Nuclear DNA content was assessed us

Nuclear DNA content was assessed using a BD FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA) flow cytometer. Two technical replicates of the same clone were performed (on different days) for each plant on 42 F1 individuals and the inbred annual lines. A single measurement was performed on the other individuals. Fully expanded leaf tissue sections of 0.55 cm2 were finely chopped in 500 ml of extraction buffer (Partec, CyStain PI Absolut P), followed by filtration through a 50 micron nylon mesh. Filtered nuclei were stained with 2 ml of propidium iodide staining solution (Partec, CyStain PI Absolut P), stored at 4 °C, and examined within 12 h of preparation. A commercial standard of trout erythrocytes (Partec, DNA Control UV, 25 ml) as well as the internal standard from diploid HA 89 were used to calculate DNA content. A minimum of 1000 nuclei were examined for each sample. DNA content was calculated by taking the ratio of the peak intensity of each sample to that of the known standard and then multiplying the ratio by the picogram (pg) genome size of the standard. The BC1F1 populations were characterized with freeze dried tissue, which has decreased fluorescence relative to fresh tissue (Doležel et al., 2007). Freeze dried samples were calibrated by identifying differences between freeze dried and fresh tissue of the same clone in a subsample of 40 F1 individuals. Ploidy boundaries were assessed by constructing 95% confidence intervals around the mean genome content of each population and comparing the genome content to the known values in the literature. Confidence intervals were constructed by 1000 bootstrap replications from the empirical distribution of each population. Briefly, a random sample was drawn with replacement from genome sizes in each population, creating a new distribution from which the 2.5% and the 97.5% individuals were used to create a 95% confidence interval for each ploidy level (Efron and Tibshirani, 1993)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เนื้อหาดีเอ็นเอนิวเคลียร์ถูกประเมินใช้ cytometer ไหลเป็น BD FACSCalibur (วิทยาศาสตร์ชีวภาพในระดับ BD, San Jose, CA) เหมือนกับเทคนิคสองของโคลนเดียวกันถูกดำเนิน (วันอื่น) สำหรับแต่ละโรงงาน 42 F1 บุคคลและเสถียรประจำสาย ทำการวัดเดียวตามบุคคลอื่น ขยายเนื้อเยื่อใบส่วนของ 0.55 cm2 มีเตรียมการใน 500 มล.สกัดบัฟเฟอร์ (Partec, CyStain PI Absolut P), ตาม ด้วยการกรองใช้ตาข่ายไนล่อน 50 ไมครอน นิวเคลียสของกรองภาพกับไอโอไดด์ propidium โซลูชัน (Partec, CyStain PI Absolut P), เก็บที่ 4 ° C และตรวจสอบภายใน 12 ชม.ของการเตรียมการย้อมสี 2 มล. มาตรฐานเชิงพาณิชย์ของเม็ดเลือดแดงปลาเทราท์ (Partec ดีเอ็นเอควบคุม UV, 25 ml) เป็นมาตรฐานภายในจากพฤติกรรมมักฮา 89 ถูกใช้เพื่อคำนวณปริมาณดีเอ็นเอ ขั้นต่ำ 1000 แอลฟาถูกตรวจสอบอย่าง เนื้อหาดีเอ็นเอถูกคำนวณ โดยใช้อัตราส่วนของความเข้มข้นสูงสุดของแต่ละอย่างที่มาตรฐานรู้จัก และคูณอัตราส่วนขนาดมาตรฐานพันธุ picogram (pg) ประชากร BC1F1 มีลักษณะ มีเนื้อเยื่อแห้ง ซึ่งลดลงเรืองแสงสัมพันธ์กับเนื้อเยื่อสด (Doležel et al. 2007) แช่แข็งอบแห้งอย่างถูกปรับเทียบ โดยระบุความแตกต่างระหว่างซดสดในเนื้อเยื่อของโคลนเดียวกันใน subsample ของ F1 40 พล็อยดีขอบเขตถูกประเมิน โดยการสร้างช่วงความเชื่อมั่น 95% พันธุหมายถึงเนื้อหาของแต่ละประชากร และเปรียบเทียบเนื้อหาพันธุค่าที่รู้จักกันในวรรณคดี ช่วงความเชื่อมั่นถูกสร้างขึ้น โดย 1000 ระยะเริ่มต้นจากการกระจายเชิงประจักษ์ของประชากรแต่ละ สั้น ๆ มาพร้อมแทนสุ่มตัวอย่างจากพันธุขนาดในแต่ละประชากร สร้างการกระจายใหม่ที่ 2.5% และบุคคลที่ 97.5% ใช้ในการสร้างช่วงความเชื่อมั่น 95% สำหรับแต่ละระดับพล็อยดี (ช่วยและ Tibshirani, 1993)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ปริมาณดีเอ็นเอนิวเคลียร์ได้รับการประเมินโดยใช้ BD FACSCalibur (BD ชีววิทยาศาสตร์, San Jose, CA) ไหล cytometer สองซ้ำทางเทคนิคของโคลนเดียวกันได้ดำเนินการ (ในวันที่แตกต่างกัน) สำหรับพืชแต่ละ 42 บุคคล F1 และสายพันธุ์ประจำปี วัดเดียวที่ไ​​ด้รับการดำเนินการเกี่ยวกับบุคคลอื่น ๆ ขยายตัวได้เต็มที่ส่วนเนื้อเยื่อใบ 0.55 cm2 ถูกสับใน 500 มล. ของบัฟเฟอร์สกัด (Partec, CyStain PI Absolut P) ตามด้วยการกรองผ่านตาข่ายไนลอน 50 ไมครอน นิวเคลียสกรองถูกย้อมด้วยสี 2 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหาการย้อมสี propidium ไอโอไดด์ (Partec, CyStain PI Absolut P), เก็บไว้ที่ 4 องศาเซลเซียสและการตรวจสอบภายใน 12 ชั่วโมงของการเตรียมการ มาตรฐานในเชิงพาณิชย์ของเม็ดเลือดแดงปลาเทราท์ (Partec ดีเอ็นเอควบคุมรังสียูวี 25 มล.) เช่นเดียวกับมาตรฐานภายในจากการซ้ำ HA 89 ถูกนำมาใช้ในการคำนวณปริมาณดีเอ็นเอ อย่างน้อย 1000 นิวเคลียสมีการตรวจสอบสำหรับแต่ละตัวอย่าง ปริมาณดีเอ็นเอที่คำนวณโดยการใช้อัตราส่วนของความหนาแน่นสูงสุดของแต่ละกลุ่มตัวอย่างที่มีมาตรฐานเป็นที่รู้จักกันแล้วคูณอัตราส่วนโดย picogram (PG) ขนาดจีโนมของมาตรฐาน ประชากร BC1F1 โดดเด่นด้วยการแช่แข็งแห้งเนื้อเยื่อซึ่งได้ลดลงเมื่อเทียบกับการเรืองแสงเนื้อเยื่อสด (Dolezel et al., 2007) ตรึงตัวอย่างแห้งสอบเทียบโดยการระบุความแตกต่างระหว่างแช่แข็งแห้งและเนื้อเยื่อใหม่ของโคลนเดียวกันใน subsample 40 บุคคล F1 ขอบเขต ploidy ได้รับการประเมินโดยการสร้างความเชื่อมั่น 95% รอบเนื้อหาหมายถึงจีโนมของประชากรแต่ละคนและการเปรียบเทียบจีโนมเนื้อหาให้เป็นค่าที่รู้จักกันในวรรณคดี ช่วงความเชื่อมั่นที่ถูกสร้างขึ้นด้วย 1000 ซ้ำบูตจากการกระจายเชิงประจักษ์ของประชากรในแต่ละ สั้น ๆ ตัวอย่างที่สุ่มถูกดึงด้วยการเปลี่ยนจากขนาดจีโนมของประชากรในแต่ละสร้างจัดจำหน่ายใหม่จากการที่ 2.5% และ% ประชาชน 97.5 ถูกนำมาใช้ในการสร้างช่วงเวลาที่เชื่อมั่น 95% สำหรับแต่ละระดับ ploidy (Efron และ Tibshirani, 1993)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นิวเคลียร์ดีเอ็นเอเนื้อหาการประเมินโดยใช้ BD facscalibur ( BD BIOSCIENCES , San Jose , CA ) การใช้โมโน . สองนาที เทคนิคของการโคลนเดิม ( ในวันที่แตกต่างกัน ) สำหรับพืชแต่ละชนิดใน 42 ปี F1 บุคคลและสายพันธุ์แท้สาย เป็นวัดเดียวคือใช้บุคคลอื่น ๆ พร้อมขยายใบเนื้อเยื่อส่วน 0.55 CM2 ถูกสับ 500 มิลลิลิตรการสกัดในบัฟเฟอร์ ( พาร์เท็ค cystain ปี่แอบโซลูท , P ) รองลงมา คือ การกรองผ่าน 50 ไมครอน ตาข่ายไนล่อน . กรองนิวเคลียสถูกย้อมด้วยสี 2 ml . propidium ไอโอไดด์สารละลาย ( พาร์เท็ค cystain ปี่แอบโซลูท , P ) เก็บรักษาที่อุณหภูมิ 4 องศา C และตรวจสอบภายใน 12 ชั่วโมง เตรียมตัว มาตรฐานทางการค้าของปลาเทราท์ในเม็ดเลือดแดง ( พาร์เท็ค ดีเอ็นเอควบคุม UV 25 ml ) เช่นเดียวกับมาตรฐานภายในจากรังฮา 89 ถูกใช้เพื่อคำนวณปริมาณดีเอ็นเอ อย่างน้อย 1000 นิวเคลียสถูกตรวจสอบสำหรับแต่ละตัวอย่าง ปริมาณดีเอ็นเอคำนวณโดยการใช้อัตราส่วนของความเข้มสูงสุดของแต่ละตัวอย่างที่รู้จักมาตรฐานแล้วคูณอัตราส่วนโดยพิโคกรัม ( PG ) ขนาดจีโนมของมาตรฐาน การ bc1f1 จำนวนลักษณะตรึงเนื้อเยื่อแห้ง ซึ่งมีการลดลงเมื่อเทียบกับเนื้อเยื่อสด ( โดลž El et al . , 2007 ) ตรึงแห้งตัวอย่างทำการสอบเทียบโดยการระบุความแตกต่างระหว่างเนื้อเยื่อสดและแช่แข็งแห้งของโคลนเดียวกันใน subsample 40 F1 บุคคล ขอบเขตการประเมินโดยการสร้างช่วงความเชื่อมั่น 95% รอบหมายถึงเนื้อหาของแต่ละกลุ่มประชากรและการเปรียบเทียบจีโนมเนื้อหาเป็นที่รู้จักคุณค่าในวรรณคดี ความเชื่อมั่นสร้าง 1000 ซ้ำจากการประจักษ์ที่บูทของแต่ละคน สั้น , ตัวอย่างสุ่มวาดแทน จากจีโนมขนาดในแต่ละประชากร การสร้างการกระจายใหม่ที่ 2.5% และ 97.5 % บุคคลถูกใช้เพื่อสร้างช่วงความเชื่อมั่น 95% สำหรับแต่ละระดับพีเอชพี ( แอฟรอนและ tibshirani , 1993 )