Method1. Fill in recording sheets t

Method

1. Fill in recording sheets to record how samples will be dispensed into microwell plates.

2. Calculate the number of plates required and number each plate.

3. Dispense 25 µL of PBS into each well of the plates.

4. Shake each serum sample and dispense 25 µL into the first well and the last (control) well of a row of a microwell plate.

5. Use a multichannel pipette to make two-fold serial dilutions along the row until the second last well from the end. The last well is the serum control. Do not dilute this well. See Appendix 4 for instructions on carrying out two-fold serial dilutions.

6. Add 25 µL of the 4HA dilution of antigen to each well excluding the control wells in the last column. See Section 10 for preparation of 4HA units of antigen

7. Gently tap the sides of the microwell plates to mix the reagents. Cover plates with a lid. Allow to stand for 30 minutes at room temperature.

8. Add 25 µL of 1 percent washed red blood cells to each well including the control wells in the last column.

9. Gently tap the sides of the microwell plates to mix the reagents. Cover the plates with a lid. Allow to stand at room temperature for 45 minutes.

10. Read the settling patterns for each serum sample. Read the control serum well first then read the patterns in the other wells.

11. Record the pattern observed in each well on a microwell plate recording sheet. Determine the endpoint. This is the point where there is complete inhibition of haemagglutination.

12. Record the antibody level for each serum sample. This is expressed as a log base 2. For convenience, the titre is often recorded as just the log index. For example a titre of 26 would be recorded as 6.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการ1. กรอกข้อมูลในบันทึกแผ่นบันทึกว่าจะคำตัวอย่างลงในแผ่น microwell2. คำนวณจำนวนแผ่นที่ต้องการ และหมายเลขแต่ละจาน3. ป้ายสินค้า 25 µL ของ PBS ในแต่ละดีแผ่น4. เขย่าแต่ละตัวอย่างซีรั่ม และจำหน่าย 25 µL ในบ่อแรกและสุดท้าย (ตัวควบคุม) ของแถวของแผ่น microwell ดี5. ใช้เปตต์รับทำพับ 2 dilutions ประจำบริเวณแถวจนสุดท้ายสองดีจากจุดสิ้นสุด สุดท้ายคือ ควบคุมเซรั่มดี Dilute นี้ดี ดูภาคผนวก 4 คำแนะนำดำเนินการพับ 2 dilutions ประจำ6. เพิ่ม 25 µL ของเจือจาง 4HA ตรวจหาของแต่ละบ่อยกเว้นบ่อควบคุมในคอลัมน์สุดท้าย ดู 10 ส่วนการเตรียมการของหน่วย 4HA ตรวจหา7. ค่อย ๆ เคาะด้านข้างของแผ่น microwell ผสม reagents ครอบแผ่นพร้อมมีฝาปิด อนุญาตให้ยืน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง8. เพิ่ม µL 25 เปอร์เซ็นต์ 1 ล้างเม็ดเลือดแดงที่ไปบ่อแต่ละบ่อควบคุมรวมทั้งในคอลัมน์สุดท้าย9. ค่อย ๆ เคาะด้านข้างของแผ่น microwell ผสม reagents ครอบแผ่นพร้อมมีฝาปิด อนุญาตให้ยืนสำหรับ 45 นาทีที่อุณหภูมิห้อง10. อ่านรูปแบบ settling สำหรับแต่ละตัวอย่างซีรั่ม อ่านเซรั่มควบคุมดีก่อนอ่านแล้วลวดลายในบ่ออื่น ๆ11. บันทึกแบบสังเกตในแต่ละบ่อบนจาน microwell บันทึกแผ่น กำหนดปลายทาง นี่คือจุดมีการยับยั้ง haemagglutination สมบูรณ์12. บันทึกระดับแอนติบอดีในซีรั่มอย่างละ นี้จะแสดงเป็นล็อกฐาน 2 มักจะบันทึก titre ที่สะดวก เป็นเพียงดัชนีล็อก เช่น titre จาก 26 จะถูกบันทึกเป็น 6

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีที่1 กรอกข้อมูลลงในแผ่นบันทึกเพื่อบันทึกว่ากลุ่มตัวอย่างจะได้รับการจ่ายเป็นแผ่น microwell. 2 คำนวณจำนวนของแผ่นเปลือกโลกที่จำเป็นและแต่ละหมายเลขแผ่น. 3 จ่าย 25 ไมโครลิตรของพีบีเอสเป็นอย่างดีของแผ่นแต่ละ. 4 เขย่าแต่ละตัวอย่างซีรั่มและจ่าย 25 ไมโครลิตรเป็นอย่างดีครั้งแรกและครั้งสุดท้าย (ควบคุม) ดีของแถวของแผ่น microwell. 5 ใช้ปิเปตหลายช่องเพื่อให้เจือจางอนุกรมสองเท่าพร้อมแถวจนวินาทีสุดท้ายอย่างดีจากปลาย ดีสุดท้ายคือซีรั่มควบคุม อย่าเจือจางนี้ดี ดูภาคผนวก 4 สำหรับคำแนะนำในการดำเนินการสองเท่าเจือจางอนุกรม. 6 เพิ่ม 25 ไมโครลิตรของ 4HA ลดสัดส่วนของแอนติเจนแต่ละดีไม่รวมการควบคุมหลุมในคอลัมน์สุดท้าย ดูมาตรา 10 ในการจัดทำ 4HA หน่วยของแอนติเจน7 ค่อยๆแตะที่ด้านข้างของแผ่น microwell การผสมสารเคมี แผ่นปกที่มีฝาปิด อนุญาตให้มีการยืนเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง. 8 เพิ่ม 25 ไมโครลิตรร้อยละ 1 ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงในแต่ละดีรวมทั้งการควบคุมหลุมในคอลัมน์สุดท้าย. 9 ค่อยๆแตะที่ด้านข้างของแผ่น microwell การผสมสารเคมี ฝาครอบจานที่มีฝาปิด อนุญาตให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที. 10 อ่านรูปแบบปักหลักสำหรับแต่ละตัวอย่างซีรั่ม อ่านซีรั่มควบคุมที่ดีครั้งแรกแล้วอ่านรูปแบบในบ่ออื่น ๆ . 11 บันทึกรูปแบบการตั้งข้อสังเกตในแต่ละดีบนแผ่น microwell แผ่นบันทึก ตรวจสอบปลายทาง ตรงนี้คือจุดที่มีการยับยั้งที่สมบูรณ์ของ haemagglutination. 12 บันทึกระดับแอนติบอดีสำหรับแต่ละตัวอย่างซีรั่ม นี้จะแสดงเป็นฐานเข้าสู่ระบบ 2. เพื่อความสะดวก titre จะถูกบันทึกไว้มักจะเป็นเพียงดัชนีล็อก ตัวอย่างเช่น titre ที่ 26 จะได้รับการบันทึกเป็น 6

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธี

1 กรอกข้อมูลลงในแผ่นบันทึกเพื่อบันทึกว่าตัวอย่างจะถูกจ่ายเข้าไปใน microwell จาน

2 คำนวณจำนวนแผ่นที่ต้องการและจำนวนแต่ละจาน

3 จ่าย 25 µ L ของ PBS ในแต่ละดีของจาน

4 . สั่นแต่ละตัวอย่างซีรั่มและจ่าย 25 µผมเป็นแรกและสุดท้าย ( ควบคุม ) ของแถวของ microwell จาน

5ใช้ปิเปตแบบหลายช่อง เพื่อให้ตรวจสอบซีเรียลเจือจางไปตามแถว จนวินาทีสุดท้ายจากปลาย สุดท้ายก็ คือ การควบคุมระดับ ไม่เจือด้วย ดูภาคผนวก 4 สําหรับคําแนะนําในการปฏิบัติด้านซีเรียลเจือจาง

6 เพิ่ม 25 µ L ของ 4ha เจือจางของแอนติเจนกันยกเว้นบ่อควบคุมในคอลัมน์สุดท้ายดูมาตรา 10 เพื่อเตรียม 4ha หน่วยแอนติเจน

7 ค่อยๆแตะด้านข้างของ microwell จานผสม reagents ครอบจานกับฝา อนุญาตให้ยืนเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง

8 เพิ่ม 25 µ L 1 เปอร์เซ็นต์ล้างสีแดงเลือดเซลล์กันรวมทั้งควบคุมเวลล์ ในคอลัมน์สุดท้าย

9 ค่อยๆแตะด้านข้างของ microwell จานผสม reagentsครอบจานกับฝา ปล่อยให้ยืนที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 45 นาที

10 อ่านเรื่องรูปแบบสำหรับแต่ละระดับตัวอย่าง อ่าน เซรั่มควบคุมดีก่อน อ่านแล้ว รูปแบบในบ่ออื่น ๆ .

11 บันทึกแบบสังเกตในแต่ละดีใน microwell แผ่นบันทึกแผ่น ตรวจสอบข้อมูล . นี้เป็นจุดที่มีการสมบูรณ์ของ haemagglutination .

12 . บันทึกระดับแอนติบอดีในซีรั่มตัวอย่าง นี้จะแสดงเป็นฐานล็อก 2 เพื่อความสะดวกใน titre มักจะบันทึกเป็นเพียงบันทึกดัชนี ตัวอย่างเช่น titre 26 จะถูกบันทึกเป็น 6