1.Thaw frozen DH5a competent cell b

1.Thaw frozen DH5a competent cell by holding the tube in your hand until cells thaw.
2.Transfer the tube on ice for at least 10 min.
3.Add 10 microliter of recombinant plasmid into chilled competent cell and swirl gently to mix their content. store the mixed tube on ice for 30 min.
4.Transfer the tube onto water bath that set temperature at 42 c for 2 min.
5.rapidly transfer the tube onto the ice to chill the cell for 2 min.
6.Add 800 microliter of LB medium to the tube.
7.pipet all in the tube into fresh tube 15 ml containing 1 ml of LB medium.
8.Add 40 microliter of 1 M glucose and incubate the tube in incubator shaker at 37 c 200 rpm for 45 min.
9.Transfer 200-500 microliter of transformed competent cell onto LB agar containing kanamycin 10 µg/ml and gently spread the transformed competent cell over the surface of the agar plate by using a sterile bent glass rod until the liquid has been absorbed.
10.invert the plate and incubate at 37 c overnight.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

1.ทราน DH5a แช่แข็งเซลล์อำนาจ โดยถือหลอดในมือของคุณจนกว่าเซลล์ทราน2.โอนท่อบนน้ำแข็งน้อย 10 นาที3.เพิ่ม 10 ไมโครลิตรของ recombinant plasmid เซลล์อำนาจเย็น และ swirl ผสมเนื้อหาเบา ๆ เก็บหลอดผสมในน้ำแข็ง 30 นาที4.โอนหลอดลงในอ่างน้ำที่อุณหภูมิที่ 42 c สำหรับ 2 นาที5.โอนย้ายท่อลงบนน้ำแข็งคลายเซลล์สำหรับ 2 นาทีอย่างรวดเร็ว6.เพิ่ม 800 ไมโครลิตรของปอนด์กลางท่อ7.การ pipet ในหลอดเป็นหลอดสด 15 ml ประกอบด้วย 1 ml ของปอนด์กลาง8.เพิ่ม 40 ไมโครลิตรของ 1 M กลูโคส และฟักหลอดในเชคเกอร์ incubator ที่ 37 c 200 rpm สำหรับ 45 นาที9.โอนย้าย 200-500 ไมโครลิตรของเซลล์มีอำนาจแปรไปปอนด์ agar ประกอบด้วยกานามัยซิน 10 ไมโครกรัมเป็น เครื่อง/ml และค่อย ๆ แพร่กระจายเซลล์มีอำนาจแปรรูปผ่านพื้นผิวของจาน agar โดยร็อดแก้วกอซโค้งจนมีการดูดซึมของเหลว10.สลับจาน และฟักที่ 37 c ค้างคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

1.Thaw แช่แข็งเซลล์อำนาจ DH5a โดยถือหลอดในมือของคุณจนกว่าเซลล์ละลาย.
2.Transfer หลอดบนน้ำแข็งเป็นเวลาอย่างน้อย 10 นาที.
3.Add 10 ไมโครลิตรของพลาสมิดสายผสมลงในเซลล์ที่มีอำนาจแช่เย็นและหมุนเบา ๆ เพื่อผสมเนื้อหาของพวกเขา . เก็บหลอดผสมบนน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที.
4.Transfer หลอดลงในอ่างน้ำที่ตั้งอุณหภูมิที่ 42 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 นาที.
5.rapidly โอนหลอดลงบนน้ำแข็งเย็นมือถือเป็นเวลา 2 นาที.
6.Add 800 ไมโครลิตร ของกลาง LB หลอด.
7.pipet ทั้งหมดในหลอดลงในหลอดสด 15 มล. ที่มี 1 มิลลิลิตรของกลาง LB.
8.Add 40 ไมโครลิตร 1 M กลูโคสและฟักไข่ในหลอดปั่นศูนย์บ่มเพาะที่ 37 ค 200 รอบต่อนาทีเป็นเวลา 45 นาที .
9.Transfer 200-500 ไมโครลิตรของเซลล์เปลี่ยนอำนาจลงบนอาหารเลี้ยงเชื้อ LB กานามัยซินที่มี 10 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรและค่อยๆแพร่กระจายของเซลล์เปลี่ยนอำนาจเหนือพื้นผิวของแผ่นวุ้นโดยใช้ก้านแก้วงอจนของเหลวผ่านการฆ่าเชื้อที่ได้รับการดูดซึม.
10 .invert จานและฟักที่ 37 คในชั่วข้ามคืน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

1 . ละลาย dh5a แช่แข็งเซลล์ที่มีความสามารถโดยถือหลอดในมือของคุณจนกว่าเซลล์ละลาย .
2.transfer หลอดบนน้ำแข็งเป็นเวลาอย่างน้อย 10 นาที
3 เพิ่ม 10 ไมโครลิตรแนนท์พลาสมิดเข้าสู่เซลล์และหมุนเบา ๆความเย็นผสมเนื้อหาของพวกเขา ร้านท่อผสมในน้ำแข็งเป็นเวลา 30 นาที
4.transfer หลอดลงในนํ้าที่อุณหภูมิ 42 องศาเซลเซียส 2 นาที
5รวดเร็วโอนท่อบนน้ำแข็งที่เย็นเซลล์ 2 นาที
6.add 800 ไมโครลิตร ปอนด์ขนาดกลางหลอด .
7.pipet ทั้งหมดในหลอดเป็นหลอด 15 ml ประกอบด้วย 1 มิลลิลิตรของปอนด์ขนาดกลางสด
8.add 40 ไมโครลิตร 1 เมตรกลูโคสและท่อในตู้บ่มที่ 37 องศาเซลเซียสเขย่า 200 รอบต่อนาทีสำหรับ 45 นาที
9โอน 200-500 ไมโครลิตร เปลี่ยนความสามารถเซลล์บนปอนด์วุ้นที่มีน 10 µ g / ml และค่อยๆกระจายแปลงความสามารถของเซลล์บนพื้นผิวของ agar plate โดยใช้แท่งแก้วงอปลอดเชื้อจนกว่าน้ำที่ถูกดูดซึม .
10.invert จานและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส ในชั่วข้ามคืน