AbstractAim of the studyThe study a

Abstract
Aim of the study

The study aimed at evaluating the hypolipidemic effects of Purified Salvia miltiorrhiza extract (PSME) and investigating the potential molecular mechanisms by which PSME modulated lipid profiles in hyperlipidemic rats.

Materials and methods

Sprague–Dawley male rats on a high-fat/high-cholesterol diet were treated orally with PSME, GW3965 (a selective liver X receptor agonist) or vehicle alone. Gene expression analysis and transactivation assays were used to clarify the molecular mechanisms of action of PSME.

Results

The concentrations of plasma total cholesterol, low-density lipoprotein cholesterol (LDL-cholesterol) and triglycerides in rats treated with PSME at 150 mg kg day−1 were significantly decreased (P < 0.01), accompanied with significantly decreased concentrations of liver total cholesterol and triglycerides (P < 0.01). In both drug-treated rats, the concentration of high-density lipoprotein cholesterol (HDL-cholesterol) was significantly elevated (P < 0.01). Intriguingly, short heterodimer partner (SHP) mRNA level was significantly higher in PSME-treated rats (P < 0.01), accompanied with the significantly decreased mRNA level of sterol regulatory element binding protein 1c (SREBP1c) (P < 0.01), which contributed to the decreases of liver and plasma triglycerides through a farnesoid X receptor-SHP-SREBP1c pathway. ATP-binding Cassette Transporter B11 (ABCB11) and murine Mdr2 P-glycoprotein (also known as ABCB4) were significantly induced by PSME, which were responsible for biliary cholesterol solubility by proper biliary secretion of bile salts and phospholipids. The transactivation assays were used to identify PSME as a farnesoid X receptor/liver X receptor α coagonist.

Conclusion

These results indicated that PSME as a farnesoid X receptor/liver X receptor α coagonist largely improved the lipid profiles in the hyperlipidemic rats.

Keywords
Liver X receptor α; Farnesoid X receptor; Purified Salvia miltiorrhiza extract (PSME); Hypolipidemic
1. Introduction
Metabolic syndrome had become a global epidemic and the prevalence of metabolic syndrome has been increasing rapidly in the past decades in most western countries (Ford et al., 2002). Complications of metabolic syndrome are defined as a cluster of three of five criteria: insulin resistance and glucose intolerance, abdominal obesity, hypertension, low high-density lipoprotein cholesterol (HDL-cholesterol) and hypertriglyceridemia. The modulation of orphan nuclear receptors and their target genes provides potential therapeutic strategies for the management of metabolic syndrome. Priority has been given to the mechanisms of action of the farnesoid X receptor, liver X receptors α and peroxisome proliferator-activated receptors α, which serve as sensors that regulate the homeostasis of metabolism of glucose, cholesterol and bile acids (Lu et al., 2001; Repa and Mangelsdorf, 2002; Raalte et al., 2004; Claudel et al., 2005).

However, the role of liver X receptor α as therapeutic target has been hampered by the fact that liver X receptor α activation caused the increase of fatty acid synthesis and accumulation of triglycerides in the liver (Repa et al., 2000 and Schultz et al., 2000). Farnesoid X receptor is a promising therapeutic target for treating or preventing cholesterol gallstone disease through farnesoid X receptor-dependent increases in biliary bile salt and phospholipid concentrations (Moschetta et al., 2004). Intriguingly, increasing farnesoid X receptor activity had the potential to attenuate hypertriglyceridemia in the previous study (Watanabe et al., 2004), in which coadministration of cholic acid could attenuate liver X receptor agonist (T0901317)-induced lipogenesis in C57BL/6J mice. In addition, coadministration of mice with the liver X receptor α agonist T0901317 and the peroxisome proliferator-activated receptors α agonists fenofibrate or WY14643 successfully attenuated the elevation of circulating triglycerides induced by liver X receptor α activation (Beyer et al., 2004). In our previous studies, n-butanol extract of Panax notoginseng (Burk.) F.H. Chen root was identified as a coagonist of farnesoid X receptor and liver X receptor α and was shown to improve lipid profiles in hyperlipidemic rats ( Ji and Gong, 2007). The demonstration from the previous studies had positive implications that simultaneous modulation of these nuclear receptors would produce unexpected effects for the treatment of the complications of metabolic syndrome. Therefore, therapeutic agents that have the potential to modulate these nuclear receptors are urgently needed. More importance has been attached to bioactive compounds from traditional Chinese medicine in recent years.

Salvia miltiorrhiza (SM; family: Labiatae) is a well-known traditional Chinese herb for the treatment of many diseases, especially ischemic cardiovascular diseases ( Ji et al., 2003, Ji et al., 2004 and Zhu et al., 2004). Clinical trials have also indicated that SM is an effective medicine for angina pectoris, myocardial infarction and stroke ( Ji et al., 2003, Ji et al., 2004 and Zhu et al., 2004). 20 major ingredients in SM have been identified ( Ji et al., 2000). Purified Salvia miltiorrhiza extract (PSME) is an extract consisting of 4 active water-soluble compounds from the 20 major ingredients. PSME had demonstrated its effectiveness on prevention of ischemic heart disease ( Sun et al., 2005 and Chang et al., 2006).

In our studies, the hypolipidemic effects of PSME were evaluated in hyperlipidemic rats and the potential molecular mechanisms by which PSME modulated lipid profiles were investigated by gene expression analysis and transactivation assays.

2. Materials and methods
2.1. Materials

PSME was provided with Shanghai Material Medica Bioengineering Institute. It is a water soluble extract from salvia miltiorrhiza which contains four Chinese medicinal bioactive ingredients with other lipophilic ingredients ( Sun et al., 2005). These four bioactive ingredients are Danshensu, Rosmarinic acid, and Salvianolic acid A and B as reported previously ( Sun et al., 2005). Chemical structures of these four compounds are shown in Fig. 1.

The structures of four ingredients purified from Salvia miltiorrhiza. (1) ...
Fig. 1.
The structures of four ingredients purified from Salvia miltiorrhiza. (1) Danshensu, (2) Rosmarinic acid, (3) Salvianolic acid B, and (4) Salvianolic acid A.
Figure options
GW3965 [3-(3-(2-chloro-3-trifluoromethylbenzyl-2,2-diphenylethylamino)proproxy)phenylacetic acid] (Collins et al., 2002) was prepared following standard chemical syntheses from the published literature.

For in vivo experiments, PSME and GW3965 were suspended in 1% carboxymethylcellulose (Sigma, St. Louis, USA) aqueous solution, and a uniform suspension was obtained by ultrasonication. For in vitro experiments, PSME and GW3965 were dissolved in dimethylsulfoxide (DMSO).

2.2. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis

An Agilent 1100 HPLC system (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) comprised a quaternary solvent delivery system, an on-line degasser, an auto-sampler, a column temperature controller and DAD detector coupled with an analytical workstation. The column configuration was an Agilent Zorbax Extend C18 reserved phase column (5 μm, 250 mm × 4.6 mm) coupled with an Agilent Zorbax Extend C18 guard column (5 μm, 10 mm × 4.6 mm). The sample injection volume was 10 μl. Detection wavelength was set at 288 nm, the flow rate was 1.0 ml min−1 and the column temperature was maintained at 20 °C. The mobile phase was gradient elution which was mixed with solvent A (0.026% aqueous phosphoric acid, v/v) and B (acetonitrile). The gradient program was as follows: initial 0–20 min, linear change from A–B (98:2, v/v) to A–B (77:23, v/v); next 20–35 min, linear change to A–B (71.5:28.5, v/v). Danshensu was purchased from the National Institute for Control of Biological and Pharmaceutical Products (China). Rosmarinic acid, salvianolic acid B and salvianolic acid A were provided by Shanghai Material Medica Bioengineering Institute. These sample standards and PSME were dissolved in methanol and all solutions were filtered through Millex 0.2 μm nylon membrane syringe filters (Millipore Co., Bedford, MA) before use.

2.3. Animals

Sixty Sprague–Dawley male rats (280 ± 20 g) were purchased from Shanghai experimental animal center, China. The rats had free access to a pelleted open-formula nonpurified diet (Purina Lab Chow No. 5001) and were housed in an environmentally controlled room at 22–25 °C, relative humidity at (60 ± 10) % and with a 12-h light cycle (08:00–20:00 h). Diets and tap water were provided ad libitum. Blood was always drawn after an overnight fast and thus, animals were prebled and grouped so that the average lipid levels of each group were similar. After 1-week acclimation, these rats were devided into two groups: ten rats (NC: normal diet controls) had free access to a normal diet, and fifty rats were fed with a high-fat/high-cholesterol diet (a normal diet supplemented with 1% cholesterol, 0.5% choline bitartrate and 5% olive oil). This dietary regimen was adopted throughout the experiment. The experiment was approved by the local animal ethics committee and performed based on international accepted guidelines for care and use of laboratory animals.

2.4. Drug and treatment

The rats on the high-fat/high-cholesterol diet were devided into five subgroups of ten rats each subgroup: rats of three subgroups, the low, middle and high dose subgroups, were administrated orally with PSME at a dose of 50 mg kg day−1, 100 mg kg day−1 and 150 mg kg day−1, respectively; another subgroup with GW3965 at a dose of 100 mg kg day−1; the remaining rats (FC: high-fat/high-cholesterol diet controls) with vehicle alone. The NC animals were also treated with vehicle alone. During the last 3 days of the experimental period, fecal samples we

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อจุดมุ่งหมายของการศึกษาการศึกษาเพื่อประเมินผล hypolipidemic สารสกัดบริสุทธิ์ Salvia miltiorrhiza (PSME) และการตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลเป็นไปตามที่ PSME ซ้อนไขมันโปรไฟล์ในหนู hyperlipidemicวัสดุและวิธีการหนูชาย Sprague – Dawley ในอาหารสูงไขมัน/สูงไขมันได้รับเนื้อหา PSME, GW3965 (การใช้ตับ X ตัวรับอะโกนิสต์) หรือรถคนเดียว ใช้ยีนนิพจน์วิเคราะห์และ transactivation assays เพื่อชี้แจงกลไกระดับโมเลกุลของการดำเนินการของ PSMEผลลัพธ์ความเข้มข้นของพลาสมารวมไขมัน low-density ไลโพโปรตีนไขมัน (ไขมัน LDL) และระดับไตรกลีเซอไรด์ในหนูรักษา ด้วย PSME ที่ 150 มิลลิกรัมกิโลกรัม day−1 ได้ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P < 0.01), มาพร้อมกับกับความเข้มข้นลดลงอย่างมีนัยสำคัญรวมไขมันตับและระดับไตรกลีเซอไรด์ (P < 0.01) ในหนูทั้งสองถือว่ายาเสพติด ความเข้มข้นของ high-density ไลโพโปรตีนไขมัน (ไขมัน HDL) มีนัยสำคัญ (P < 0.01) Intriguingly, heterodimer สั้นคู่ (SHP) mRNA ระดับสูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในหนูถือว่า PSME (P < 0.01), มาพร้อมกับมีระดับลดลงอย่างมีนัยสำคัญ mRNA ของโปรตีนรวมองค์ประกอบบังคับสเตอรอล 1c (SREBP1c) (P < 0.01), ซึ่งส่วนการลดลงของระดับไตรกลีเซอไรด์ตับและพลาสมาผ่านทางเดินเป็นตัวรับ-SHP-SREBP1c farnesoid X B11 ขนส่งเทปผูก ATP (ABCB11) และ murine Mdr2 พี ไกลโคโปรตีน (เรียก ABCB4) อย่างมีนัยสำคัญนำ โดย PSME ซึ่งถูกละลายไขมัน biliary โดยหลั่ง biliary เหมาะสมเกลือน้ำดีและ phospholipids Transactivation assays ถูกใช้เพื่อระบุ PSME เป็นการ farnesoid X ตัวรับ/ตับ X ตัวรับด้วยกองทัพ coagonistบทสรุปผลลัพธ์เหล่านี้ระบุไว้ที่ PSME เป็นการ farnesoid X coagonist X ตับ/ตัวรับตัวรับด้วยกองทัพส่วนใหญ่ปรับปรุงส่วนกำหนดค่าระดับไขมันในเลือดในหนู hyperlipidemicคำสำคัญด้วยกองทัพตัวรับตับ X Farnesoid X ตัวรับ Miltiorrhiza Salvia บริสุทธิ์แยก (PSME); Hypolipidemic1. บทนำหน่วยได้กลายเป็น โรคระบาดทั่วโลก และความชุกของกลุ่มอาการเผาผลาญได้เพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในทศวรรษในประเทศตะวันตกมากที่สุด (ฟอร์ดและ al., 2002) ภาวะแทรกซ้อนของอาการเผาผลาญได้แก่คลัสเตอร์สามเงื่อนไขที่ห้า: intolerance ต้านทานและกลูโคสอินซูลิน โรค ความดันโลหิตสูง ไขมันต่ำ high-density ไลโพโปรตีน (ไขมัน HDL) และ hypertriglyceridemia เอ็ม receptors นิวเคลียร์สุดท้ายของย่อหน้าและยีนเป้าหมายของพวกเขาแสดงศักยภาพกลยุทธ์รักษาสำหรับการบริหารของหน่วย ได้กำหนดระดับความสำคัญให้กลไกของการดำเนินการของตัวรับ farnesoid X ตับ X receptors ด้วยกองทัพและด้วยกองทัพในการเรียกใช้ proliferator receptors peroxisome ซึ่งเป็นเซนเซอร์ที่ควบคุมภาวะธำรงดุลของเมแทบอลิซึมของกลูโคส ไขมัน และกรดน้ำดี (Lu et al., 2001 Repa และ Mangelsdorf, 2002 Raalte et al., 2004 Claudel et al., 2005)อย่างไรก็ตาม บทบาทของตับ X ตัวรับด้วยกองทัพรักษาเป้าหมายได้ถูก hampered โดยข้อเท็จจริงที่ว่า ตับ X ตัวรับการเปิดใช้งานด้วยกองทัพเกิดการเพิ่มขึ้นของการสังเคราะห์กรดไขมันและสะสมของระดับไตรกลีเซอไรด์ในตับ (Repa et al., 2000 และ Schultz และ al., 2000) Farnesoid X ตัวรับมีเป้าหมายรักษาสัญญาสำหรับรักษา หรือป้องกันโรคนิ่วไขมันผ่าน farnesoid X เพิ่มขึ้นขึ้นอยู่กับตัวรับใน biliary น้ำดีเกลือและความเข้มข้นฟอสโฟลิพิด (Moschetta et al., 2004) Intriguingly เพิ่มกิจกรรม farnesoid X ตัวรับมีศักยภาพในการ attenuate hypertriglyceridemia ในการศึกษาก่อนหน้า (เบะ et al., 2004), ที่ coadministration cholic กรดสามารถ attenuate ตับ X ตัวรับอะโกนิสต์ (T0901317) -เกิด lipogenesis ในหนู C57BL/6J นอกจากนี้ coadministration ของหนูกับตับ X อะโกนิสต์ด้วยกองทัพตัวรับ T0901317 และ peroxisome receptors ที่เรียกใช้การ proliferator ด้วยกองทัพ agonists fenofibrate หรือ WY14643 สำเร็จไฟฟ้าเคร...ความสูงของระดับไตรกลีเซอไรด์เกิดจากตับ X เปิดตัวรับด้วยกองทัพ (Beyer et al., 2004) การหมุนเวียน ในการศึกษาก่อนหน้านี้ของเรา เอ็นบิวทานอแยกของซาน notoginseng (Burk) ราก F.H. เฉินระบุเป็น coagonist ของ farnesoid X ตัวรับและตับ X ตัวรับด้วยกองทัพ และได้แสดงการปรับปรุงส่วนกำหนดค่าของไขมันในหนู hyperlipidemic (จิและฆ้อง 2007) สาธิตจากการศึกษาก่อนหน้านี้ที่มีผลบวกที่เอ็มพร้อมของ receptors เหล่านี้นิวเคลียร์จะผลิตผลกระทบที่ไม่คาดคิดในการรักษาภาวะแทรกซ้อนของอาการเผาผลาญ ดังนั้น ตัวแทนยาที่มีศักยภาพในการ modulate receptors นิวเคลียร์เหล่านี้อย่างเร่งด่วนจำเป็น ความสำคัญมีการแนบสารกรรมการกจากแพทย์แผนจีนในปีที่ผ่านมาSalvia miltiorrhiza (SM ครอบครัว: Labiatae) เป็นรู้จักสมุนไพรจีนแบบดั้งเดิมในการรักษาโรคมาก โดยเฉพาะอย่างยิ่งสำรอกโรค (จิ et al., 2003, Ji et al., 2004 และ Zhu et al., 2004) คลินิกยังได้ระบุว่า SM เป็นยาที่มีประสิทธิภาพสำหรับอาการปวดเค้น pectoris กล้ามเนื้อหัวใจตายเหตุขาดเลือด และโรคหลอดเลือดสมอง (จิ et al., 2003, Ji et al., 2004 และ Zhu et al., 2004) ส่วนผสมสำคัญ 20 ใน SM ได้ระบุ (จิ et al., 2000) สารสกัดบริสุทธิ์ Salvia miltiorrhiza (PSME) เป็นสารสกัดประกอบด้วย 4 งานสารที่ละลายในส่วนผสมที่สำคัญ 20 PSME ได้แสดงให้เห็นว่าประสิทธิผลในการป้องกันของโรคหัวใจสำรอก (Sun et al., 2005 และช้างและ al., 2006)ในการศึกษาของเรา hypolipidemic มีประเมินผลของ PSME ในหนู hyperlipidemic และกลไกระดับโมเลกุลที่มีศักยภาพ โดยที่ PSME โพรไฟล์ไขมันซ้อนถูกสอบสวน โดยวิเคราะห์ยีนนิพจน์และ transactivation assays2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุPSME ให้กับเซี่ยงไฮ้วัสดุ Medica Bioengineering สถาบัน น้ำที่ละลายน้ำสกัดจาก salvia miltiorrhiza ซึ่งประกอบด้วยสี่จีนยากรรมการกส่วนผสมกับส่วนผสมอื่น ๆ lipophilic (Sun et al., 2005) ได้ ส่วนผสมเหล่านี้กรรมการกสี่มี Danshensu, Rosmarinic กรด และ Salvianolic กรด A และ B เป็นรายงานก่อนหน้านี้ (Sun et al., 2005) โครงสร้างทางเคมีของสารประกอบ 4 เหล่านี้แสดงใน Fig. 1โครงสร้าง 4 ส่วนผสมบริสุทธิ์จาก Salvia miltiorrhiza (1) ...Fig. 1 โครงสร้าง 4 ส่วนผสมบริสุทธิ์จาก Salvia miltiorrhiza (1) Danshensu, (2) Rosmarinic กรด กรด (3) Salvianolic B และอ.กรด (4) SalvianolicตัวเลือกรูปGW3965 [3-(3-(2-chloro-3-trifluoromethylbenzyl-2,2-diphenylethylamino)proproxy)phenylacetic กรด] (คอลลินส์และ al., 2002) ได้เตรียมการต่อ syntheses เคมีมาตรฐานจากเอกสารประกอบการเผยแพร่สำหรับการทดลองในสัตว์ทดลอง PSME และ GW3965 ถูกหยุดชั่วคราวในละลาย 1% carboxymethylcellulose (ซิก St. Louis สหรัฐอเมริกา) และระงับรูปกล่าว โดย ultrasonication สำหรับการทดลองเพาะเลี้ยง PSME และ GW3965 ถูกละลายใน dimethylsulfoxide (DMSO)2.2 การหลอมเหลว chromatography (HPLC) วิเคราะห์เป็นระบบ HPLC Agilent 1100 (Agilent เทคโนโลยี ดัลลัส CA, USA) ประกอบด้วยการจัดระบบตัวทำละลาย quaternary, degasser ที่ง่ายดาย การอัตโนมัติแซมเพลอร์ ควบคุมอุณหภูมิของคอลัมน์ และจับพ่อกับเวิร์กสเตชันการวิเคราะห์ด้วย กำหนดค่าคอลัมน์เป็น Agilent Zorbax ขยาย C18 คอลัมน์ระยะสำรอง (5 μm, 250 มม. × 4.6 มม.) ควบคู่กับคอลัมน์การรักษา Agilent Zorbax ขยาย C18 (5 μm, 10 มม. × 4.6 มม.) ปริมาณการฉีดตัวอย่าง 10 μl มีการตั้งค่าตรวจหาความยาวคลื่นที่ 288 nm, min−1 1.0 มิลลิลิตรมีอัตราการไหล และอุณหภูมิคอลัมน์ถูกรักษาไว้ที่ 20 องศาเซลเซียส เฟสเคลื่อน elution ไล่โทนสีที่ถูกผสม ด้วยตัวทำละลายตัว (0.026% อควี phosphoric กรด v/v) และ B (acetonitrile) โปรแกรมไล่ระดับมีดังนี้: 0-20 นาทีเริ่มต้น เปลี่ยนแปลงเชิงเส้นจาก A – B (98:2, v/v) A – B (77:23, v/v); ถัดไปนาที 20 – 35, A – B (71.5:28.5, v/v) การเปลี่ยนแปลงเชิงเส้น Danshensu ที่ซื้อจาก สถาบันแห่งชาติสำหรับการควบคุมทางชีวภาพและผลิตภัณฑ์ยา (จีน) กรด Rosmarinic, salvianolic กรด B และกรด salvianolic A ได้จากเซี่ยงไฮ้วัสดุ Medica Bioengineering สถาบัน ตัวอย่างมาตรฐานและ PSME เหล่านี้ถูกละลายในเมทานอล และโซลูชั่นทั้งหมดถูกกรองผ่าน Millex 0.2 μm ไนล่อนแผ่นกรองเมมเบรนเข็ม (จำกัดมาก กลาสโกว์ MA) ก่อนใช้2.3 การสัตว์หก – Sprague Dawley ชายหนู (280 ± 20 กรัม) ซื้อจากศูนย์กลางสัตว์ทดลองเซี่ยงไฮ้ จีน หนูมีถึง pelleted เปิดสูตร nonpurified อาหาร (Purina แล็บเชาเลข 5001) ฟรี และมีห้องพักในห้องควบคุมสิ่งแวดล้อมที่ 22 – 25 ° C ความชื้นสัมพัทธ์ที่ (60 ± 10) % และ 12 h วงจรไฟ (08:00 – 20:00 h) อาหารและน้ำประปาได้ ad libitum เลือดจะออกหลังจากแอร์พอร์ตโอเวอร์ไนท์อย่างรวดเร็ว และทำ prebled และจัดกลุ่มเพื่อให้ระดับไขมันเฉลี่ยของแต่ละกลุ่มคล้ายสัตว์ หลังจาก 1 สัปดาห์ acclimation หนูเหล่านี้ถูก devided เป็นสองกลุ่ม: หนูสิบ (NC: ควบคุมอาหารปกติ) มีถึงฟรีอาหารปกติ และ 50 หนูถูกเลี้ยง ด้วยอาหารสูงไขมัน/สูงไขมัน (ปกติอาหารเสริมไขมัน 1%, 0.5% choline bitartrate และน้ำมันมะกอก 5%) ระบบการปกครองนี้อาหารถูกนำมาใช้ทดลอง ทดลองได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ท้องถิ่น และดำเนินการตามแนวทางที่ยอมรับระหว่างประเทศสำหรับการดูแลและการใช้ห้องปฏิบัติการสัตว์2.4. ยา และการรักษาหนูในอาหารสูงไขมัน/สูงไขมันถูก devided เป็นห้ากลุ่มย่อยของกลุ่มย่อย 10 หนู: หนูสามกลุ่มย่อย กลุ่มย่อยยาต่ำ กลาง และสูง ถูก administrated เนื้อหากับ PSME ในปริมาณ 50 มิลลิกรัมกิโลกรัม day−1, day−1 มิลลิกรัมต่อ 100 กิโลกรัม และ 150 มิลลิกรัมกิโลกรัม day−1 ตามลำดับ กลุ่มย่อยอีก ด้วย GW3965 ในปริมาณ 100 มิลลิกรัมกิโลกรัม day−1 หนูเหลือ (FC: ควบคุมอาหารสูงไขมัน/สูงไขมัน) ด้วยรถยนต์เพียงอย่างเดียว สัตว์ NC ได้รับการรักษายัง มียานพาหนะเพียงอย่างเดียว ในระหว่างช่วง ระยะทดลอง fecal 3 วันตัวอย่างเรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อจุดมุ่งหมายของการศึกษาการศึกษามุ่งเป้าไปที่การประเมินผลกระทบhypolipidemic ของบริสุทธิ์ซัลเวียสารสกัดจาก miltiorrhiza (PSME) และการตรวจสอบกลไกระดับโมเลกุลที่อาจเกิดขึ้นโดยที่ PSME ปรับระดับไขมันในหนูไขมันในเลือดสูง. วัสดุและวิธีการปราก-Dawley หนูเพศในไขมันสูง / อาหารสูงคอเลสเตอรอลได้รับการรักษาด้วยการรับประทาน PSME, GW3965 (ตับเลือก X ตัวเอก) หรือยานพาหนะเพียงอย่างเดียว การวิเคราะห์การแสดงออกของยีนและการตรวจ transactivation ถูกนำมาใช้เพื่อชี้แจงกลไกระดับโมเลกุลของการกระทำของ PSME. ผลความเข้มข้นของพลาสม่าคอเลสเตอรอลรวมคอเลสเตอรอลไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำ (LDL คอเลสเตอรอล) และไตรกลีเซอไรด์ในหนูรับการรักษาด้วย PSME ที่ 150 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมในวันที่ 1 ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ (P <0.01) พร้อมกับการลดลงอย่างมีนัยสำคัญของความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลรวมตับและไตรกลีเซอไรด์ (P <0.01) ทั้งในหนูยาเสพติดได้รับการรักษาความเข้มข้นของไลโปโปรตีนคอเลสเตอรอลสูงความหนาแน่น (HDL คอเลสเตอรอล) สูงขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ (P <0.01) น่าพันธมิตร heterodimer สั้น (SHP) ระดับ mRNA อย่างมีนัยสำคัญที่สูงขึ้นในหนู PSME รับการรักษา (p <0.01) พร้อมกับมีระดับลดลงอย่างมีนัยสำคัญ mRNA ของ sterol องค์ประกอบกฎระเบียบที่มีผลผูกพันโปรตีน 1c (SREBP1c) (p <0.01) ซึ่งมีส่วนทำให้ ลดลงของตับและไตรกลีเซอไรด์พลาสม่าผ่าน farnesoid X-รับ SHP-SREBP1c ทางเดิน เอทีพีผูกพันเทป Transporter B11 (ABCB11) และหมา Mdr2 P-ไกลโคโปรตีน (หรือเรียกว่า ABCB4) ที่ถูกเหนี่ยวนำให้เกิดมีนัยสำคัญโดย PSME ซึ่งเป็นผู้รับผิดชอบในการละลายน้ำดีคอเลสเตอรอลโดยการหลั่งน้ำดีที่เหมาะสมของเกลือน้ำดีและฟอสโฟ ตรวจ transactivation ถูกนำมาใช้เพื่อระบุ PSME เป็น farnesoid รับ X / ตับรับ X α coagonist. สรุปผลการศึกษานี้ชี้ให้เห็นว่า PSME เป็น farnesoid รับ X / ตับ X รับα coagonist ดีขึ้นส่วนใหญ่ระดับไขมันในหนูไขมันในเลือดสูง. คำตับ X รับα; รับ Farnesoid x; สารสกัดบริสุทธิ์ซัลเวีย miltiorrhiza (PSME); hypolipidemic 1 บทนำโรคเมตาบอลิได้กลายเป็นโรคระบาดทั่วโลกและความชุกของภาวะ metabolic syndrome ได้รับการเพิ่มขึ้นอย่างรวดเร็วในช่วงทศวรรษที่ผ่านมาในประเทศตะวันตกส่วนใหญ่ (ฟอร์ด et al., 2002) ภาวะแทรกซ้อนของโรคเมตาบอลิจะถูกกำหนดเป็นกลุ่มของสามในห้าของเกณฑ์ที่: ความต้านทานต่ออินซูลินและแพ้น้ำตาลกลูโคส, โรคอ้วนท้องความดันโลหิตสูงคอเลสเตอรอลไลโปโปรตีนสูงความหนาแน่นต่ำ (HDL คอเลสเตอรอล) และ hypertriglyceridemia การปรับตัวรับนิวเคลียร์เด็กกำพร้าและยีนเป้าหมายของพวกเขาให้กลยุทธ์การรักษาที่มีศักยภาพในการบริหารจัดการของโรคเมตาบอลิ ลำดับความสำคัญได้รับการกำหนดให้กลไกของการกระทำของ farnesoid รับเอ็กซ์ผู้รับตับ X แอลฟาและ peroxisome รับ proliferator เปิดใช้งานอัลฟาซึ่งทำหน้าที่เป็นเซ็นเซอร์ที่ควบคุมสมดุลของการเผาผลาญของกลูโคสคอเลสเตอรอลและกรดน้ำดี (Lu et al., 2001 Repa และ Mangelsdorf 2002; Raalte et al, 2004;... Claudel et al, 2005) อย่างไรก็ตามบทบาทของตับ X รับαเป็นเป้าหมายการรักษาที่ได้รับการขัดขวางโดยความจริงที่ว่าตับรับ X αยืนยันการใช้งานที่เกิดจากการเพิ่มขึ้น การสังเคราะห์กรดไขมันและการสะสมของไตรกลีเซอไรด์ในตับ (Repa et al., 2000 และชูลท์ซ et al., 2000) รับ Farnesoid X เป็นเป้าหมายการรักษาที่มีแนวโน้มในการรักษาหรือป้องกันโรคนิ่วคอเลสเตอรอลผ่านการเพิ่มขึ้นของ farnesoid X รับขึ้นอยู่กับเกลือน้ำดีน้ำดีและความเข้มข้นของฟอส (Moschetta et al., 2004) น่า, เพิ่มกิจกรรมรับ farnesoid X มีศักยภาพที่จะผอม hypertriglyceridemia ในการศึกษาก่อนหน้า (Watanabe et al., 2004) ซึ่งใน coadministration ของกรดโคลิกอาจเจือจางตัวเอกตับ X (T0901317) -induced lipogenesis ใน C57BL / 6J หนู นอกจากนี้ coadministration ของหนูกับตับรับ X αตัวเอก T0901317 และ peroxisome proliferator รับเปิดใช้งานแอลฟา agonists fenofibrate หรือ WY14643 ประสบความสำเร็จลดระดับความสูงของไตรกลีเซอไรด์ที่เกิดจากการไหลเวียนของตับรับ X αยืนยันการใช้งาน (เบเยอร์ et al., 2004) ในการศึกษาก่อนหน้านี้สารสกัดจาก n-butanol ของ Panax notoginseng (Burk.) FH เฉินรากถูกระบุว่าเป็น coagonist ของ farnesoid รับ X และตับ X รับαและได้รับการแสดงเพื่อปรับปรุงระดับไขมันในหนูไขมันในเลือดสูง (จีและกง 2007) . การสาธิตจากการศึกษาก่อนหน้านี้มีผลกระทบในเชิงบวกว่าการปรับตัวรับพร้อมกันของนิวเคลียร์เหล่านี้จะก่อให้เกิดผลที่ไม่คาดคิดในการรักษาภาวะแทรกซ้อนของโรคที่การเผาผลาญอาหาร ดังนั้นตัวแทนในการรักษาที่มีศักยภาพในการปรับตัวรับนิวเคลียร์เหล่านี้มีความจำเป็นเร่งด่วน ความสำคัญมากขึ้นได้รับการติดอยู่กับสารออกฤทธิ์ทางชีวภาพจากการแพทย์แผนจีนในปีที่ผ่านมา. ตังเซียม (เอสเอ็ม; ครอบครัว: Labiatae) เป็นสมุนไพรจีนโบราณที่รู้จักกันดีสำหรับการรักษาโรคต่างๆโดยเฉพาะอย่างยิ่งโรคหลอดเลือดหัวใจขาดเลือด (จี, et al. 2003 จี et al., 2004 และจู้ et al., 2004) การทดลองทางคลินิกได้ชี้ให้เห็นว่าเอสเอ็มเป็นยาที่มีประสิทธิภาพสำหรับโรคหลอดเลือดหัวใจตีบ pectoris, กล้ามเนื้อหัวใจตายและโรคหลอดเลือดสมอง (จี et al., 2003 จี et al., 2004 และจู้ et al., 2004) 20 ส่วนผสมสำคัญในการเอสเอ็มได้รับการระบุ (จี et al., 2000) สารสกัดบริสุทธิ์ซัลเวีย miltiorrhiza (PSME) เป็นสารสกัดที่ประกอบด้วย 4 สารที่ละลายน้ำที่ใช้งานจาก 20 ส่วนผสมที่สำคัญ PSME ได้แสดงให้เห็นถึงประสิทธิภาพในการป้องกันโรคหัวใจขาดเลือด (Sun et al., 2005 และช้าง et al., 2006). ในการศึกษาของเราผลกระทบ hypolipidemic ของ PSME ได้รับการประเมินในหนูไขมันในเลือดสูงและกลไกระดับโมเลกุลที่อาจเกิดขึ้นโดยที่ PSME มอดูเลต ระดับไขมันถูกตรวจสอบโดยการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนและการตรวจ transactivation. 2 วัสดุและวิธีการ2.1 วัสดุPSME ให้กับเซี่ยงไฮ้วัสดุ Medica สถาบันวิศวกรรมชีวภาพ มันเป็นสารสกัดที่ละลายน้ำจาก miltiorrhiza ซัลเวียซึ่งประกอบด้วยสี่ส่วนผสมออกฤทธิ์ทางชีวภาพของสมุนไพรจีนที่มีส่วนผสม lipophilic อื่น ๆ (Sun et al., 2005) สี่เหล่านี้ออกฤทธิ์ทางชีวภาพที่มีส่วนผสม Danshensu กรด Rosmarinic และกรด Salvianolic A และ B ตามที่รายงานก่อนหน้านี้ (อาทิตย์ et al., 2005) โครงสร้างทางเคมีของสารทั้งสี่จะถูกแสดงในรูป 1. โครงสร้างของสี่ส่วนผสมที่บริสุทธิ์จากตังเซียม (1) ... รูป 1. โครงสร้างของสี่ส่วนผสมที่บริสุทธิ์จากตังเซียม (1) Danshensu (2) กรด Rosmarinic (3) Salvianolic กรด B, และ (4) กรด Salvianolic A. ตัวเลือกรูปGW3965 [3 (3 (2-chloro-3-trifluoromethylbenzyl-2,2-diphenylethylamino) proproxy) กรด phenylacetic] (คอลลิน et al., 2002) ถูกจัดทำขึ้นต่อไปนี้การสังเคราะห์สารเคมีมาตรฐานจากวรรณคดีตีพิมพ์. สำหรับในร่างกายทดลอง PSME และ GW3965 ถูกระงับใน carboxymethylcellulose 1% (ซิกม่าเซนต์หลุยส์สหรัฐอเมริกา) สารละลาย และระบบกันสะเทือนที่ได้รับเครื่องแบบโดย ultrasonication สำหรับในหลอดทดลอง PSME และ GW3965 ถูกกลืนหายไปใน Dimethylsulfoxide (DMSO). 2.2 โคของเหลวสมรรถนะสูง (HPLC) การวิเคราะห์Agilent 1100 ระบบ HPLC (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) ประกอบด้วยระบบการจัดส่งตัวทำละลายสี่เป็น degasser ออนไลน์อัตโนมัติตัวอย่างเป็นตัวควบคุมอุณหภูมิคอลัมน์และเครื่องตรวจจับ DAD คู่ กับเวิร์คสเตชั่วิเคราะห์ การกำหนดค่าคอลัมน์เป็น Agilent Zorbax ขยาย C18 ลิขสิทธิ์คอลัมน์เฟส (5 ไมครอน 250 มิลลิเมตร× 4.6 มิลลิเมตร) คู่กับ Agilent Zorbax ขยาย C18 คอลัมน์ยาม (5 ไมครอน, 10 มม× 4.6 มิลลิเมตร) ปริมาณการฉีดตัวอย่าง 10 ไมโครลิตร การตรวจจับคลื่นตั้งอยู่ที่ 288 นาโนเมตรเป็นอัตราการไหล 1.0 มิลลิลิตร 1 นาทีและอุณหภูมิคอลัมน์ถูกเก็บรักษาไว้ที่ 20 ° C เฟสเคลื่อนที่เป็นชะลาดซึ่งได้รับการผสมกับตัวทำละลาย A (0.026% น้ำกรดฟอสฟอรัส v / v) และ B (acetonitrile) โปรแกรมการไล่ระดับสีได้ดังนี้เริ่มต้น 0-20 นาทีการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้นจาก A-B (98: 2, v / v) เป็น A-B (77:23, v / v); ต่อไป 20-35 นาทีการเปลี่ยนแปลงเชิงเส้นเป็น A-B (71.5: 28.5, v / v) Danshensu ซื้อจากสถาบันแห่งชาติเพื่อการควบคุมทางชีวภาพและผลิตภัณฑ์เภสัชกรรม (จีน) กรด Rosmarinic, B salvianolic กรดและกรด salvianolic ถูกจัดไว้ให้โดยเซี่ยงไฮ้วัสดุ Medica สถาบันวิศวกรรมชีวภาพ มาตรฐานตัวอย่างและ PSME ถูกละลายในเมทานอลและการแก้ปัญหาทั้งหมดถูกกรองผ่าน Millex 0.2 ไมครอนกรองเมมเบรนเข็มฉีดยาไนลอน (ค จำกัด , ฟอร์ด, แมสซาชูเซต) ก่อนการใช้งาน. 2.3 สัตว์หกสิบปราก-Dawley หนูเพศผู้ (280 ± 20 กรัม) ที่ซื้อมาจากศูนย์สัตว์ทดลองเซี่ยงไฮ้ประเทศจีน หนูมีการเข้าถึงอิสระที่จะเปิดเม็ดสูตรอาหาร nonpurified (Purina แล็บ Chow ฉบับที่ 5001) และได้รับการตั้งอยู่ในห้องควบคุมสิ่งแวดล้อมที่ 22-25 องศาเซลเซียสความชื้นสัมพัทธ์ที่ (60 ± 10)% และมี 12 ชั่วโมงวงจรไฟ (08: 00-20: 00 ชั่วโมง) อาหารและน้ำประปาที่มีให้กินอย่างเต็มที่ เลือดถูกดึงเสมอหลังจากที่ได้อย่างรวดเร็วในชั่วข้ามคืนและทำให้สัตว์ที่ถูก prebled และจัดกลุ่มเพื่อให้ระดับไขมันเฉลี่ยของแต่ละกลุ่มมีความคล้ายคลึงกัน หลังจากที่ปรับตัว 1 สัปดาห์หนูเหล่านี้ถูกแบ่งออกเป็นสองกลุ่มคือสิบหนู (NC: การควบคุมการรับประทานอาหารปกติ) มีอิสระที่จะเข้าถึงอาหารปกติและห้าสิบหนูได้รับการเลี้ยงดูที่มีไขมันสูง / อาหารสูงคอเลสเตอรอล (รับประทานอาหารปกติ เสริมด้วยคอเลสเตอรอลที่ 1% bitartrate โคลีน 0.5% และ 5% น้ำมันมะกอก) นี้สูตรอาหารที่ถูกนำมาใช้ตลอดการทดลอง การทดลองที่ได้รับอนุมัติจากคณะกรรมการจริยธรรมสัตว์ในท้องถิ่นและดำเนินการตามหลักเกณฑ์ได้รับการยอมรับในระดับนานาชาติสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ทดลอง. 2.4 ยาเสพติดและการรักษาหนูในไขมันสูง / อาหารสูงคอเลสเตอรอลถูกแบ่งออกเป็นห้ากลุ่มย่อยสิบหนูแต่ละกลุ่มย่อย: หนูสามกลุ่มย่อยต่ำกลุ่มย่อยยากลางและสูงถูกปกครองด้วยวาจากับ PSME ขนาด 50 มกกกวันที่ 1, 100 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมในวันที่ 1 และ 150 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัมวัน-1 ตามลำดับ; กลุ่มย่อยที่มี GW3965 ขนาด 100 มิลลิกรัมกิโลกรัมวัน 1; หนูที่เหลืออยู่ (เอฟซี: ไขมันสูง / คอเลสเตอรอลสูงควบคุมอาหาร) กับรถคนเดียว สัตว์อร์ทแคโรไลนาได้รับการรักษายังมีรถเพียงอย่างเดียว ในช่วง 3 วันสุดท้ายของรอบระยะเวลาการทดลองตัวอย่างอุจจาระเรา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

จุดมุ่งหมายของการศึกษานามธรรม


มีความสามารถในการประเมินผล hypolipidemic สารสกัดบริสุทธิ์ miltiorrhiza Salvia ( psme ) และศึกษาศักยภาพกลไกระดับโมเลกุลที่ psme ปรับไขมันในหนูแต่ละโปรไฟล์

วัสดุและวิธีการ

) หนู Sprague ต่อการชายในไขมัน / คอเลสเตอรอลสูงอาหารได้รับการรักษาปากเปล่ากับ psme ,gw3965 ( selective ตับ x ตัวรับอะโกนิสต์ ) หรือรถคนเดียว การวิเคราะห์การแสดงออกของยีน และ transactivation ) ถูกใช้เพื่อทำความเข้าใจกลไกระดับโมเลกุลของการกระทำของ psme ผล

ความเข้มข้นของพลาสมาไลโปโปรตีนความหนาแน่นต่ำคอเลสเตอรอลรวม

, คอเลสเตอรอล ( คอเลสเตอรอล ) และไตรกลีเซอไรด์ในหนูที่ได้รับ psme 150 มิลลิกรัมต่อกิโลกรัม− 1 วันลดลงอย่างมีนัยสำคัญ ( P < 0.01 )พร้อมกับลดลงความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลและไตรกลีเซอไรด์ในตับรวม ( P < 0.01 ) ทั้งยา รักษาหนู ความเข้มข้นของคอเลสเตอรอลไลโปโปรตีนความหนาแน่นสูง ( เอชดีแอลโคเลสเตอรอลสูง ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติ ( p < 0.01 ) ฟังดู คู่หู heterodimer สั้น ( SHP ) สูงกว่าในระดับ mRNA psme ถือว่าหนู ( P < 0.01 )พร้อมกับลดลงระดับ mRNA ของสเตอรอลที่มีองค์ประกอบโปรตีน 1C ( srebp1c ) ( P < 0.01 ) ซึ่งสนับสนุนการลดลงของตับและพลาสมาไตรกลีเซอไรด์จะผ่าน farnesoid x receptor-shp-srebp1c เส้นทาง การขนย้าย b11 ( abcb11 เอทีพีเทป ) และ ~ mdr2 พี ( ยังเป็นที่รู้จัก abcb4 ) อย่างมีนัยสำคัญทางสถิติที่ psme เกิดจาก ,