MATERIALS AND METHODSPlant material

MATERIALS AND METHODS
Plant material
The chilli varieties included in the study were (1) Jalapeño, (2)
Amashito, (3) Ojo de cangrejo and (4) Habanero. Varieties 1 and 4
are cultivated and belong to Caspicum annuum and Capsicum
chinense Jacq., while varieties 2 and 3 are wild and belong to C.
annuum var. glabriusculum. They were used as parents of diallel
crosses without reciprocal crosses, and were done by hand in the
greenhouse at the División Académica de Ciencias Biológicas
(DACBiológicas), Universidad Juárez Autónoma de Tabasco
(UJAT), in Villahermosa, Tabasco, Mexico during Spring 2009.
DACBiológicas is located at a mean altitude above sea level of 10
m, at 19032'03'' N, 99007'46'' W, in a hot humid Am(f)''(i')g climate
(García, 1970), with 2500-3000 mm of rainfall and an average
annual temperature of 24-25°C. The plant parents were s elected
considering different traits of the fruit and plant morphology.
AFLP reaction
Young leaves were collected from five plants of each material
(parents and crosses), and three 0.5 g individual tissue samples
were obtained from the leaves. The samples were placed in liquid
nitrogen (-196°C) in order to extract the genomic DNA ( Dellaporta
et al., 1983). The concentration of gDNA extracted was quantified in
a Jenway 6305® UV/vis spectrophotometer at an absorbance of
260 nm, and its quality was verified after electrophoresis in 5 μg of
DNA and 1% agarose gel (p v-1) with TAE buffer (40 mM trisacetate,
pH 7.6, 1 mM Na2.EDTA), for 2 h at 80 V and stained with
ethidium bromide (0.5 mg mL-1). AFLP (amplified fragment length
polymorphism) type molecular markers were used for the genetic
analyses of parents and their crosses. Six combinations of
molecular markers (MM) were evaluated (Table 1) in a preliminary
test. The combinations M1 and M3 did not give a good amplification,
for which reason only the other four combinations (M2, M4, M5, M6)
were used. The AFLP amplified fragments were separated by
electrophoresis in 6.5% polyacrylamide gel (Vos et al., 1995), using
the commercial IRDye Flourescent AFLP® Kit for large plant

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัสดุและวิธีการวัสดุโรงงานพันธุ์พริกที่รวมอยู่ในการศึกษาได้ (1) Jalapeño, (2)Amashito, cangrejo เด Ojo (3) และ (4) Habanero สายพันธุ์ที่ 1 และ 4จะปลูก และสมาชิกของ Caspicum annuum และพริกหวานchinense Jacq. ในขณะที่สายพันธุ์ 2 และ 3 มีป่า และเป็นซีannuum เพียง glabriusculum พวกเขาใช้เป็นพ่อแม่ของ diallelตัดไม่ตัดซึ่งกันและกัน และทำ ด้วยมือในการเรือนกระจกที่ Biológicas División Académica เดอ Ciencias(DACBiológicas), Universidad Juárez Autónoma de Tabasco(UJAT), Villahermosa, Tabasco เม็กซิโกในช่วงฤดูใบไม้ผลิ 2009 ในการDACBiológicas จะอยู่ที่ระดับความสูงเฉลี่ยเหนือระดับน้ำทะเล 10m ที่ 19032'03 '' N, 99007'46 '' W ในร้อนชื้น Am(f)''(i') g สภาพภูมิอากาศ(García, 1970) กับ 2500-3000 มม.ปริมาณน้ำฝนและค่าเฉลี่ยอุณหภูมิประจำปี 24-25 องศาเซลเซียส ครอบครัวพืชถูกเลือก sพิจารณาลักษณะของสัณฐานวิทยาของพืชและผลไม้ต่าง ๆปฏิกิริยา AFLPใบอ่อนที่ถูกเก็บรวบรวมจากพืชห้าของแต่ละวัสดุ(ผู้ปกครอง และตัด), และตัวอย่างเนื้อเยื่อแต่ละ 0.5 g 3ได้รับมาจากใบ ตัวอย่างถูกเก็บไว้ในของเหลวไนโตรเจน (-196 ° C) เพื่อแยก DNA genomic (Dellaportaและ al., 1983) ความเข้มข้นของ gDNA สกัดถูก quantified ในเครื่องทดสอบกรดด่าง® Jenway 6305 UV/vis ที่ absorbance มีของ260 nm และคุณภาพถูกตรวจสอบหลังจาก electrophoresis ใน μg 5 ของดีเอ็นเอและ 1% agarose เจ (p v-1) กับเต้บัฟเฟอร์ (40 มม. trisacetatepH 7.6, 1 mM Na2.EDTA), 2 h ที่ 80 V และทิ้งคราบด้วยโบรไมด์ ethidium (มิลลิกรัม 0.5 mL-1) AFLP เอาต์ส่วนยาวเครื่องหมายโมเลกุลชนิดโพลิมอร์ฟิซึม) ใช้สำหรับในทางพันธุกรรมวิเคราะห์ของผู้ปกครองและการตัด ชุดที่หกของมีเครื่องหมายโมเลกุล (MM) (ตาราง 1) มีประเมินในเบื้องต้นเป็นการทดสอบ ชุด M1 และ M3 ได้ให้ขยายดีซึ่งเหตุผลเท่านั้นที่อื่น 4 ชุด (M2, M4, M5, M6)ใช้ บางส่วนของ AFLP ขยายถูกคั่นด้วยใช้ electrophoresis ในเจล polyacrylamide 6.5% (Vos et al., 1995),ชุด® IRDye Flourescent AFLP เชิงพาณิชย์สำหรับโรงงานขนาดใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีการ
วัสดุพืช
พันธุ์พริกรวมในการศึกษาคือ (1) Jalapeño (2)
Amashito (3) Ojo de Cangrejo และ (4) Habanero พันธุ์ที่ 1 และ 4
ได้รับการปลูกฝังและเป็น annuum Caspicum และพริก
chinense Jacq. ในขณะที่สายพันธุ์ที่ 2 และ 3 เป็นป่าและเป็น C.
annuum var glabriusculum พวกเขาถูกนำมาใช้เป็นพ่อแม่ของ diallel
ข้ามโดยไม่ต้องข้ามซึ่งกันและกันและได้ทำด้วยมือใน
เรือนกระจกที่ส่วนโม Ciencias Biológicas
(DACBiológicas) Universidad Autónoma de Juarez รัฐทาบาสโก
(UJAT) ใน Villahermosa, ทาบาสโก, เม็กซิโกในช่วงฤดูใบไม้ผลิ 2009
DACBiológicasตั้งอยู่ที่ระดับความสูงเฉลี่ยเหนือระดับน้ำทะเล 10
เมตรที่ 19032'03 '' N, 99007'46 '' W ในร้อนชื้น Am (ฉ) '' (i ') สภาพภูมิอากาศกรัม
(การ์เซีย, 1970) มี 2500-3000 มิลลิเมตรปริมาณน้ำฝนและโดยเฉลี่ย
ปีอุณหภูมิ 24-25 องศาเซลเซียส พ่อแม่ของพืชเป็น S ได้รับการเลือกตั้ง
พิจารณาลักษณะที่แตกต่างกันของผลไม้และสัณฐานวิทยาของพืช.
AFLP ปฏิกิริยา
ใบอ่อนที่ถูกเก็บรวบรวมจากห้าพืชของแต่ละวัสดุ
(พ่อแม่และกากบาท) และสาม 0.5 กรัมแต่ละตัวอย่างเนื้อเยื่อ
ที่ได้รับจากใบ ตัวอย่างที่ถูกวางไว้ในของเหลว
ไนโตรเจน (-196 ° C) เพื่อสกัดดีเอ็นเอ (Dellaporta
et al., 1983) ความเข้มข้นของ gDNA ที่สกัดได้เมื่อวัดใน
Jenway 6305® UV / Vis Spectrophotometer ที่ดูดกลืนแสงของ
260 นาโนเมตรและมีคุณภาพได้รับการตรวจสอบหลังจาก electrophoresis ใน 5 ไมโครกรัมของ
ดีเอ็นเอและ 1% agarose เจล (P V-1) ที่มีบัฟเฟอร์ TAE ( 40 มิลลิเมตร trisacetate,
พีเอช 7.6, 1 มิลลิ Na2.EDTA) เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 80 V และย้อมด้วย
ethidium bromide (0.5 มิลลิกรัมต่อมิลลิลิตร-1) AFLP (ความยาวส่วนขยาย
polymorphism) พิมพ์เครื่องหมายโมเลกุลที่ใช้ในทางพันธุกรรม
การวิเคราะห์ของพ่อแม่และกากบาทของพวกเขา หกการรวมกันของ
โมเลกุลเครื่องหมาย (MM) ได้รับการประเมิน (ตารางที่ 1) ในเบื้องต้น
การทดสอบ การรวมกัน M1 และ M3 ไม่ได้ให้การขยายที่ดี
ซึ่งเหตุผลเดียวที่คนอื่นอีกสี่รวมกัน (M2, M4, M5, M6)
ถูกนำมาใช้ ชิ้นส่วนขยาย AFLP ถูกแยกออกโดย
electrophoresis ในเจลอะคริเลต 6.5% (Vos et al., 1995) โดยใช้
เชิงพาณิชย์ IRDye Flourescent AFLP®ชุดสำหรับโรงงานขนาดใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ

วัสดุพืชพริกพันธุ์รวมอยู่ในการศึกษา คือ ( 1 ) jalape á o ,
amashito ( 2 ) , ( 3 ) และ ( 4 ) โจ เดอ cangrejo ฮาบาเนโร . สายพันธุ์ที่ 1 และ 4
มีการเพาะปลูกและเป็นของ caspicum annuum พริกหวาน
chinense jacq ในขณะที่สายพันธุ์ที่ 2 และ 3 เป็นป่าและอยู่ใน C . annuum )
glabriusculum . พวกเขาถูกใช้เป็นพ่อแม่ของปี
ข้ามโดยไม่ซึ่งกันและกันต่างและทำด้วยมือใน
เรือนกระจกที่ divisi เลออง เดอ วท บ วทóเซียนเซียส ) , ไมกาห์ gicas
( dacbiol ó gicas ) Universidad จูซัวเรซหรือóโนมา เดอ ทาบาสโก
( ujat ) ใน Villahermosa Tabasco , เม็กซิโก , ในฤดูใบไม้ผลิ 2009
dacbiol ó gicas ตั้งอยู่ที่ระดับความสูงเฉลี่ยข้างต้น ทะเลระดับ 10
M ที่ 19032 '03 ' ' n ' ' 99007 '46 w , ในที่ร้อนชื้นคือ ( F ) ' ' ( I ' g ) บรรยากาศ
( กาโอ การ์ซีอา , 1970 )กับ 2500-3000 มิลลิเมตรของปริมาณน้ำฝนและอุณหภูมิเฉลี่ยรายปีของ
24-25 องศา พืชที่พ่อแม่มีลักษณะที่แตกต่างกันของการเลือกตั้ง
พิจารณาผลและสัณฐานวิทยาของพืช เทคนิคปฏิกิริยา

ใบอ่อนนี้มีจุดประสงค์ที่จะศึกษาพืชของแต่ละวัสดุ
( พ่อแม่และคู่ผสม ) และสาม 0.5 กรัมแต่ละตัวอย่างเนื้อเยื่อ
ได้รับจาก ใบ ตัวอย่างอยู่ในของเหลว
ไนโตรเจน ( - 196 องศา C ) เพื่อสกัดดีเอ็นเอ ( dellaporta
et al . , 1983 ) ความเข้มข้นของ gdna สกัดถูก quantified ในการ jenway 6305 ® UV / VIS Spectrophotometer ที่ค่า
260 nm และคุณภาพของการตรวจสอบความถูกต้องหลังจาก electrophoresis ใน 5 μ g
ดีเอ็นเอและ 1% เจล ( P V-1 ) กับ แท บัฟเฟอร์ ( 40 มม. trisacetate
, pH 7.6 1 อืมๆ . EDTA ) 2 H 80 V และเปื้อน
ทิเดียมโบรไมด์ ( 0.5 mg แน่นอน ) เอเอฟ ( fragment length polymorphism ของ
) ประเภทเครื่องหมายโมเลกุลที่ใช้สำหรับการวิเคราะห์ทางพันธุกรรม
พ่อแม่และลูกผสม . หกชุดของ
โมเลกุลเครื่องหมาย ( มม. ) จำนวน ( ตารางที่ 1 ) ในการทดสอบเบื้องต้น

ชุด M1 และ M3 ไม่ได้ให้แบบที่ดี
ซึ่งเหตุผลอีก 4 ชุด ( m2 M4 , M5 , M6
) มาใช้ที่แยกได้จากชิ้นส่วนของเอเอฟ 6.5 % polyacrylamide gel electrophoresis ใน
( วอส et al . , 1995 ) การใช้
irdye พาณิชย์ Flourescent เอเอฟ®ชุดสำหรับโรงงานขนาดใหญ่