DNA extraction from 1 mL of pure cu

DNA extraction from 1 mL of pure cultures was carried out on
cell pellets harvested by centrifugation (8000  g for 10 min), and
washed in an equal volume of TE buffer (10 mM Tris/HCl, 1 mM
EDTA, pH 8.0). The cell pellets were resuspended in 500 mL TE buffer
containing the lytic enzymes derived from Rhizoctonia solani (1 mg/
mL), lysozyme (10 mg/mL) and lyticase from Arthrobacter luteus
(1 mg/mL) (all enzymes from SigmaeAldrich, Milan, Italy) and
incubated at 37 C for 2 h. After 30 min incubation at 37 C with 50 mg/mL ribonuclease A (SigmaeAldrich) and 5 g/L sodium dodecyl sulphate (SDS), and a second incubation at 55 C for 30 min with 10 mg/mL proteinase K (SigmaeAldrich), the DNAwas purified by chloroform extraction and precipitated with two volumes of ethanol plus 20 mg/mL glycogen (MBI Fermentas, Milan, Italy).After centrifugation (maximum speed for 10 min at 4 C) the DNA
pellet was dried and resuspended in 50 mL Tris/HCl 10 mM, pH 8.0.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

สกัดดีเอ็นเอจาก 1 mL วัฒนธรรมบริสุทธิ์ถูกดำเนินการในเซลล์ขี้เก็บเกี่ยว โดย centrifugation (8000 g สำหรับ 10 นาที), และเครื่องซักผ้าในปริมาณเท่ากับบัฟเฟอร์ TE (10 mM ตรี/HCl, 1 mMEDTA, pH 8.0) ขี้เซลล์ถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ TE 500 mLประกอบด้วยเอนไซม์ lytic มา Rhizoctonia solani (1 มิลลิกรัม /มล.), lysozyme (10 mg/mL) และ lyticase จาก Arthrobacter luteus(1 mg/mL) (ทั้งหมดเอนไซม์จาก SigmaeAldrich มิลาน อิตาลี) และincubated ที่ 37 C สำหรับ 2 h หลังจากฟักตัว 30 นาที C 37 ด้วย 50 mg/mL ribonuclease A (SigmaeAldrich) และซัลเฟต dodecyl โซเดียม 5 g/L (SDS), และฟักตัวที่สองที่ 55 C สำหรับ 30 นาทีกับ 10 mg/mL proteinase K (SigmaeAldrich), DNAwas ที่บริสุทธิ์ โดยแยกคลอโรฟอร์ม และตกตะกอนกับสองปริมาณเอทานอลและไกลโคเจน 20 mg/mL (MBI Fermentas มิลาน อิตาลี) หลังจาก centrifugation (ความเร็วสูงสุดใน 10 นาทีที่ 4 C) ดีเอ็นเอเม็ดแห้ง และ resuspended 50 มล ตรี/HCl 10 มม. pH 8.0

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสกัดดีเอ็นเอจาก 1
มิลลิลิตรของวัฒนธรรมที่บริสุทธิ์ได้รับการดำเนินการเกี่ยวกับเม็ดเซลล์เก็บเกี่ยวโดยการหมุนเหวี่ยง(8000? กรัมเป็นเวลา 10 นาที)
และล้างในปริมาณที่เท่ากันของบัฟเฟอร์TE (10 มิลลิทริส / HCl 1 มิลลิ
EDTA, pH 8.0) เซลล์เม็ดถูก resuspended ใน 500 บัฟเฟอร์มิลลิลิตร TE
มีเอนไซม์ lytic มาจาก Rhizoctonia solani (1 มิลลิกรัม /
มิลลิลิตร), ไลโซไซม์ (10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) และ lyticase จาก Arthrobacter luteus
(1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) (เอนไซม์จาก SigmaeAldrich, มิลาน , อิตาลี)
และบ่มที่อุณหภูมิ37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจาก 30 นาทีบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส 50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ribonuclease A (SigmaeAldrich) และ 5 กรัม / ลิตรโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) และการบ่มที่สองที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาทีกับ 10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรโปร K (SigmaeAldrich ) DNAwas บริสุทธิ์สกัดคลอโรฟอร์มและตกตะกอนที่มีสองเล่มของเอทานอลรวมทั้ง 20 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรไกลโคเจน (MBI Fermentas, มิลาน, อิตาลี) เตรียมตัวชิดหมุนเหวี่ยง (ความเร็วสูงสุดเป็นเวลา 10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส)
ดีเอ็นเอเม็ดแห้งและresuspended ใน 50 มลทริส / HCl 10 มิลลิพีเอช 8.0

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อบริสุทธิ์ 1 มิลลิลิตร ทำการเก็บเกี่ยวโดยปั่นบน
เซลล์เม็ด ( 8000  กรัมต่อ 10 นาที ) , และ
ล้างในขนาดเท่ากัน TE บัฟเฟอร์ ( 10 มม. นอกจากนี้ / HCl 1 mm
EDTA pH 8.0 ) เซลล์ในอัตรา resuspended 500 มิลลิลิตร TE บัฟเฟอร์
ที่มีเอนไซม์ไลติคได้มาจากเชื้อรา ( 1 มิลลิกรัม /
มิลลิลิตร ) , ไลโซไซม์ ( 10 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร ) และ lyticase จากยา luteus
( 1 mg / ml ) ( เอนไซม์จาก sigmaealdrich , มิลาน , อิตาลี ) และ
บ่มที่ 37  C เป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจาก 30 นาทีบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส  50 mg / ml ไรโบนิวคลีเ ( sigmaealdrich ) และ 5 กรัมต่อลิตรโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( SDS ) และบ่มที่ 55 องศาเซลเซียส  วินาที 30 นาทีกับ 10 mg / ml โปร K ( sigmaealdrich )การ dnawas บริสุทธิ์โดยตกตะกอนด้วยการสกัดคลอโรฟอร์มและเอทานอลอีก 2 เล่ม 20 มก. / มล. และไกลโคเจน ( 2 fermentas , มิลาน , อิตาลี ) หลังการปั่นเหวี่ยง ( ความเร็วสูงสุด 10 นาทีที่ 4  C ) เม็ดดีเอ็นเอ
แห้ง resuspended 50 มิลลิลิตร และในบริษัท / HCl 10 มม. , pH 8.0 .