2.5. Folate determinationAfter grow

2.5. Folate determination

After growth in MRS or LAPTg broth, strains were washed 3

times with saline solution (0.85% wt/v NaCl), resuspended in this

solution at the original culture volume, and used to inoculate at 4%

(v/v) folic acid casei medium (FACM, Difco, USA) that were then

incubated without agitation at 30 C for 18 h. After growth, this

washingeresuspension procedure was repeated, and the resulting

LAB suspension was used to inoculate at 2% (v/v) the respective

fresh vitamin-free media. This last step was repeated 7 times with

the cultures showing good growth (observed by increased

turbidity); strains that did not grow in vitamin-free media were not

used in further studies. After the last incubation, 2 samples were

taken to determine the concentration of extracellular and intra-
cellular folates. A sample (500 mL) of LAB-containing vitamin-free

media was taken, and 500 mL of folate protecting buffer (0.1 mol/L

phosphate buffer, pH 6.8, containing 1.5% (w/v) ascorbic acid) to

prevent vitamin oxidation and degradation was added, mixed and

centrifugated for 5 min at 5000 g. The supernatant was collected

(extracellular sample) and the pellet was resuspended in 500 mL of

protecting buffer (intracellular sample). Both samples were then

boiled (100 C) for 5 min, centrifuged for 6 min at 10 000 g, and

stored at 70 C until used for vitamin determinations.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 กำหนดโฟเลตหลังจากเติบโตในซุป MRS หรือ LAPTg สายพันธุ์ถูกซัด 3ครั้ง ด้วยเกลือ (0.85% wt/v NaCl), resuspended ในที่นี้เดิมวัฒนธรรมระดับเสียง และใช้ปลูกฝีที่ 4%(v/v) กรดโฟลิกบ้านขนาดกลาง (FACM, Difco สหรัฐอเมริกา) ที่แล้วได้รับการกกโดยไม่ปั่นป่วนที่ 30 C สำหรับ 18 h หลังจากเติบโต นี้กระบวนการ washingeresuspension ซ้ำครั้ง และการส่งผลห้องปฏิบัติการระงับใช้ฉีดยาป้องกัน 2% (v/v) ที่เกี่ยวข้องสื่อฟรีวิตามินสด ขั้นตอนนี้ซ้ำครั้ง 7 ครั้งด้วยวัฒนธรรมการแสดงการเจริญเติบโตดี (สังเกตโดยเพิ่มความขุ่น); สายพันธุ์ที่ไม่ได้มีการเติบโตในสื่อฟรีวิตามินไม่ได้ใช้ในการศึกษาต่อไป หลังจากบ่มครั้งสุดท้าย ตัวอย่างที่ 2 ถูกดำเนินการตรวจสอบความเข้มข้นของสาร และ intra -folates มือถือ ตัวอย่าง (500 มล.) ของห้องปฏิบัติการที่ประกอบด้วยฟรีวิตามินสื่อถูกถ่าย และ 500 mL ของโฟเลตที่ป้องกันบัฟเฟอร์ (0.1 mol/Lฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 6.8 ประกอบด้วย 1.5% (w/v) กรดแอสคอร์บิค) การป้องกันการเกิดออกซิเดชันของวิตามินและย่อยสลายได้เพิ่ม ผสม และcentrifugated 5 นาทีที่ 5000 g Supernatant รวบรวม(สารตัวอย่าง) และเม็ดถูก resuspended ใน 500 มล.ป้องกันบัฟเฟอร์ (intracellular ตัวอย่าง) ตัวอย่างทั้งสองได้แล้วต้ม (100 C) เหวี่ยงสำหรับที่ 10 000 g, 6 นาที 5 นาที และเก็บไว้ที่ C 70 จนใช้หาวิตามิน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 ความมุ่งมั่นของโฟเลตหลังจากการเจริญเติบโตใน MRS หรือ LAPTg น้ำซุปสายพันธุ์ถูกล้าง 3 ครั้งด้วยน้ำเกลือ (0.85% WT / V NaCl) resuspended ในการแก้ปัญหาในระดับเสียงวัฒนธรรมเดิมและใช้ในการฉีดวัคซีนที่ 4% (v / v) โฟลิค กรด casei (FACM, Difco, สหรัฐอเมริกา) ที่ถูกแล้วบ่มโดยไม่ต้องกวนวันที่ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 18 ชั่วโมง หลังจากที่การเจริญเติบโตนี้ขั้นตอน washingeresuspension ซ้ำและส่งผลให้เกิดการระงับ LAB ถูกใช้ในการฉีดวัคซีนที่ 2% (v / V) ตามลำดับสื่อวิตามินฟรีสด ขั้นตอนสุดท้ายนี้ซ้ำ 7 ครั้งกับวัฒนธรรมแสดงการเจริญเติบโตที่ดี (สังเกตจากที่เพิ่มขึ้นความขุ่น); สายพันธุ์ที่ไม่ได้เติบโตในสื่อวิตามินฟรีไม่ได้ถูกนำมาใช้ในการศึกษาต่อไป หลังจากการบ่มที่ผ่านมา 2 ตัวอย่างที่ถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบความเข้มข้นของสารและการโยกย้ายงานทั้งโฟเลตมือถือ ตัวอย่าง (500 มิลลิลิตร) ของวิตามินฟรีห้องปฏิบัติการที่มีสื่อถูกนำและ 500 มลโฟเลตปกป้องบัฟเฟอร์ (0.1 mol / L ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ค่า pH 6.8 ที่มี 1.5% (w / v) วิตามินซี) เพื่อป้องกันไม่ให้วิตามินออกซิเดชัน และการย่อยสลายเสริมผสมและcentrifugated เป็นเวลา 5 นาทีที่ 5000 กรัม ใสถูกเก็บรวบรวม(ตัวอย่าง extracellular) และเม็ดถูก resuspended ใน 500 มลปกป้องบัฟเฟอร์ (ตัวอย่างเซลล์) กลุ่มตัวอย่างทั้งสองถูกแล้วต้ม (100 C) เป็นเวลา 5 นาที, หมุนเหวี่ยง 6 นาทีที่ 10 000 กรัมและเก็บไว้ที่ 70 องศาเซลเซียสจนใช้สำหรับการหาความวิตามิน