often off-target effects, which pos

often off-target effects, which pose a problem to obtaining consistent results [45].

CRISPR/Cas9 technology allows for permanent genetic modification of single or multiple genes simultaneously by transient or stable viral (retrovirus or lentivirus) delivery of the CRISPR/Cas9 components into cells [46–48]. Taking advantage of the indels generated in response to DSB and subsequent NHEJ, sgRNAs can be designed to target Cas9 to bind the initial protein-coding exons of a gene, which can generate LOF frameshift indel mutations upon DSB ( Fig. 1). This approach has been commonly used to generate LOF of genes of interest in the germline, somatically and in cell lines [49]. Recently, the Church group successfully edited 62 copies of the porcine endogenous retrovirus (PERV) in porcine cells, which opens up the road for safer porcine-to-human xenotransplantation by prevent-ing PERV transmission to human cells [50]. Alternatively, to introduce point mutations or complex knock-in alleles using precise genome editing can be achieved by designing sgRNAs against the locus of interest and co-delivering the sgRNAs with a template DNA used for HDR ( Fig. 1).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ผลที่มักจะออกจากเป้าหมาย ซึ่งก่อให้เกิดปัญหาการได้รับผลลัพธ์ที่สอดคล้องกัน [45]เทคโนโลยี CRISPR/Cas9 ช่วยให้ถาวรปรับเปลี่ยนพันธุกรรมของยีนเดียว หรือหลายพร้อม ๆ กัน โดยมั่นคง หรือชั่วไวรัส (retrovirus เข้าหรือ lentivirus) ส่งของคอมโพเนนต์ของ CRISPR/Cas9 ลงในเซลล์ [46 – 48] สามารถออกแบบการใช้ประโยชน์จาก indels ที่สร้างขึ้นในการตอบสนองต่อ NHEJ, sgRNAs และ DSB เป้าหมาย Cas9 การผูกรหัสโปรตีน exons เริ่มต้นของยีน ซึ่งสามารถสร้างพันธุ์ indel frameshift LOF เมื่อ DSB (1 รูป) วิธีการนี้มีการใช้ทั่วไปเพื่อสร้าง LOF ของยีนที่น่าสนใจใน germline, somatically และเซลล์เส้น [49] เมื่อเร็ว ๆ นี้ กลุ่มคริสตจักรสำเร็จแก้ไขสำเนา 62 retrovirus เข้าภายนอกหมู (PERV) ในเซลล์หมู ซึ่งเปิดถนนสำหรับ xenotransplantation มนุษย์หมูปลอดภัย โดยส่ง PERV ing ป้องกันเซลล์มนุษย์ [50] อีกวิธีหนึ่งคือ เพื่อแนะนำพันธุ์จุดหรือซับซ้อนในการเคาะ alleles ใช้แม่นยำกลุ่ม แก้ไขสามารถทำได้โดยการออกแบบ sgRNAs กับทีน่าสนใจ และร่วมการ sgRNAs กับแม่แบบดีเอ็นเอที่ใช้สำหรับ HDR (รูปที่ 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ผลกระทบมักจะออกเป้าหมายซึ่งก่อให้เกิดปัญหาที่จะได้รับผลที่สอดคล้องกัน [45].

CRISPR / เทคโนโลยี Cas9 ช่วยให้การดัดแปลงพันธุกรรมถาวรของยีนเดียวหรือหลายคนพร้อมกันโดยไวรัส (retrovirus หรือ lentivirus) ส่งมอบชั่วคราวหรือมีเสถียรภาพของ CRISPR / ส่วนประกอบ Cas9 เข้าสู่เซลล์ [46-48] การใช้ประโยชน์จาก indels ที่สร้างขึ้นในการตอบสนองต่อ DSB และต่อมา NHEJ, sgRNAs สามารถออกแบบเพื่อกำหนดเป้าหมายในการผูก Cas9 เริ่มต้น exons โปรตีนการเข้ารหัสของยีนซึ่งสามารถสร้าง LOF กลายพันธุ์ frameshift Indel เมื่อ DSB (รูปที่ 1). วิธีการนี้ถูกนำมาใช้กันอย่างแพร่หลายในการสร้าง LOF ของยีนที่น่าสนใจใน germline ที่ somatically และในเซลล์ [49] เมื่อเร็ว ๆ นี้กลุ่มคริสตจักรประสบความสำเร็จในการแก้ไข 62 สำเนาของสุกร retrovirus ภายนอก (perv) ในเซลล์สุกรซึ่งเปิดถนนสำหรับ xenotransplantation หมูสู่คนปลอดภัยมากขึ้นโดยการป้องกันไม่ให้ไอเอ็นจีส่ง perv ไปยังเซลล์ของมนุษย์ [50] อีกทางเลือกหนึ่งที่จะแนะนำการกลายพันธุ์จุดหรือซับซ้อนเคาะในอัลลีลใช้การแก้ไขจีโนมที่แม่นยำสามารถทำได้โดยการออกแบบ sgRNAs กับสถานทีของความสนใจและร่วมส่งมอบ sgRNAs กับดีเอ็นเอแม่แบบที่ใช้สำหรับ HDR (รูป. 1)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

มักจะปิดผลเป้าหมาย ซึ่งก่อให้เกิดปัญหากับการได้รับผลลัพธ์ที่สอดคล้องกัน [ 45 ]crispr / cas9 เทคโนโลยีช่วยให้ปรับปรุงพันธุกรรมถาวรแห่งเดียวหรือหลายตัวพร้อมกันโดยชั่วคราวหรือมีไวรัส ( รีโทรไวรัส หรือ เลนติไวรัส ) ส่งของ crispr / cas9 ส่วนประกอบในเซลล์ [ 46 - 48 ] ประโยชน์ของการสร้างขึ้นในการตอบสนองต่อ indels DSB และต่อมา nhej sgrnas , สามารถออกแบบมาเพื่อเป้าหมาย cas9 ผูกเริ่มต้นการเข้ารหัสที่มีโปรตีนของยีน ซึ่งสามารถสร้างลอฟ 3 INDEL การกลายพันธุ์บน DSB ( รูปที่ 1 ) วิธีการนี้ถูกใช้บ่อยเพื่อสร้างลอฟของยีนที่น่าสนใจในเยอร์มไลน์ somatically และในเซลล์ , เส้น [ 49 ] เมื่อเร็วๆ นี้ กลุ่มโบสถ์เรียบร้อยแล้วแก้ไข 62 ฉบับรีโทรไวรัสในสุกร ( โรคจิต ) จากเซลล์ ซึ่งเปิดขึ้นที่ถนนปลอดภัยจากการ xenotransplantation มนุษย์โดยป้องกันไม่ให้ไอเอ็นจีไปส่งผ่านไปยังเซลล์มนุษย์ [ 50 ] หรือจะแนะนำเรื่องจุดหรือซับซ้อนในการแก้ไขพันธุกรรมอัลลีลเคาะแม่นยำสามารถทำได้โดยการออกแบบ sgrnas กับสถานที่น่าสนใจและร่วมส่ง sgrnas กับแม่แบบดีเอ็นเอใช้ HDR ( รูปที่ 1 )