1. Obtain human blood from a health

1. Obtain human blood from a healthy donor. Allow the blood to cool to room temperature (~30 min) before proceeding to the next step.
2. Gently pipette 3 mL of room temperature Polymorph density gradient media into an 8 mL round-bottom polystyrene tube. Gently add 3 mL of
whole blood on top of the Polymorph media. It is important to avoid mixing of the two reagents.
3. Centrifuge the tubes at 500 x g for 45 minutes at room temperature.
4. Following the centrifugation, the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) have now separated from other blood components into the top
cell layer. The PBMC layer appears, from the top down, as the first cloudy band.
5. Carefully remove the clear yellow-colored upper phase of the blood, above the PBMC layer, and then use a P1000 micropipette to transfer
the PBMC layer to a 15 mL or 50 mL conical tube.
6. Wash the PBMC twice with PBS, centrifuging cells at 500 x g for 5 minutes each time. The supernatant will be somewhat cloudy after each
wash

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1. รับเลือดมนุษย์จากผู้บริจาคมีสุขภาพดี ให้เลือดให้เย็นอุณหภูมิห้อง (~ 30 นาที) ก่อนที่จะดำเนินการขั้นต่อไป2. ค่อย ๆ ปิเปตอุณหภูมิห้อง Polymorph สื่อไล่ระดับความหนาแน่น 3 มิลลิลิตรลงในหลอดสไตการรอบล่าง 8 mL ค่อย ๆ เพิ่ม 3 mLเลือดบนสื่อ Polymorph จึงควรหลีกเลี่ยงการผสมของ reagents สอง3. เครื่องหมุนเหวี่ยงหลอดที่ x 500 กรัมสำหรับ 45 นาทีที่อุณหภูมิห้อง4. ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยง เซลล์เลือดโลหิตโมโนนิวเคลียร์ (PBMC) มีตอนนี้แยกออกจากส่วนประกอบของเลือดอื่น ๆ ลงบนเซลล์ชั้นนี้ ชั้น PBMC ปรากฏ จากบนลงล่าง เป็นวงแรกและมีเมฆมากขึ้น5. ระมัดระวังเอาเฟสบนสีเหลืองชัดเจนของเลือด เหนือชั้น PBMC และใช้เป็น P1000 micropipette เพื่อโอนชั้น PBMC จะท่อทรงกรวย 15 mL หรือ 50 มล.6. ล้าง PBMC ด้วย PBS ถ้าเซลล์ที่ 500 กรัม x 5 นาทีแต่ละครั้งสองครั้ง ของ supernatant จะมีเมฆค่อนข้างหลังแต่ละล้าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1. ได้รับเลือดของมนุษย์จากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี อนุญาตให้เลือดให้เย็นที่อุณหภูมิห้อง (~ 30 นาที) ก่อนที่จะดำเนินการในขั้นตอนต่อไป.
2 ค่อยๆเปต 3 มลของสื่อการไล่ระดับอุณหภูมิห้อง Polymorph หนาแน่นเป็นรอบด้านล่างหลอดไตรีน 8 มิลลิลิตร ค่อยๆเพิ่ม 3 มลของ
เลือดทั้งหมดที่ด้านบนของสื่อ Polymorph มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะหลีกเลี่ยงการผสมของทั้งสองน้ำยา.
3 centrifuge หลอดที่ 500 XG เป็นเวลา 45 นาทีที่อุณหภูมิห้อง.
4 ต่อไปนี้การหมุนเหวี่ยง, อุปกรณ์ต่อพ่วงเซลล์ในเลือดโมโนนิวเคลียร์ (PBMC) มีการแยกออกจากกันในขณะนี้จากส่วนประกอบของเลือดอื่น ๆ ลงในด้านบน
ชั้นเซลล์ ชั้น PBMC ปรากฏขึ้นมาจากด้านบนลงมาเป็นวงดนตรีที่มีเมฆมากแรก.
5 อย่างเอาชัดเจนเฟสบนสีเหลืองสีของเลือดเหนือชั้น PBMC และจากนั้นใช้ไมโคร P1000 การถ่ายโอน
ชั้น PBMC จะ 15 หรือ 50 มลหลอดรูปกรวยมล.
6 ล้าง PBMC สองครั้งกับพีบีเอสเซลล์เหวี่ยงที่ 500 XG เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละครั้ง ใสจะค่อนข้างมีเมฆมากหลังจากแต่ละ
ล้าง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ได้รับเลือดมนุษย์จากผู้บริจาคที่มีสุขภาพดี ให้เลือดให้เย็นที่อุณหภูมิห้อง ( ~ 30 นาที ) ก่อนดำเนินการในขั้นตอนต่อไป2 . ค่อยๆเปต 3 มิลลิลิตร อุณหภูมิห้องความหนาแน่นความลาดชันรูปสื่อเป็น 8 ml โฟมรอบก้นหลอด ค่อยๆเพิ่ม 3 มิลลิลิตรเลือดทั้งหมดที่ด้านบนของรูปสื่อ มันเป็นสิ่งสำคัญที่จะหลีกเลี่ยงการผสมของทั้งสอง reagents3 . เครื่องหมุนท่อ 500 x g เป็นเวลา 45 นาที ที่อุณหภูมิห้อง4 . ต่อไปนี้การปั่น , เม็ดเลือดขาวปกติเซลล์ ( 2 ) ตอนนี้ได้แยกออกจากส่วนประกอบของเลือดอื่น ๆลงในด้านบนชั้นเซลล์ มี 2 ชั้น ปรากฏ จากด้านบนลงมาเป็นแถบเมฆก่อน5 . อย่างเอาชัดเจนขั้นตอนด้านบนของเลือดสีเหลือง เหนือ 2 ชั้น และใช้ p1000 ไมโครปิเปตจะโอนมี 2 ชั้น 15 มิลลิลิตร หรือหลอดทรงกรวย 50 ml .6 . ล้าง 2 ครั้งกับพีบีเอส วรรณนาเซลล์ที่ 500 x g เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละครั้ง และน่านจะค่อนข้างขุ่นหลังจากแต่ละล้าง