั่วเหลืองแห้งโปรตีน ตามลำดับ) น้ำหนักสุดท้าย 100 กรัมบวก (ถั่วเหลือง 100%)และยังมีเตรียมตัวอย่างควบคุม (หมู 100%) ลบ การตรวจสอบthemethodology, validationmixtures ตาบอดประกอบด้วย 1.0% (2 น้ำยาผสม),5.0% และ 25.0% (w/w) ของผลิตภัณฑ์ถั่วเหลืองในเนื้อหมู(สอดคล้องกับ 0.125%, 0.625% และ 3125% (w/w) ของถั่วเหลืองแห้งตามลำดับ) ได้จัดทำในลักษณะเดียวกับน้ำยาผสมอ้างอิงน้ำยาผสมไบนารีและสอบ triturated และ homogenisedใช้ blender ความหลังแห่ง 15 mL ของกอซ phosphatebufferedน้ำเกลือ (136 มม. NaCl, KH2PO4, 8.09 mM 1.4 มม.Na2HPO4·12H2O และ 2.6 mM KCl, pH 7.2) และเก็บไว้ที่ −20 ° Cจนถึงการวิเคราะห์ตัวอย่างของผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์แปรรูปค้าซื้อในซุปเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นและแฮมเบอร์เกอร์รวม (n = 14), ลูกชิ้น(n=4), nuggets (n=3), canned (n=5) and bottled (n=12) Frankfurttype sausages and raw/barbecue sausages (n = 4). All samples wereground, homogenised and stored at −20 °C until analysis.To avoid contaminations, all samples andmixtureswere ground andhomogenised separately in a knife mill Grindomix GM200 (Retsch,Haan, Germany) using different knives and different blender containers,previously treated with DNA decontaminator solution.2.2. DNA extractionDNA was extracted using theWizard method with minor modificationsas described byMafra, Silva,Moreira, Ferreira da Silva, and Oliveira(2008b). The extractions were performed in duplicate for eachsample and binarymixtures. All extractions included a blank extractionfor the control of reagents and contaminations during extractionprocedure.2.3. DNA quantification and purityThe DNA was quantified by spectrophotometry using a ShimadzuUV-1800 spectrophotometer (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan).The DNA concentration was determined by UV absorbance at 260 nm(1 absorbance unit corresponds to 50 ng/μL of dsDNA). The purity ofthe extracts was evaluated based on the ratio of the absorbance at 260and 280 nm.2.4. Oligonucleotide primersThe oligonucleotide primers used in thiswork were LE3/LE4 for qualitativePCR detection of soybean lectin gene (Table 1). For quantitativereal-time PCR assays, the oligonucleotide primers and probes Lectin-F/Lectin-R and Lectin-TMP were used for soybean lectin gene amplification,ในขณะที่ใช้ขยายส่วนของ EUK-F/EUK-R และ S5นิวเคลียร์ 18S rRNA ยีน (ตาราง 1) ตาม López Andreo, LugoGarrido Pertierra ใน และ Puyet (2005), สมบูรณ์ 18S rRNAยีนจาก 50 เลือก eukaryotic ชีวิต เพจเลี้ยงลูกด้วยนมนก สัตว์เลื้อยคลาน สัตว์ arthropods มอลลัสกา ต้นไม้ และเชื้อราที่ใช้ในการเลือกภูมิภาคนำไพรเมอร์ที่ออกแบบ และคลิปปากตะเข้สำหรับการวิเคราะห์หาปริมาณของดีเอ็นเอ eukaryotic รวมในตัวอย่างไพรเมอร์ oligonucleotide และคลิปปากตะเข้ถูก synthesised โดย EurofinsMWG Operon (Ebersberg เยอรมนี)2.5 การเลือก PCRPCR amplifications ได้ดำเนินปฏิกิริยารวม μL 25μL 2 ของดีเอ็นเอ (50 – 100 ng) ไดรฟ์ข้อมูลที่แยก 15 มม.ตรี – HCl(pH 8.3), 50 mM KCl, μM 0.5 แต่ละพื้น (LE3 และ LE4) (ตารางที่ 1),0.2 mM ของแต่ละ dNTP (Invitrogen คาร์ลส CA, USA), 1.5 มม. MgCl21 U ® AmpliTaq ทองดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (Biosystems ใช้Branchburg, NJ สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาจะดำเนินใน cycler ร้อนPTC-100 (MJ วิจัย Inc., Watertown, MA, USA) ใช้ต่อไปนี้หลักสูตร: denaturation เริ่มต้นที่ 95 ° C สำหรับ 5 นาที 35 รอบ 30 s ที่95 ° C, 30 s 60 ° C และ 30 s ที่ 72 ° C และส่วนขยายเป็นขั้นสุดท้ายที่ 72 ° C สำหรับ5 นาที ชิ้นส่วนเอาต์ได้ analysed โดย electrophoresis ในการ2.0% agarose เจดำเนินในบัฟเฟอร์เต้ (40 mM ตรี-acetate, 1 mMEDTA) ใน 60 นาทีที่ 120 V สีกับโบรไมด์ ethidium (0.4 μg/mLfor 5 min) and destained in distilled water for 30 min. The agarose gelwas visualised under UV light and a digital image was obtained usinga Kodak Digital Science™ DC120 (Rochester, NY, USA). Each extractwas amplified in duplicate assays.2.6. Real-time PCRThe amplifications by real-time PCRwere carried out in 20 μL total reactionvolume containing 2 μL (50 ng) of DNA extract, 1× iQ™Supermix(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA), 600 nM and 900 nM of eachprimer EUK-F/EUK-R and Lectin-F/Lectin-R, respectively, and 200 nMand 100nM of each probe S5 and Lectin-TMP, respectively for eukaryoticand lectin genes (Table 1). Parallel reactions were prepared for eachtarget sequence. The assays were performed on a fluorimetric thermalcycler iCycler iQ™ Real-time Detection System (Bio-Rad Laboratories,

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างการจัดทำถั่วเหลืองพื้นผิว (46% โปรตีนที่กำหนดโดยวิธี Kjeldahl) ตัวอย่างซื้อในซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นจัดทำขึ้นดังต่อไปนี้คำแนะนำในเชิงพาณิชย์ (ไฮเดรทและไมโครเวฟปรุงสุกรวมความชื้น 78%) และบีบที่จะกำจัดน้ำมากที่สุดเท่าที่เป็นไปได้ ปริมาณโปรตีนสุดท้ายของถั่วเหลืองพื้นผิวชุ่มชื้นกำหนดโดยKjeldahl เป็น 12.5% ​​(w/w). Porkmusclewas ที่ได้มาในตลาดค้าปลีกท้องถิ่นและใช้ในการเตรียมผสมไบนารีอ้างอิงที่มี0.1%, 0.5%, 2.5%, 10.0% และ 50.0% (w / w) ของถั่วเหลืองพื้นผิวชุ่มชื้นในเนื้อหมู (ตรงกับ0.0125% 0.0625% 0.313%, 1.25% และ 6.25% (w / w) ถั่วเหลืองแห้งโปรตีนตามลำดับ) น้ำหนักสุดท้ายของ 100 กรัม บวก (ถั่วเหลือง 100%) และลบ (หมู 100%) ตัวอย่างการควบคุมนอกจากนี้ยังได้จัดทำ ในการตรวจสอบthemethodology, validationmixtures คนตาบอดที่มี 1.0% (2 ผสม), 5.0% และ 25.0% (w / w) ถั่วเหลืองไฮเดรทในเนื้อหมู(ตรงกับ 0.125%, 0.625% และ 3.125% (w / w) ถั่วเหลืองแห้งตามลำดับ) ได้จัดทำในลักษณะเดียวกับที่ผสมอ้างอิง. ไบนารีและสารผสมการตรวจสอบถูก triturated และ homogenised โดยใช้เครื่องปั่นหลังจากที่นอกเหนือจาก 15 มล phosphatebuffered หมันน้ำเกลือ(136 มิลลิโซเดียมคลอไรด์ 1.4 มิลลิ KH2PO4, 8.09 มิลลิNa2HPO4 · 12H2O และ 2.6 มิลลิ KCl ค่า pH 7.2) และเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์. ตัวอย่างของผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์แปรรูปในเชิงพาณิชย์กำลังซื้อในซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นและรวมแฮมเบอร์เกอร์ (n = 14), ลูกชิ้น (n = 4) นักเก็ต (n = 3 ) กระป๋อง (n = 5) และบรรจุขวด (n = 12) แฟรงค์เฟิร์ตไส้กรอกชนิดและไส้กรอกดิบ/ บาร์บีคิว (n = 4) ตัวอย่างทั้งหมดถูกพื้นดิน homogenised และเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการวิเคราะห์. เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนพื้นตัวอย่าง andmixtureswere และhomogenised แยกต่างหากในโรงงานมีด Grindomix GM200 (Retsch, Haan, เยอรมนี) ใช้มีดที่แตกต่างกันและภาชนะบรรจุเครื่องปั่นที่แตกต่างกันได้รับการรักษาก่อนหน้านี้กับการแก้ปัญหา decontaminator ดีเอ็นเอ. 2.2 การสกัดดีเอ็นเอดีเอ็นเอถูกสกัดโดยใช้วิธีการ theWizard มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้byMafra ซิลวา, อิเฟร์ดาซิลวาและ Oliveira (2008b) สกัดได้ดำเนินการในที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละตัวอย่างและ binarymixtures ทั้งหมดรวมถึงการสกัดสารสกัดว่างเปล่าสำหรับการควบคุมของการปนเปื้อนสารเคมีและการสกัดในช่วงขั้นตอน. 2.3 ปริมาณดีเอ็นเอและความบริสุทธิ์ดีเอ็นเอถูกวัดโดย spectrophotometry ใช้ Shimadzu spectrophotometer UV-1800 (Shimadzu คอร์ปอเรชั่นเกียวโตญี่ปุ่น). ความเข้มข้นดีเอ็นเอถูกกำหนดโดยการดูดกลืนรังสียูวีที่ 260 นาโนเมตร(1 หน่วยการดูดกลืนแสงที่สอดคล้องกับ 50 ng / ไมโครลิตรของ dsDNA) . ความบริสุทธิ์ของสารสกัดจากได้รับการประเมินขึ้นอยู่กับอัตราส่วนของการดูดกลืนแสงที่ 260 และ 280 นาโนเมตร. 2.4 ไพรเมอร์ oligonucleotide ไพรเมอร์ที่ใช้ในการ oligonucleotide thiswork เป็น LE3 / LE4 สำหรับคุณภาพการตรวจสอบPCR ของยีนเลคตินถั่วเหลือง (ตารางที่ 1) สำหรับปริมาณเวลาจริงการตรวจ PCR ไพรเมอร์ oligonucleotide และฟิวส์เลคติน-F / เลคติน-R และเลคติน-TMP ถูกนำมาใช้ถั่วเหลืองเลคตินการขยายยีนขณะEUK-F / EUK-R และ S5 ถูกนำมาใช้เพื่อขยายส่วนของนิวเคลียร์ยีน 18S rRNA (ตารางที่ 1) ตามLópez-Andreo, Lugo, Garrido-Pertierra, ฆีและ Puyet (2005) ที่สมบูรณ์แบบ rRNA 18S ยีนจาก 50 เลือกมีชีวิต eukaryotic ผสมผสานเลี้ยงลูกด้วยนมนกสัตว์เลื้อยคลานครึ่งบกครึ่งน้ำรพหอยพืชสีเขียวและเชื้อราเป็นใช้ในการเลือกพื้นที่ที่ป่าสงวนในการออกแบบไพรเมอร์และยานสำรวจหาปริมาณดีเอ็นเอ eukaryotic รวมในตัวอย่างที่. ไพรเมอร์และ oligonucleotide probes ถูกสังเคราะห์โดย Eurofins MWG operon (Ebersberg, เยอรมนี). 2.5 จุดสิ้นสุด PCR เครื่องขยายเสียง PCR ได้ดำเนินการใน 25 ไมโครลิตรปฏิกิริยารวมปริมาณที่มี2 ไมโครลิตรดีเอ็นเอ (50-100 นาโนกรัม) สารสกัดจาก 15 มิลลิ Tris-HCl (pH 8.3) 50 มิลลิ KCl, 0.5 ไมครอนของแต่ละไพรเมอร์ (LE3 และ LE4) (ตารางที่ 1), 0.2 มิลลิของแต่ละ dNTP (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 1.5 มิลลิ MgCl2 และ 1 U ของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ AmpliTaq Gold® (Applied Biosystems, Branchburg, นิวเจอร์ซีย์, สหรัฐอเมริกา) ปฏิกิริยาได้ดำเนินการใน Cycler ความร้อนPTC-100 (MJ Research, Inc. ทาวน์, MA, USA) ใช้ต่อไปนี้โปรแกรม: denaturation เริ่มต้นที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที, 35 รอบของ 30 วินาทีที่95 ° C, 30 s ที่ 60 องศาเซลเซียสและ 30 วินาทีที่ 72 องศาเซลเซียสและนามสกุลสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา5 นาที ชิ้นส่วนที่ขยายมาวิเคราะห์โดย electrophoresis ในagarose 2.0% เจลดำเนินการในบัฟเฟอร์ TAE (40 มิลลิ Tris-acetate 1 มิลลิEDTA) 60 นาทีที่ 120 V, ย้อมด้วยสีโบรไมด์ ethidium (0.4 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรเป็นเวลา5 นาที) และ destained ในน้ำกลั่นเป็นเวลา 30 นาที เจล agarose ได้รับการมองเห็นภายใต้แสงยูวีและภาพดิจิตอลที่ได้รับการใช้วิทยาศาสตร์ดิจิตอลโกดัก™ DC120 (โรเชสเตอร์, นิวยอร์ก, สหรัฐอเมริกา) สารสกัดแต่ละถูกขยายในการตรวจซ้ำ. 2.6 PCR แบบ Real-time เครื่องขยายเสียงโดยเวลาจริง PCRwere ดำเนินการใน 20 ไมโครลิตรปฏิกิริยารวมปริมาณที่มี2 ไมโครลิตร (50 นาโนกรัม) ของสารสกัดดีเอ็นเอ 1 × iQ ™ SUPERMIX (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad ดาว, CA, USA) 600 นาโนเมตร และ 900 นาโนเมตรของแต่ละไพรเมอร์EUK-F / EUK-R และเลคติน-F / เลคติน-R ตามลำดับและ 200 นาโนเมตรและ100nm ของแต่ละสอบสวน S5 และเลคติน-TMP ตามลำดับ eukaryotic ยีนเลคตินและ (ตารางที่ 1) ปฏิกิริยาขนานถูกเตรียมไว้สำหรับแต่ละเป้าหมายลำดับ ตรวจได้ดำเนินการในการระบายความร้อน fluorimetric Cycler iCycler iQ ™เวลาจริงระบบตรวจจับ (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ,

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่างการเตรียม
พื้นผิวถั่วเหลือง ( 46% โปรตีนที่กำหนดโดยวิธีเจลดาห์ล )
ตัวอย่างถูกซื้อในซุปเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นเตรียมต่อไปนี้
คำแนะนำเชิงพาณิชย์ ( hydrated และไมโครเวฟให้สุก ความชื้น
รวม 78 % ) และบีบเพื่อขจัดน้ำมากที่สุด
สุดท้ายโปรตีนของถั่วเหลืองเพิ่มพื้นผิวกำหนดโดยเฉลี่ย 12.5 %
0
( W ⁄ W )porkmusclewas ซื้อในตลาดท้องถิ่น และใช้เตรียมของผสมที่มีสอง
อ้างอิง 0.1 , 0.5 , 2.5 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ และร้อยละ 50.0 %
( w / w ) ของพื้นผิวน้ำถั่วเหลืองในเนื้อหมูที่ตัด (
% ผล % , 0.313 ) 1.25 % และ 25 % ( w / W ) ของโปรตีนถั่วเหลือง
แห้ง ตามลำดับ ) น้ำหนักสุดท้ายของ 100 กรัม บวก ( 100%
ถั่วเหลือง )และลบ ( 100% หมู ) ตัวอย่างควบคุมถูกจัดเตรียมไว้ เพื่อตรวจสอบและ validationmixtures
, ตาบอดที่มี 1.0% ( 2 ) ) ,
5.0 % และ 50 % ( w / w )
( hydrated ถั่วเหลืองในเนื้อหมูที่ 0.125 % , 0.625 ร้อยละ 3.125 % ( w / w ) ของถั่วเหลืองแห้ง
ตามลำดับ ) เตรียมในลักษณะเดียวกันเป็น อ้างอิง
ผสมผสมไบนารีและการตรวจสอบและมี triturated homogenised
ใช้เครื่องปั่นหลังจากเติม 15 ml ของหมัน phosphatebuffered
น้ำเกลือ ( เกลือ , 136 mm 1.4 มิลลิเมตร kh2po4 , 8.09 ม.ม.
na2hpo4 ด้วยและ 12h2o KCl 2.6 มม. pH 7.2 ) และเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −
จนถึงการวิเคราะห์ .
ตัวอย่างพาณิชย์การประมวลผล ผลิตภัณฑ์เนื้อสัตว์ที่ถูกซื้อในซุปเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่นและรวม
แฮมเบอร์เกอร์ ( N = 14 ) , ลูกชิ้น
( n = 4 ) นักเก็ต ( n = 3 ) กระป๋อง ( n = 5 ) และขวด ( n = 12 ) แฟรงค์เฟิร์ต
ประเภทไส้กรอกและวัตถุดิบ / บาร์บีคิวไส้กรอก ( n = 4 ) ตัวอย่าง
พื้น homogenised ที่เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 20 ° C −ไปจนถึงการวิเคราะห์ .
เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนทุกตัวอย่าง andmixtureswere พื้น
homogenised แยกมีดบด grindomix gm200 ( retsch
, แฮน , เยอรมนี ) ใช้มีดแตกต่างกัน และภาชนะเครื่องปั่นแตกต่างกัน
ที่เคยได้รับการรักษาด้วยวิธี decontaminator ดีเอ็นเอ .
2.2 . การสกัดดีเอ็นเอดีเอ็นเอโดยใช้วิธี thewizard

มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อยตามที่อธิบายไว้ bymafra ซิลวา โมไรร่า , แฟร์ไรร่า ดา ซิลวา และ โอลิเวียร่า ,
( 2008b ) ที่สกัดได้ในที่ซ้ำกันสำหรับแต่ละ
ตัวอย่างและ binarymixtures . ทั้งหมดปริมาตรรวม
การสกัดที่ว่างเปล่า