Incorporation of mutations after th

Incorporation of mutations after the TPCR reactions was analyzed
by DNA sequencing. For DNA cloning, some of the positive
clones were analyzed for the integrity of the DNA sequence of
the protein open reading frame, following colony PCR screening.
Expression vectors pACYCDuet-1 and pET21a were obtained
from Novagen (Madison, WI). Construction of other vectors used
in this study, pET28-TevH and pETMBPH, was described earlier
(Peleg and Unger, 2008; Unger et al., 2010). The IFNa8 gene was
a kind gift from Prof. Gideon Schreiber (Dept. of Biological Chemistry,
Weizmann Institute, Rehovot, Israel) and the TFIIEa gene was
generously donated by Dr. Arnaud Poterszman (IGBMC, Strasbourg,
France). The wild-type Gb1 expression vector (designated pEGB1-
Stop) constructed by addition of a stop codon (TGA) immediately
downstream from the N-terminal His-tag in the expression vector
pETGB1-TevH (Unger et al., 2010), and the CaM gene was cloned
into the pET15b vector (Yosef et al., 2009).
For counting the number of transformants following the various
TPCR reactions, plates were visualized with a Gel Doc 2000 scanner
using Quantity One software (Bio-Rad, Hercules, CA). Colonies
were then counted using Clono-counter software (Niyazi et al.,
2007).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

มีวิเคราะห์ประสานกลายพันธุ์หลังปฏิกิริยา TPCRโดยจัดลำดับดีเอ็นเอ สำหรับ DNA ที่โคลน บางในแง่บวกโคลนได้วิเคราะห์ความสมบูรณ์ของลำดับดีเอ็นเอของโปรตีนเปิดอ่านเฟรม วิธีตรวจ PCR อาณานิคมเวกเตอร์นิพจน์ pACYCDuet-1 และ pET21a ได้รับจาก Novagen (เมดิสัน WI) สร้างเวกเตอร์อื่น ๆ ใช้ในการนี้ศึกษา pET28-TevH และ pETMBPH มีอธิบายไว้ก่อนหน้านี้(Peleg และ Unger, 2008 Unger et al., 2010) มียีน IFNa8ของขวัญประเภทจากศาสตราจารย์กิ Schreiber (แผนกของชีวภาพเคมีWeizmann สถาบัน Rehovot อิสราเอล) และยีน TFIIEaรับบริจาค โดยดร. Arnaud Poterszman (IGBMC สตราสบูร์กฝรั่งเศส) เวกเตอร์นิพจน์ชนิดป่า Gb1 (กำหนด pEGB1-หยุด) สร้าง โดยเพิ่มรหัสพันธุกรรมหยุด (TGA) ทันทีปลายน้ำจากเทอร์มินัล N พระแท็กในเวกเตอร์นิพจน์pETGB1-TevH (Unger et al., 2010), และยีนแคมถูกโคลนเป็นเวกเตอร์ pET15b (โยเซฟอัก et al., 2009)สำหรับการตรวจนับจำนวนของ transformants ตามต่าง ๆTPCR ปฏิกิริยา แผ่นมี visualized กับสแกนเนอร์ 2000 เจอกใช้ซอฟต์แวร์ปริมาณหนึ่ง (Bio Rad เฮอร์คิวลิส แคลิฟอร์เนีย) อาณานิคมแล้วนับได้โดยใช้ซอฟต์แวร์ Clono เคาน์เตอร์ (Niyazi et al.,2007)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การรวมตัวกันของการกลายพันธุ์หลังจากปฏิกิริยา TPCR ได้รับการวิเคราะห์
โดยลำดับดีเอ็นเอ สำหรับการโคลนดีเอ็นเอบางส่วนของเชิงบวก
โคลนมาวิเคราะห์ความสมบูรณ์ของลำดับดีเอ็นเอของ
โปรตีนกรอบการอ่านเปิดต่อไปนี้อาณานิคม PCR การตรวจคัดกรอง
การแสดงออกเวกเตอร์ pACYCDuet-1 และ pET21a ที่ได้รับ
จาก Novagen (Madison, WI) การก่อสร้างของเวกเตอร์อื่น ๆ ที่ใช้
ในการศึกษาครั้งนี้ pET28-TevH และ pETMBPH ถูกอธิบายไว้ก่อนหน้า
(Peleg และอังเกอร์ 2008; อังเกอร์และคณะ, 2010.) ยีน IFNa8 เป็น
ของขวัญชนิดจากศาสตราจารย์กิดเดียนไก (ภาควิชาชีววิทยาเคมี
Weizmann สถาบัน Rehovot, อิสราเอล) และยีน TFIIEa ได้รับ
บริจาคไม่เห็นแก่ตัวโดยดร. นาด Poterszman (IGBMC, Strasbourg,
ฝรั่งเศส) ป่าประเภทเวกเตอร์แสดงออก gB1 (กำหนด pEGB1-
หยุด) สร้างขึ้นโดยการเพิ่มขึ้นของหยุด codon (TGA) ทันที
ล่องจาก N-ขั้วของเขาแท็กเวกเตอร์ในการแสดงออก
pETGB1-TevH (อังเกอร์ et al., 2010) และ ยีนลูกเบี้ยวเป็นโคลน
เป็นเวกเตอร์ pET15b (โยเซฟ et al., 2009)
สำหรับการนับจำนวนของ transformants ต่อไปต่างๆ
ปฏิกิริยา TPCR, จานได้รับการมองเห็นด้วยเจล Doc 2000 สแกนเนอร์
โดยใช้ซอฟแวร์จำนวนหนึ่ง (ไบโอราดดาว CA) อาณานิคม
นับจากนั้นใช้ซอฟต์แวร์ Clono เคาน์เตอร์ (Niyazi et al.,
2007)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การรวมตัวกันของกลุ่มหลัง tpcr ปฏิกิริยาวิเคราะห์
โดยการจัดลำดับดีเอ็นเอ สำหรับการโคลนดีเอ็นเอบางส่วนของโคลนบวก
วิเคราะห์ความสมบูรณ์ของดีเอ็นเอลำดับ
โปรตีนเปิดอ่านกรอบตามอาณานิคมตรวจคัดกรอง และการแสดงออกของเวกเตอร์ pacycduet-1

pet21a ได้รับจาก novagen ( Madison , WI ) การก่อสร้างเวกเตอร์อื่น ๆที่ใช้
ในการศึกษานี้และ pet28 tevh petmbph ได้อธิบายไปก่อนหน้านี้
( เปเลกกล่าว , 2008 ; อังเกอร์ et al . , 2010 ) การ ifna8 ยีน
ของขวัญชนิดจากศ. กิเดียนชไรเบอร์ ( ภาควิชาชีววิทยาเคมี
เวสเทิร์น , สถาบัน , ฮ่องกง , อิสราเอล ) และ tfiiea ยีน
เพื่อการกุศล โดย ดร. อาร์โนด์ poterszman ( igbmc Strasbourg , ฝรั่งเศส ,
) gb1 การแสดงออกของเวกเตอร์ ( เขต pegb1 -
หยุด ) ที่สร้างขึ้นโดยการเพิ่มของรหัสหยุด ( TGA ) ทันที
ตามน้ำจากกรดอะมิโนในการแสดงออกของเวกเตอร์แท็กของเขา
petgb1 tevh ( อังเกอร์ et al . , 2010 ) และ แคมของโคลน
ใน pet15b เวกเตอร์ ( โยเซฟ et al . , 2009 ) .
สำหรับการนับจำนวนของ transformants ดังต่อไปนี้ ปฏิกิริยา tpcr ต่างๆ
, จานเป็นปรากฏการณ์ที่มีเจลหมอ 2000 สแกนเนอร์
ปริมาณการใช้ซอฟต์แวร์ ( ไบโอ ราด , Hercules , CA ) อาณานิคม
แล้วนับโดยใช้ซอฟต์แวร์นับ clono ( niyazi et al . ,
2007 )