fragment in the both male and femal

fragment in the both male and female birds and a 202-
bp W-specific fragment in the males. The triple-primer
system based on the PSL is as follows:
F: 5′-CCATGGGAAGATCTCCAAAC-3′
R-W: 5′-CTGTCTGATTCCCCCTAATGTAA-3′
R-Z: 5′-AGACAATGCATACAAGGGCTTT-3′
PCR amplification and sequence analysis
Using the triple primers, PCR was employed on the
templates of DNA extracted from sex-known Phasianidae
species. The modified PCR reaction mixture (25 μl)
contained 2.5 μl of 10× PCR buffer (Mg2+
free),
2.0 μlof2.5mMMg2+
,0.6 μlof2.5mMdNTPs,
1.0 μlofF(5 μM/μl), 1.0 μlofR-W(5 μM/μl), 1.0 μlof
R-Z (5 μM/μl), 0.2 μl of Taq enzyme (5 U/μl), 0.5 μlof
template DNA (100 ng/μl), and 16.2 μl of Milli-Q. The
PCR program was as follows: 95°C for 4 min; 35 cycles of
94°C (30 s), 57°C (45 s), and 72°C (30 s); and 72°C for
10 min. A negative control reaction was essential to avoid
misinterpretation due to contamination or other artificial
factors. Control reactions were adopted in the study and
contained all components except for template DNA. The
PCR products were separated by electrophoresis on a
1.5% agarose gel, then stained with ethidium bromide and
a gel imaging system camera used.
Because the amplification product of PSL-W in Tetrao-
phasis szechenyii was larger than in other Phasianidae
birds, the ∼300-bp fragment was then cut and purified from
an agarose gel using the BZNA® D2500-01 gel extraction
kit (OMEGA Inc.). The purified product was ligated into a
pGEM-T vector (Promega, USA) and transformed into
component cells. Sequencing was employed with our
primers on an ABI 3730 DNA analyzer (Applied Bio-
systems, Inc.). The sequence generated from T. szechenyii
was submitted to the GenBank with the following accession
number: JF798508. Analysis of the PSL-W sequence in T.
szechenyii was done by comparison and alignment with G.
gallus.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ส่วนในนกทั้งชายและหญิงและ 202-
bp ส่วน W-เฉพาะในเพศชาย สาม-ไพรเมอร์ระบบบนพื้นฐานของ PSL จะเป็นดังนี้: F: 5'-CCATGGGAAGATCTCCAAAC-3 'RW: 5'-CTGTCTGATTCCCCCTAATGTAA-3' RZ: 5'-AGACAATGCATACAAGGGCTTT-3 'ขยายPCR และการวิเคราะห์ลำดับการใช้ไพรเมอร์สามPCR เป็นลูกจ้างในแม่แบบของดีเอ็นเอที่สกัดจากเพศที่รู้จักกันนกกระทาชนิด แก้ไขผสมปฏิกิริยา PCR (25 ไมโครลิตร) มี 2.5 ไมโครลิตร 10 ×บัฟเฟอร์ PCR (Mg2 + ฟรี) 2.0 μlof2.5mMMg2 + 0.6 μlof2.5mMdNTPs, 1.0 μlofF (5 ไมครอน / ไมโครลิตร) 1.0 μlofR-W (5 ไมครอน / ไมโครลิตร ) 1.0 μlof RZ (5 ไมครอน / ไมโครลิตร) 0.2 ไมโครลิตรของเอนไซม์ Taq (5 U / ไมโครลิตร), 0.5 μlofดีเอ็นเอแม่แบบ(100 ng / ไมโครลิตร) และ 16.2 ไมโครลิตรของ Milli-Q โปรแกรม PCR ได้ดังนี้ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 4 นาที; 35 รอบของ94 ° C (30 s), 57 ° C (45 s), และ 72 ° C (30 วินาที); และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา10 นาที ปฏิกิริยาการควบคุมเชิงลบเป็นสิ่งจำเป็นที่จะหลีกเลี่ยงความเข้าใจผิดเนื่องจากการปนเปื้อนหรือเทียมอื่น ๆ ปัจจัย ปฏิกิริยาการควบคุมที่ถูกนำมาใช้ในการศึกษาและมีส่วนประกอบทั้งหมดยกเว้นดีเอ็นเอแม่แบบ ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกแยกจากกันโดย electrophoresis บน1.5% agarose เจล, สีแล้วด้วย ethidium bromide และกล้องระบบการถ่ายภาพที่ใช้เจล. เพราะผลิตภัณฑ์การขยายของ PSL-W ใน Tetrao- เน้นกระบวนการที่ครบ szechenyii มีขนาดใหญ่กว่าคนอื่น ๆ ในนกกระทานกที่~ ส่วน 300 bp จากนั้นก็ตัดและบริสุทธิ์จากเจลagarose ใช้BZNA® D2500-01 การสกัดเจลชุด(OMEGA อิงค์) ผลิตภัณฑ์ที่บริสุทธิ์ถูก ligated เป็นเวกเตอร์pGEM-T (Promega สหรัฐอเมริกา) และกลายเป็นเซลล์ส่วนประกอบ ลำดับเป็นลูกจ้างของเราด้วยไพรเมอร์ในการวิเคราะห์ดีเอ็นเอ ABI 3730 (ประยุกต์ Bio- ระบบ, Inc) ลำดับที่สร้างขึ้นจากตัน szechenyii ถูกส่งไปยัง GenBank กับคู่สัญญาต่อไปนี้จำนวน: JF798508 การวิเคราะห์ลำดับ PSL-W ใน T. szechenyii ทำโดยการเปรียบเทียบและการจัดตำแหน่งกับจีกางเกง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วนในทั้งชายและหญิงนก เป็น 202 -
BP w-specific จำเพาะในเพศชาย ทริปเปิ้ล รองพื้น
ระบบบนพื้นฐานของ PSL เป็นดังนี้ :
f : 5 ’ - ’ ccatgggaagatctccaaac-3
r-w : 5 ’ - ’ ctgtctgattccccctaatgtaa-3
r-z : 5 ’ - ’ ( agacaatgcatacaagggcttt-3
PCR และลำดับการวิเคราะห์
โดยใช้สามชนิดซึ่งใช้ในแม่แบบของดีเอ็นเอที่สกัดจากเพศ

รู้จักมอซิลลาชนิด การเพิ่มปฏิกิริยาผสม ( 25 μ L )
μที่มีอยู่ 2.5 ลิตร 10 บัฟเฟอร์ ) × ( mg2 ฟรี

) 2.0 μ lof2.5mmmg2

μ lof2.5mmdntps 0.6 , 1.0 μลอฟฟ์ ( 5 μμ M / L ) , 1.0 μ lofr-w ( 5 μ M / μ L ) , 1.0 μลอฟ
r-z ( 5 μ M / μ L ) 0.2 μ L ของเอนไซม์ได้ดี ( 5 U / μ L ) , 0.5 μลอฟ
แม่แบบดีเอ็นเอ ( 100 ng / μ L ) และμ 16.2 ลิตร milli-q.
โปรแกรมเพิ่มดังนี้ 95 องศา C เป็นเวลา 4 นาที 35 รอบ
; 94 ° C ( 30 ) 57 ° C ( 45 ) ,และ 72 ° C ( 30 วินาที ) ; และ 72 ° C
10 นาที ปฏิกิริยาดินเป็นสิ่งจำเป็นเพื่อหลีกเลี่ยงการเข้าใจผิดเนื่องจากมลภาวะหรือปัจจัย

เทียมอื่น ๆ ปฏิกิริยาควบคุมที่ใช้ในการศึกษาประกอบด้วยคอมโพเนนต์ทั้งหมด ยกเว้น
ดีเอ็นเอแม่แบบ ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสบน

เจลโรสเป็น 1.5 เปอร์เซ็นต์ แล้วย้อมด้วยคู่และ
โบรไมด์ระบบกล้องที่ใช้ถ่ายภาพเจล .
เพราะขยายผลิตภัณฑ์ของ psl-w ใน tetrao -
phasis szechenyii มากกว่าคนอื่น Phasianidae
นก ∼ 300 BP ส่วนถูกตัดและบริสุทธิ์จาก
เป็นเจลใช้ bzna ® d2500-01 เจลสกัด
Kit ( Omega Inc . ) และผลิตภัณฑ์ที่ถูกผูกเป็น
pgem-t เวกเตอร์ ( promega , USA ) และกลายเป็น
เซลล์เป็นส่วนประกอบการใช้กับไพรเมอร์ของเรา
เมื่อ ABI 940 ดีเอ็นเอวิเคราะห์ ( ชีวะ -
Systems , Inc . ) ลําดับที่สร้างขึ้นจาก szechenyii
ถูกส่งไปยังขนาดต่อไปนี้ด้วยภาคยานุวัติ
เลขที่ : jf798508 . การวิเคราะห์ลำดับ psl-w ใน T .
szechenyii ทำได้โดยการเปรียบเทียบและสอดคล้องกับ G .
gallus .