.2.10. In vitro effect of gallic ac

.
2.10. In vitro effect of gallic acid or ascorbic acid on MMP-2 activity

To examine whether gallic acid directly inhibits MMP-2 activity in vitro, we measured human recombinant MMP-2 activity (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) in the absence or presence of gallic acid using the Gelatinolytic Activity Kit (E12055; Molecular Probes). Briefly, human recombinant MMP-2 (2.5 ng/µL) activity was measured using DQ gelatin (5 µg/mL; Molecular Probes) in Tris–CaCl2 buffer. The activity was evaluated in a microplate spectrofluorimeter (excitation at 495 nm and emission at 515 nm; Gemini EM; Molecular Devices) after 120 min of incubation at 37 °C in the absence or presence of gallic acid or ascorbic acid (0, 0.1, 1.0, 10, 50 and 100 µM), as previously described ( Castro et al., 2009 and Ceron et al., 2010). A standard curve of gelatinolytic activity was prepared as recommended by the manufacturer of the Gelatinolytic Activity Kit (E12055; Molecular Probes). Phenanthroline (0.1 mmol/L) was used as positive control for MMP-2 activity inhibition.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

.2.10. ผลการเพาะเลี้ยงของกรดแอสคอร์บิคหรือกรด gallic MMP-2 กิจกรรมตรวจสอบว่ากรด gallic ยับยั้ง MMP 2 กิจกรรมการเพาะเลี้ยง เราวัดมนุษย์ recombinant MMP 2 กิจกรรม (R & D ระบบ มิ MN สหรัฐอเมริกา) ในการขาดงานหรือสถานะของการใช้ชุดกิจกรรมของ Gelatinolytic (E12055 กรด gallic โดยตรง โมเลกุลคลิปปากตะเข้) สั้น ๆ กิจกรรม (2.5 ng/µL) MMP 2 recombinant มนุษย์ถูกวัดได้โดยใช้ตุ๋น DQ (5 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/mL คลิปปากตะเข้โมเลกุล) ในตรี – CaCl2 บัฟเฟอร์ มีประเมินกิจกรรมใน microplate spectrofluorimeter (ในการกระตุ้นที่ 495 nm และมลพิษที่ 515 nm ราศีเมถุน EM อุปกรณ์โมเลกุล) หลังจาก 120 นาทีของบ่มที่ 37 ° C ในการขาดงานหรือสถานะของกรด gallic หรือกรดแอสคอร์บิค (0, 0.1, 1.0, 10, 50 และ 100 µM), อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Castro et al., 2009 และ Ceron et al., 2010) เส้นโค้งมาตรฐานของกิจกรรม gelatinolytic ได้เตรียมแนะนำ โดยผู้ผลิตชุดกิจกรรมของ Gelatinolytic (E12055 โมเลกุลคลิปปากตะเข้) Phenanthroline (0.1 mmol/L) ใช้เป็นตัวควบคุมค่าบวกในการยับยั้งกิจกรรมของ MMP-2

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

.
2.10 ผลการเพาะเลี้ยงเนื้อเยื่อของฝรั่งเศสกรดหรือวิตามินซีกับกิจกรรม MMP-2 เพื่อตรวจสอบว่ากรดฝรั่งเศสโดยตรงยับยั้งกิจกรรม MMP-2 ในหลอดทดลองเราวัด recombinant มนุษย์กิจกรรม MMP-2 (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA) ในกรณีที่ไม่มีหรือ การปรากฏตัวของกรดฝรั่งเศสโดยใช้กิจกรรม Gelatinolytic Kit (E12055; วัดระดับโมเลกุล) สั้น ๆ , recombinant มนุษย์ MMP-2 (2.5 ng / ไมโครลิตร) กิจกรรมได้รับการวัดโดยใช้เจลาติน DQ (5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร; Probes โมเลกุล) ในบัฟเฟอร์ Tris-CaCl2 กิจกรรมที่ได้รับการประเมินใน spectrofluorimeter microplate (กระตุ้นที่ 495 นาโนเมตรและการปล่อยที่ 515 นาโนเมตร; ราศีเมถุน EM; อุปกรณ์โมเลกุล) หลังจาก 120 นาทีของการบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในกรณีที่ไม่มีหรือการปรากฏตัวของฝรั่งเศสกรดหรือกรดแอสคอบิ (0, 0.1, 1.0, 10, 50 และ 100 ไมครอน) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (คาสโตร et al., 2009 และ Ceron et al., 2010) เส้นโค้งมาตรฐานของกิจกรรม gelatinolytic ถูกจัดทำขึ้นตามคำแนะนำของผู้ผลิตของชุดกิจกรรม Gelatinolytic (E12055; วัดระดับโมเลกุล) Phenanthroline (0.1 มิลลิโมล / ลิตร) ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมในเชิงบวกสำหรับการยับยั้งกิจกรรม MMP-2

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

.
2.10 . ในหลอดทดลองผลของกรดแกลลิค หรือ กรดแอสคอร์บิกการทำงานเอนไซม์กิจกรรม

เพื่อตรวจว่าเพิ่มขึ้นโดยตรง เช่น ยับยั้งกิจกรรมในหลอดทดลอง เราใช้วัดมนุษย์กระตุ้นกิจกรรม ( R & D ระบบ , Minneapolis , MN , USA ) ในการขาดหรือมีกรดแกลลิค โดยใช้ชุดกิจกรรม gelatinolytic ( e12055 ; โมเลกุลโพรบ ) สั้น ๆ , กระตุ้นเซลล์มนุษย์ ( 25 ng / µ L ) กิจกรรมการวัด DQ เจลาติน ( 5 µ g / ml ; โมเลกุลโพรบ ) ในบริษัทผลิตและบัฟเฟอร์ กิจกรรมที่ประเมินในพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย spectrofluorimeter ( ความตื่นเต้นที่ 495 นาโนเมตรและมลพิษที่ 515 nm ; ราศีเมถุนเอ็ม ; อุปกรณ์โมเลกุล ) หลังจาก 120 นาทีบ่มที่ 37 ° C ในการขาดหรือมีเพิ่มขึ้น หรือ กรดแอสคอร์บิค ( 0 , 0.1 , 1 , 10 , 50 และ 100 µ M )ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( Castro et al . , 2009 และซีรอน et al . , 2010 ) เส้นโค้งมาตรฐานของกิจกรรม gelatinolytic เตรียมตามที่แนะนำโดยผู้ผลิตของชุดกิจกรรม gelatinolytic ( e12055 ; โมเลกุลโพรบ ) ฟีแนนโทรลีน ( 0.1 มิลลิโมล / ลิตร ) ใช้เป็นตัวควบคุมบวกเพื่อกระตุ้นกิจกรรมการยับยั้ง