Materials and methodsThe study was

Materials and methods
The study was conducted in the sheep unit of the experimental
farm of the Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, Texcoco,
State of Mexico, complying with the guidelines for ethics and
biosafety of the International Guiding Principles for Biomedical
Research Involving Animals (CIOMS, 1986) and the Mexican norms
(NOM-062-ZOO-1999) for the use of animals in experimentation
(DOF, 2001).
2.1. Animals and treatments
Forty-two Dorset virgin ewes of reproductive age (971.2
months), with an average weight (AW) of 5474.2 kg and a body
condition (BC) of 3 on a 1 to 5 scale (Russel et al., 1969) were used.
Prior to the study, ewes were confirmed as being non-pregnant by
the use of a transvaginal ecograph by ultrasound (SONOVET 600).
The ewes were randomly distributed in two experimental
groups: a control group (CON; n¼21; AW¼5573.1 kg; BC¼3.2)
fed a diet based on corn, sorghum, soy paste and oat hay. The
experimental group was supplemented with fish meal and oil (4.0
and 0.8% of total diet, respectively; Table 1; FMO; n¼21;
AW¼5372.4 kg; BC¼3.4). Both diets were formulated to cover
the crude protein (CP: 14%) and metabolizable energy
(10.8 MJ kg1
) requirements for sheep recommended by the National
Research Council (NRC, 2007).
Ewes were fed the experimental diets for 15 days (d), beginning
four days before inserting sponges for estrus synchronization and
ending the day the vaginal sponges were removed (Fig. 1). Ewes
were housed in individual pens 1.2 2.0 m (2.4 m2
) to facilitate
individual feeding of 0.8 kg d1 feed. After feeding they were released
into shaded corrals (4 m2 ewe 1
) where they had free
access to water.
2.2. Estrus synchronization
Sheep were pre-synchronized with two injections of prostaglandin
F2α (65 mg chloprostenol, Celosils
, Schering-Plough)
eight days apart so that all the ewes would be in the same phase of
the estrous cycle. Six days after the last application, a sponge with
20 mg chronolone (Chronogest™, Intervet) was inserted into the
vagina and left for 11 days. After the sponge was withdrawn, the
ewes received an intramuscular injection of 200 IU of equine
chorionic gonadotropin (eCG, Folligon™, Intervet).
Estrus was detected 24 h after sponge removal by rams fixed
with an apron. After ram introduction, estrus behavior was
Tamonitored every 6 h for 48 h to determine onset before AIL. All
ewes had a 24 h period of fasting before being inseminated with
frozen semen (0.25 mL tubes with 90 106 spermatozoids). AIL
was performed following the method described by Mejía (1997)
and Ramírez et al. (2005).
Pregnancy was diagnosed and confirmed transrectally 30 days
after AIL using a Sonovet 600 ultrasound with a 7.5 MHz linear
transducer (Medison, Inc., Cypress, California, EUA).
2.3. Sampling and laboratory analyses
Blood samples (5 mL) were collected by puncturing the jugular
vein each day at 09:00 h (2 h after feeding) and stored in tubes
until subsequent analysis (13 100 mm, 6 mL, Vacutainers
). All
samples collected were centrifuged at 1500g at 4 °C for 15 min (IEC
Centra 8R, International Equipment Company, EUA). The serum
was separated and stored in polypropylene tubes (5 mL) at –20 °C
until hormone analysis.
To determine the concentration of P4 in serum, samples were
collected two days before inserting the sponges, and afterward,
every 48 h during the synchronized estrous cycle (12 days). Samples
used to determine INS were collected every 48 h for 15 days,
the period corresponding to feeding the experimental diets.
P4 was analyzed by enzyme immunoassay (Immunometrics, UK
Ltd, 280 Muster Road, London SW6 6BQ). Analytical sensitivity
was 0.13 ng mL1 with intra- and inter-assay variation of 9.59 and
13.7%, respectively. INS concentrations were determined by RIA
(multi-species kit, National Institute of Medical Sciences and Nutrition
Salvador Zubirán, México) with a sensitivity of
4.09 ng mL1 and intra- and inter-assay coefficients of variation of
0.25 and 1.44%, respectively.
The concentration of CP of the experimental diets was determined
by the Kjeldahl method (AOAC, 1990). Gross energy was
determined in an adiabatic bomb calorimiter (Oxygen Bomb
Calorimeter, Parr Instruments Co. Illinois, EUA). Calcium was quantified
by atomic absorption spectrophotometry (Spectrophotometer
Varian Spectr AA 10 plus, Varian, Australia) and total phosphorus by
UV ray absorption spectrophotometry (Spectrophotometer Varian
Cary 1E UV–vis, Varian, Australia) following the methods of Fick et al.
(1979).
Total lipid determination of the experimental diets (Table 2)
was done following the 923.07 method by the AOAC (2000). The
identification and quantification of the fatty acids was done
through gas chromatography with Varian 3400 CX equipment
(Varian Inc., Palo Alto, CA, USA) with a 8400 self-sampler and
flame ionization detector. The column used was a DB23
(30 m 0.25 mm d.i., Agilent Technologies, Inc.), using N2 as carrier
gas at a flow rate of 30 mL min1
. The concentration of fatty
acids in the sample was calculated using the area of each peak
with relation to the known standard area.
2.4. Statistical analysis
A completely random design was used; each ewe was an experimental
unit. The percentages of estrus and pregnancy were
analyzed with χ
2 test in PROC FREQ. For estrus onset an analysis of
variance was performed in PROC GLM and means were compared
with the Tukey test. For concentrations of P4 and INS, an analysis of
variance of repeated measurements over time was performed using
the PROC MIXED procedure, where the random effect were ewes
within treatment, which included treatment and day, as fixed effects,
and their interaction. For this procedure, the covariance structure
was modeled using the effect of the ewe within the group and the
first order auto-regressive structure (AR 1) to determine correlation
between sequenced measurements on the same animal. Mean values
were compared by the minimum squared means method (Littell
et al., 1998). All the procedures were conducted with Statistical
Analysis System software (SAS, 2009).
PGF

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการการวิจัยในหน่วยแกะของการทดลองฟาร์มของวิทยาลัยซานฮวนเดอ Postgraduados, Montecillo วิทยาเขต Texcocoรัฐเม็กซิโก ปฏิบัติตามแนวทางคุณธรรม และbiosafety หลักแนวทางสากลสำหรับชีวการแพทย์งานวิจัยเกี่ยวข้องกับสัตว์ (CIOMS, 1986) และบรรทัดฐานเม็กซิโก(นม-062-สวนสัตว์-1999) สำหรับการใช้สัตว์ทดลอง(กรม 2001)2.1. สัตว์และรักษาEwes บริสุทธิ์ดอร์เซ็ทสองวัยเจริญพันธุ์ (971.2เดือน มีน้ำหนักตัวเฉลี่ย (AW) ของ 5474.2 กิโลกรัมและร่างกายเงื่อนไข (BC) 3 ในระดับ 1 ถึง 5 (เพชรเกษม et al., 1969) ได้ใช้ก่อนที่จะศึกษา ewes ได้ยืนยันเป็นไม่ตั้งครรภ์โดยการใช้ ecograph ท้อง ช่องคลอดด้วยเครื่องอัลตราซาวด์ (SONOVET 600)Ewes ถูกสุ่มกระจาย 2 ทดลองกลุ่ม: กลุ่มควบคุม (คอน n¼21 AW¼5573.1 กก. BC¼3.2)เลี้ยงอาหารจากข้าวโพด ข้าวฟ่าง ถั่วเหลืองวางและข้าวโอ๊ตเฮย์ ที่กลุ่มทดลองถูกเสริม ด้วยอาหารปลาและน้ำมัน (4.0และ 0.8% รวม อาหาร ตามลำดับ ตารางที่ 1 FMO n¼21AW¼5372.4 กก. BC¼3.4) ทั้งอาหารมีส่วนครอบคลุมโปรตีนหยาบ (CP: 14%) และพลังงาน metabolizable(Kg1 10.8 MJ) ความต้องการสำหรับแกะแนะนำชาติสภาวิจัย (NRC, 2007)Ewes ได้รับอาหารทดลอง 15 วัน (d), ที่เริ่มต้นสี่วันก่อนใส่ฟองน้ำที่ estrus และสิ้นสุดวันที่มีฟองน้ำช่องคลอดเอาออก (Fig. 1) Ewesมีแห่งละปากกา 1.2 2.0 เมตร (2.4 m2) เพื่ออำนวยความสะดวกอาหารอาหารง 1 0.8 กิโลกรัมละ หลังจากให้อาหาร พวกเขาถูกปล่อยตัวเป็นสีเทา (4 m2 ewe 1 corrals) ที่พวกเขาได้ฟรีการเข้าถึงน้ำ2.2 ซิงโครไนส์ estrusแกะได้ก่อนซิงโครไนส์กับฉีดสองของ prostaglandinF2α (65 มิลลิกรัม chloprostenol, Celosilsเมอร์ค)ออกจากกันเพื่อให้ ewes ทั้งหมดจะอยู่ในระยะเดียวกันของ 8 วันวงจร estrous วันที่หกหลังจากโปรแกรมประยุกต์ล่าสุด ฟองน้ำด้วยchronolone 20 มิลลิกรัม (Chronogest ™ Intervet) ถูกใส่เข้าไปในตัวช่องคลอดและซ้าย 11 วัน หลังจากฟองน้ำได้ถอน การewes ได้รับการฉีดบาดทะยักจาก 200 IU ของเพาะพันธุ์chorionic gonadotropin (eCG, Folligon ™ IntervetEstrus พบ 24 ชมหลังจากเอาฟองน้ำ โดยรามส์ถาวรกับเรือ หลังจากแนะนำ ram, estrusTamonitored h ทุก 6 สำหรับ 48 h กำหนดเริ่มก่อนอุปกรณ์เครื่องลูกข่าย ทั้งหมดewes มีระยะเวลา 24 ชมของการถือศีลอดก่อนที่จะถูก inseminated กับแช่แข็งน้ำเชื้อ (0.25 mL หลอดกับ 90 106 spermatozoids) AILทำตามวิธีที่อธิบายไว้ โดย Mejía (1997)และ Ramírez et al. (2005)ตั้งครรภ์มีการวินิจฉัย และยืนยัน transrectally 30 วันหลังจากอุปกรณ์เครื่องลูกข่ายด้วยซาวด์ Sonovet 600 MHz 7.5 เชิงเส้นพิกัด (Medison, Inc., Cypress แคลิฟอร์เนีย เอื้อ)2.3 การสุ่มตัวอย่าง และการวิเคราะห์ของห้องปฏิบัติการตัวอย่างเลือด (5 มล.) ได้รวบรวม โดย puncturing jugularเส้นเลือดแต่ละวันที่ 09:00 h (h 2 หลังอาหาร) และเก็บไว้ในหลอดจนกระทั่งต่อมาวิเคราะห์ (13 100 มม. 6 mL, Vacutainers). ทั้งหมดตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้ centrifuged ที่ 1500g ที่ 4 ° C สำหรับ 15 นาที (IECเซ็นทรา 8R บริษัทนานาอุปกรณ์ เอื้อ) เซรั่มแยก และจัดเก็บไว้ในหลอด (5 mL) polypropylene ที่ –20 ° Cจนถึงการวิเคราะห์ฮอร์โมนการกำหนดความเข้มข้นของ P4 ในซีรั่ม ตัวอย่างดีสองวันก่อนใส่ฟองน้ำ รวบรวม และหลังจาก นั้นทุก h 48 ในระหว่างการซิงโครไนส์ estrous วงจร (12 วัน) ตัวอย่างใช้เติมได้รวบรวม h 48 ทุก 15 วันรอบระยะเวลาที่สอดคล้องกับการให้อาหารอาหารทดลองP4 ถูกวิเคราะห์ โดยเอนไซม์ immunoassay (Immunometrics, UKจำกัด 280 Muster ถนน ลอนดอน SW6 6BQ) วิเคราะห์ความไวมี 0.13 mL1 ng กับ assay อินทรา และ inter ความผันแปรของ 9.59 และ13.7% ตามลำดับ เติมความเข้มข้นได้ตามเรีย(พันธุ์หลายชุด ชาติสถาบันของวิทยาศาสตร์การแพทย์และโภชนาการZubirán ซัลวาดอร์ México) มีความไวของ4.09 ng mL1 และ assay อินทรา และ inter สัมประสิทธิ์ความผันแปรของ0.25 และ 1.44% ตามลำดับกำหนดความเข้มข้นของ CP อาหารทดลองโดยวิธี Kjeldahl (AOAC, 1990) พลังงานรวมกำหนดใน calorimiter การระเบิดการอะเดียแบติก (ออกซิเจนระเบิดแคลอรีมิเตอร์ พารร์เครื่องบริษัทอิลลินอยส์ เอื้อ) แคลเซียมถูก quantifiedโดยการดูดกลืนโดยอะตอม spectrophotometry (เครื่องทดสอบกรดด่างแล้วแต่กำหนด Spectr AA 10 บวก แล้วแต่กำหนด ออสเตรเลีย) และรวมฟอสฟอรัสด้วยSpectrophotometry ดูดซึมรังสี UV (แล้วแต่กำหนดเครื่องทดสอบกรดด่างแครีแกรนต์ 1E UV – vis แล้วแต่กำหนด ออสเตรเลีย) ตามวิธีของ Fick et al(1979)กำหนดรวมไขมันของอาหารทดลอง (ตารางที่ 2)ทำตามวิธี 923.07 โดย AOAC (2000) ที่ทำรหัสและนับของกรดไขมันผ่าน chromatography ก๊าซพร้อมอุปกรณ์ CX 3400 แล้วแต่กำหนด(แล้วแต่กำหนด Inc. ดัลลัส CA, USA) กับแซมเพลอร์ตนเอง 8400 และเครื่องตรวจจับการ ionization เปลวไฟ คอลัมน์ที่ใช้ได้ DB23(30 m 0.25 มม. d.i., Agilent เทคโนโลยี Inc.), ใช้ N2 เป็นผู้ขนส่งก๊าซที่อัตราการไหลของ min1 30 mL. ความเข้มข้นของไขมันกรดจากตัวอย่างคำนวณโดยใช้พื้นที่ของแต่ละช่วงกรณีตั้งมาตรฐานรู้จัก2.4. สถิติวิเคราะห์ใช้แบบสุ่มอย่างสมบูรณ์ ewe แต่ละมีการทดลองหน่วยการ เปอร์เซ็นต์ของ estrus และตั้งครรภ์ได้วิเคราะห์กับχทดสอบ 2 ในกระบวนการ FREQ. สำหรับ estrus เริ่มที่วิเคราะห์ต่างทำใน PROC GLM และมีการเปรียบเทียบหมายถึงมีการทดสอบ Tukey สำหรับความเข้มข้นของ P4 และ INS การวิเคราะห์ผลต่างของการวัดซ้ำช่วงเวลาที่ดำเนินการโดยใช้ขั้นตอนกระบวนการผสม ที่ผลสุ่มถูก ewesในการรักษา การรักษาและวัน ผลถาวรและการโต้ตอบ สำหรับขั้นตอนนี้ โครงสร้างความแปรปรวนร่วมถูกจำลองโดยใช้ผลของ ewe ภายในกลุ่มและครั้งแรก สั่งโครงสร้างอัตโนมัติลดค่าลงเรื่อย ๆ (AR 1) เพื่อกำหนดความสัมพันธ์ระหว่างเรียงลำดับวัดสัตว์เหมือนกัน ค่าเฉลี่ยมีการเปรียบเทียบ โดยวิธีวิธีกำลังสองต่ำสุด (Littellและ al., 1998) ขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการกับ Statisticalวิเคราะห์ระบบซอฟต์แวร์ (SAS, 2009)PGF

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการศึกษาได้ดำเนินการในหน่วยแกะของการทดลองฟาร์มของจิโอเดอPostgraduados วิทยาเขต Montecillo, Texcoco, รัฐเม็กซิโกสอดคล้องกับแนวทางในการจริยธรรมและความปลอดภัยทางชีวภาพของหลักการระหว่างประเทศเพื่อชีวการแพทย์การวิจัยที่เกี่ยวข้องกับสัตว์(CIOMS 1986) และบรรทัดฐานเม็กซิกัน(NOM-062-สวน-1999) สำหรับการใช้งานของสัตว์ในการทดลอง(อานนท์, 2001). 2.1 สัตว์และการรักษาที่สี่สิบสองแกะบริสุทธิ์ดอร์เซ็วัยเจริญพันธุ์ (971.2 เดือน) มีน้ำหนักเฉลี่ย (AW) ของ 5,474.2 กิโลกรัมและร่างกายสภาพ(BC) 3 ใน 1 ถึง 5 ระดับ (รัสเซล et al., 1969) . ถูกนำมาใช้ก่อนที่จะมีการศึกษาการตกลูกได้รับการยืนยันว่าเป็นที่ไม่ได้ตั้งครรภ์โดย. ใช้ ecograph transvaginal โดยอัลตราซาวนด์ (SONOVET 600) แกะถูกกระจายสุ่มทดลองในสองกลุ่มคือกลุ่มควบคุม (CON; n¼21; AW¼5573 1 กิโลกรัม; BC¼3.2) ที่เลี้ยงด้วยอาหารที่อยู่บนพื้นฐานของข้าวโพดข้าวฟ่างวางถั่วเหลืองและฟางข้าวโอ๊ต กลุ่มทดลองได้รับการเสริมด้วยปลาป่นและน้ำมัน (4.0 และ 0.8% ของอาหารรวมตามลำดับตารางที่ 1; FMO; n¼21; AW¼5372.4กิโลกรัม; BC¼3.4) ทั้งอาหารสูตรเพื่อให้ครอบคลุมโปรตีนดิบ (ซีพี: 14%) และพลังงานที่ (10.8 MJ KG1) ข้อกำหนดสำหรับการแกะแนะนำโดยแห่งชาติ. สภาวิจัย (NRC, 2007) ตกลูกได้รับการเลี้ยงดูอาหารการทดลองเป็นเวลา 15 วัน (ง) เริ่มต้นสี่วันก่อนที่จะใส่ฟองน้ำสำหรับการประสานตกมันและสิ้นสุดวันฟองน้ำช่องคลอดถูกถอดออก(รูปที่ 1). ตกลูกได้ตั้งอยู่ในปากกาของแต่ละบุคคล 1.2 2.0 เมตร (2.4 เมตร 2) เพื่ออำนวยความสะดวกให้อาหารแต่ละ 0.8 กก. อาหาร d1 หลังจากกินอาหารที่พวกเขาได้รับการปล่อยตัวเข้าไปในคอกสีเทา (4 m2 ตัวเมีย 1) ในกรณีที่พวกเขาได้ฟรีเข้าถึงน้ำ. 2.2 ประสานตกมันแกะถูกก่อนตรงกับสองฉีด prostaglandin F2α (65 มก. chloprostenol, Celosils, Schering-Plough) แปดวันออกจากกันเพื่อให้ตกลูกทั้งหมดจะอยู่ในระยะเดียวกันของวงจรการเป็นสัด หกวันหลังจากการประยุกต์ใช้ที่ผ่านมาฟองน้ำกับ20 mg chronolone (Chronogest ™, Intervet) ถูกแทรกเข้าไปในช่องคลอดและที่เหลือ11 วัน หลังจากฟองน้ำถูกถอนการตกลูกได้รับการฉีด 200 IU ของม้า gonadotropin chorionic (ECG, Folligon ™, Intervet). ตกมันพบ 24 ชั่วโมงหลังจากการกำจัดโดยการแกะฟองน้ำคงมีผ้ากันเปื้อน หลังจากการแนะนำแกะพฤติกรรมตกมันถูกTamonitored ทุก 6 ชั่วโมงเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเพื่อตรวจสอบก่อนที่จะเริ่มมีอาการ AIL ทั้งหมดตกลูกมีระยะเวลา 24 ชั่วโมงของการอดอาหารก่อนที่จะถูกผสมเทียมด้วยน้ำเชื้อแช่แข็ง(0.25 มิลลิลิตรหลอด 90 106 spermatozoids) AIL ได้ดำเนินการดังต่อไปนี้วิธีการที่อธิบายโดยMejía (1997) และRamírez et al, (2005). การตั้งครรภ์ได้รับการวินิจฉัยและรับการยืนยัน transrectally 30 วันหลังจากAIL ใช้ Sonovet 600 อัลตราซาวนด์ที่มีเชิงเส้น 7.5 MHz แปลงสัญญาณ (Medison, Inc ไซเปรสแคลิฟอร์เนียเอื้อ). 2.3 การสุ่มตัวอย่างและการตรวจทางห้องปฏิบัติการวิเคราะห์ตัวอย่างเลือด (5 มิลลิลิตร) ที่ถูกเก็บรวบรวมโดยเจาะคอเส้นเลือดในแต่ละวันเวลา09:00 นเอช (2 ชั่วโมงหลังจากที่ให้อาหาร) และเก็บไว้ในหลอดจนวิเคราะห์ที่ตามมา(13 100 มิลลิเมตร, 6 มิลลิลิตร Vacutainers) ทุกตัวอย่างที่เก็บรวบรวมได้รับการหมุนเหวี่ยงที่ 1500g ที่ 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที (IEC Centra 8R นานาชาติอุปกรณ์ บริษัท เอื้อ) ซีรั่มถูกแยกออกและเก็บไว้ในท่อโพรพิลีน (5 มิลลิลิตร) ที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียสจนถึงการวิเคราะห์ฮอร์โมน. เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของ P4 ในซีรั่มตัวอย่างที่เก็บรวบรวมสองวันก่อนที่จะใส่ฟองน้ำและหลังจากนั้นทุก48 ชั่วโมงในระหว่างการทำข้อมูลให้ตรงกัน วงจรการเป็นสัด (12 วัน) ตัวอย่างที่ใช้ในการตรวจสอบการประท้วงที่ถูกเก็บรวบรวมทุก 48 ชั่วโมงเป็นเวลา 15 วันระยะเวลาที่สอดคล้องกับการให้อาหารอาหารทดลอง. the P4 วิเคราะห์ immunoassay เอนไซม์ (Immunometrics สหราชอาณาจักรจำกัด 280 ถนนชุมนุมลอนดอน SW6 6BQ) การวิเคราะห์ความไวเป็น 0.13 นาโนกรัม ML1 กับการเปลี่ยนแปลง intra- และระหว่างการทดสอบของ 9.59 และ 13.7% ตามลำดับ ความเข้มข้น INS ถูกกำหนดโดย RIA (ชุดหลายชนิดสถาบันวิทยาศาสตร์การแพทย์และโภชนาการซัลวาดอZubirán, เม็กซิโก) ที่มีความไวของ 4.09 นาโนกรัม ML1 และค่าสัมประสิทธิ์ intra- และทดสอบระหว่างการเปลี่ยนแปลงของ0.25 และ 1.44% ตามลำดับ. ความเข้มข้นของซีพีของอาหารทดลองถูกกำหนดโดยวิธี Kjeldahl (AOAC, 1990) พลังงานขั้นต้นที่กำหนดใน calorimiter ระเบิดอะเดียแบติก (ออกซิเจนระเบิด Calorimeter พาร์ Instruments Co. อิลลินอยส์เอื้อ) แคลเซียมถูกวัดโดยการดูดซึมอะตอม spectrophotometry (Spectrophotometer Varian Spectr AA 10 บวก Varian, ออสเตรเลีย) และฟอสฟอรัสรวมโดยการดูดซึมเรย์ยูวีspectrophotometry (Spectrophotometer Varian แครี 1E UV-Vis, Varian, ออสเตรเลีย) ตามวิธีการของ Fick et al. (1979 ). ความมุ่งมั่นของไขมันรวมของอาหารทดลอง (ตารางที่ 2) ได้ทำตามวิธี AOAC 923.07 จากนี้ (2000) ประชาชนและปริมาณของกรดไขมันที่ได้กระทำผ่านแก๊ส chromatography กับ Varian 3400 อุปกรณ์ CX (Varian อิงค์พาโลอัลโต, CA, USA) กับ 8400 ตัวอย่างตนเองและการตรวจจับไอออนไนซ์เปลวไฟ คอลัมน์ที่ใช้เป็น DB23 (30 เมตร 0.25 มมดิ, Agilent Technologies, Inc) โดยใช้ N2 เป็นผู้ให้บริการก๊าซที่อัตราการไหล30 มิลลิลิตร min1 ความเข้มข้นของไขมันกรดในตัวอย่างที่คำนวณโดยใช้พื้นที่ของแต่ละจุดสูงสุดที่มีความสัมพันธ์กับพื้นที่มาตรฐานที่รู้จักกัน. 2.4 การวิเคราะห์ทางสถิติการออกแบบแบบสุ่มสมบูรณ์ถูกใช้; ตัวเมียแต่ละทดลองหน่วย เปอร์เซ็นต์ของการเป็นสัดและการตั้งครรภ์ที่ได้รับการวิเคราะห์ด้วยχ 2 การทดสอบใน FREQ PROC สำหรับการเป็นสัดที่เริ่มมีอาการของการวิเคราะห์ความแปรปรวนได้ดำเนินการใน GLM PROC และวิธีการเปรียบเทียบกับการทดสอบTukey สำหรับความเข้มข้นของ P4 และประท้วงการวิเคราะห์ความแปรปรวนของการวัดซ้ำแล้วซ้ำอีกในช่วงเวลาที่ได้รับการดำเนินการโดยใช้PROC ขั้นตอนการผสมที่มีผลการสุ่มเป็นแกะที่อยู่ในการรักษาซึ่งรวมถึงการรักษาและในวันขณะที่ผลกระทบที่ได้รับการแก้ไขและการมีปฏิสัมพันธ์ของพวกเขา สำหรับขั้นตอนนี้โครงสร้างแปรปรวนเป็นรูปแบบการใช้ผลของตัวเมียภายในกลุ่มและลำดับแรกโครงสร้างอัตโนมัติถอยหลัง(AR 1) เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างการวัดติดใจในสัตว์เดียวกัน ค่าเฉลี่ยมาเปรียบเทียบโดยต่ำสุดที่สองหมายถึงวิธีการ (Littell et al., 1998) ขั้นตอนทั้งหมดถูกดำเนินการกับทางสถิติซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ระบบ (SAS 2009). PGF

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
ศึกษาในหน่วยของฟาร์มแกะทดลอง
ของ Col é gio de postgraduados วิทยาเขต Montecillo , เตซโกโก
, รัฐของเม็กซิโก มีความสอดคล้องกับแนวทางจริยธรรมและความปลอดภัยทางชีวภาพของประเทศหลักการ

เพื่อการวิจัยทางการแพทย์ที่เกี่ยวข้องกับสัตว์ ( cioms , 1986 ) และบรรทัดฐาน
เม็กซิกัน( nom-062-zoo-1999 ) สำหรับการใช้สัตว์ในการทดลอง
( กรมประมง , 2544 ) .
2.1 . สัตว์และการรักษา
สี่สิบสอง Dorset บริสุทธิ์แกะวัยเจริญพันธุ์ ( 971.2
เดือน ) โดยมีน้ำหนักเฉลี่ย ( AW ) ของ 5474.2 กิโลกรัมและร่างกาย
เงื่อนไข ( BC ) 3 ใน 5 ระดับ ( Russel et al . , 1969 ) ใช้ .
ก่อนที่จะแกะได้ยืนยันเรียน ไม่ตั้งครรภ์โดย
เป็นใช้ของ ecograph transvaginal โดยอัลตราซาวด์ ( sonovet 600 ) .
แกะสุ่มกระจายในทดลอง 2 กลุ่มกลุ่มควบคุม (
: N ¼ con ; 21 ; อ้าว¼ 5573.1 กิโลกรัม ; พ.ศ. ¼ 3.2 )
เลี้ยงอาหารจากถั่วเหลือง และข้าวโพด ข้าวฟ่าง วางหญ้าโอ๊ต
ทดลองเสริมปลาป่นและน้ำมัน ( 4.0
0.8% ของทั้งหมดและอาหารตามลำดับ ตาราง 1 ; ) ; n ¼ 21 ;
โอ้ว¼ 5372.4 กิโลกรัม ; พ.ศ. ¼ 3.4 )ทั้งสูตรที่ 1 ครอบคลุม
โปรตีน ( CP 14 % ) และ ค่าพลังงานที่ใช้ประโยชน์ได้ (

kg1 10.8 MJ ความต้องการแกะแนะนำโดยสภาวิจัยแห่งชาติ
( NRC , 2007 ) .
แกะได้รับอาหารทดลองเป็นเวลา 15 วัน ( D )
4 วันเริ่มต้นก่อนใส่ฟองน้ำสำหรับ กลไกการประสานและ
สิ้นสุดวันที่ฟองน้ำโยนีออก ( รูปที่ 1 ) แกะ
ถูกขังในตัวปากกา 1.2 2.0 เมตร ( 2.4 m2

) เพื่อความสะดวกในการให้อาหารแต่ละ 0.8 กก. D1 ฟีด หลังจากให้อาหารพวกเขาถูกปล่อยตัว
เป็นสีเทา corrals ( 4 ตรมอุรา 1
) ที่พวกเขาได้เข้าฟรี

2.2 ต่อน้ำ . การชักนำให้เป็นสัด
แกะมี pre ตรงกับสองฉีดพรอสตาแกลนดิน
F2 α ( 65 มิลลิกรัม chloprostenol celosils ,

รักไถ )แปดวันออกจากกันเพื่อให้แกะทั้งหมดจะอยู่ในช่วงเดียวกันของรอบการเป็นสัด
. หกวันหลังจากที่สมัครล่าสุด ฟองน้ำกับ
20 มก. chronolone ( chronogest ™ intervet , ) สอดเข้าไปในช่องคลอดแล้ว
11 วัน หลังจากถูกถอนฟองน้ำ
แกะได้รับการฉีด 200 IU ของม้า
chorionic Gonadotropin ( ECG , folligon ™ intervet
, )กลุ่มตรวจ 24 ชั่วโมง หลังจากเอาฟองน้ำโดยแกะซ่อม
กับผ้ากันเปื้อน หลังรามเบื้องต้น พฤติกรรมถูก
tamonitored เป็นสัดทุก 6 ชั่วโมง เป็นเวลา 48 ชั่วโมง เพื่อตรวจสอบการโจมตีก่อนที่จะป่วย ทั้งหมดมี 24 H
แกะระยะเวลาของการอดอาหารก่อนการผสมเทียมด้วยน้ำเชื้อแช่แข็ง
( 0.25 ml หลอดกับ 90 106 spermatozoids ) เจ็บไข้
แสดงต่อวิธีการที่อธิบายโดย mej มาร์ติน ( 1997 )
รามí rez et al .
( 2005 )การตั้งครรภ์คือการวินิจฉัยและยืนยัน transrectally 30 วัน
หลังจากป่วยใช้ sonovet 600 อัลตร้าซาวด์ 7.5 MHz เชิงเส้น
ทรานสดิวเซอร์ ( เมดิสัน , Inc . , Cypress , California , สหรัฐอเมริกา ) .
2.3 การสุ่มตัวอย่างและการวิเคราะห์ทางห้องปฏิบัติการ
ตัวอย่างเลือด ( 5 มิลลิลิตร ) มีจำนวนเจาะเส้นเลือดดำใหญ่
แต่ละวันที่ 09 : 00 ชั่วโมง ( 2 ชั่วโมงหลังการให้อาหาร ) และเก็บไว้ในหลอด
จนถึงการวิเคราะห์ที่ตามมา ( 13 100 มม. , 6 ml vacutainers
) ทั้งหมดอยู่ที่ 1500g
จำนวนระดับที่ 4 ° C เป็นเวลา 15 นาที ( IEC
Centra 8r , บริษัท , อุปกรณ์ระหว่างประเทศสหรัฐอเมริกา ) เซรั่ม
แยกและเก็บไว้ในท่อโพลิโพรพิลีน ( 5 ml ) – 20 ° C

จนวิเคราะห์ฮอร์โมน เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของ P4 ในเลือดจำนวน
เก็บ 2 วันก่อนใส่ฟองน้ำ และหลังจากนั้น
ทุกชั่วโมง 48 ช่วงตรงกันเป็นสัดรอบ ( 12 วัน ) ตัวอย่างที่ใช้ในการตรวจสอบ ins
เก็บทุก 48 ชั่วโมง ระยะเวลา 15 วัน
สอดคล้องกับการให้อาหารทดลองทุกสูตร
P4 โดยใช้เอนไซม์ Immunoassay ( immunometrics UK
LTD 280 ชุมนุมถนน 6bq ลอนดอน sw6 ) วิเคราะห์ความไว
คือ 0.13 ml1 นาโนกับภายในและระหว่างการทดสอบรูปแบบของ 9.71 และ
13.7 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับINS ความเข้มข้นกำหนดโดย RIA
( หลายชนิดชุด สถาบันแห่งชาติของวิทยาศาสตร์การแพทย์และโภชนาการ
เอลซัลวาดอร์ . kgm zubir N , M é Xico ) กับความไวของ
4.09 และของ ml1 ภายในและระหว่างการทดสอบสัมประสิทธิ์การแปรผันของ
0.25 และ 1.44 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับ
ความเข้มข้นของ CP ของอาหารทดลอง ถูกกำหนดโดยวิธีการ (
0 องศา เซลเซียส , 2533 ) พลังงานทั้งหมดถูก
มุ่งมั่นใน calorimiter ( ออกซิเจนระเบิดสำหรับระเบิด
Calorimeter พาร์เครื่องมือ Co . อิลลินอยส์ สหรัฐอเมริกา ) แคลเซียมเป็นปริมาณ
โดยวิธี Atomic absorption ( Spectrophotometer Varian
spectr AA 10 บวก แวเรียน ออสเตรเลีย ) และฟอสฟอรัสทั้งหมดโดย
วิธีดูดซับรังสี UV ( UV Spectrophotometer Varian
- 1e สำหรับ Vis , ข้อตกลง , ออสเตรเลีย ) ตามวิธีการของฟิก et al .
( 1979 )
หาไขมันรวมของอาหารทดลอง ( ตารางที่ 2 )
ทําตามวิธี 923.07 องศา เซลเซียส ( 2000 )
การจำแนกชนิดและปริมาณของกรดไขมันที่ถูกทำผ่านเครื่องแก๊สโครมาโตกราฟีด้วย

( 3400 CX อุปกรณ์เครื่องอิงค์ , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) ด้วยตนเอง ตัวอย่างเครื่องตรวจจับไอออนไนซ์
8400 และเปลวไฟ คอลัมน์ที่ใช้เป็น db23
( 30 M D.I 0.25 มิลลิเมตรAgilent Technologies , Inc ) ใช้เป็นผู้ให้บริการก๊าซ N2
ในอัตรา 30 มิลลิลิตร min1

ความเข้มข้นของกรดไขมัน
ตัวอย่างที่คำนวณโดยใช้พื้นที่ของแต่ละจุดสูงสุด
กับความสัมพันธ์กับมาตรฐานที่รู้จักพื้นที่
2.4 . การวิเคราะห์ทางสถิติแบบสุ่มอย่างสมบูรณ์
ใช้ แต่ละหน่วยทดลองแกะได้

เปอร์เซ็นต์ของการเป็นสัดและตั้งท้องกับχ
2
วิเคราะห์ทดสอบใน proc freq.สำหรับการโจมตีกลุ่มการวิเคราะห์ความแปรปรวน
ในการปฏิบัติ glm proc และวิธีการเปรียบเทียบ
กับทดสอบทดสอบ สำหรับความเข้มข้นของ P4 และ INS การวิเคราะห์ความแปรปรวนของการวัดซ้ำ

ช่วงเวลาการใช้ทองแดงผสมขั้นตอนที่ผลสุ่มถูกแกะ
ภายในการรักษา ซึ่งรวมถึงการรักษา และ วัน เป็น ถาวรผล ,
และการโต้ตอบของพวกเขา สำหรับขั้นตอนนี้โครงสร้างความแปรปรวนร่วม
ถูกออกแบบโดยใช้ผลของอุราภายในกลุ่มและ
คำสั่งแรกรถยนต์ถอยหลังโครงสร้าง ( AR ( 1 ) เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างยีนในสัตว์
วัดเดียวกัน หมายถึงค่า
เปรียบเทียบโดยวิธีกำลังสองน้อยที่สุด หมายความว่า ( ลิตเติล
et al . , 1998 ) ขั้นตอนทั้งหมดได้ดำเนินการกับระบบซอฟต์แวร์การวิเคราะห์ทางสถิติ ( SAS 2009

ภาพ )