The Venus gene (V), IRES sequences

The Venus gene (V), IRES sequences (I) and the p19HA fusion gene (p19) used in this report were derived from the Venus-pTA7002GW (Fujioka et al. 2007), yy376 (Yamamoto et al. 2003) and pBICp19HA (Kurihara et al. 2007; Takeda et al. 2002) plasmids, respectively. The HAtagged abscisic acid receptor (HA-PYR1, P) sequence was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from an Arabidopsis cDNA library using the following primers: 5′ATC TAG ATG TAT CCA TAT GAT GTA CCA GAT TAT GCT ATG CCT TCG GAG TTA ACA CCA G-3′ and 5′-AAA AAA CTA GTT CAC GTC ACC TGA GAA CCA CTT CC
3′. The constructs depicted in Figure 1 were constructed by PCR amplification, restriction endonuclease digestion and ligation of selected fragments into a pSK1 vector (Kojima et al. 1999). To construct double-stranded Venus (dsVenus), a partial Venus fragment (256 nt) was amplified using the 5′-CAC CGC TGG ACG GCG ACG TAA ACG-3′ and 5′ACT AGT GTC CTT GAA GAA GAT GGT GC-3′ primers, subcloned into the pENTR/D-TOPO vector and then transferred into the pBI-sense, antisense Gateway vector (Nemoto et al. 2009) using LR clonase II (Invitrogen, Life Technologies, Tokyo, Japan).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ยีนวีนัส (V), ลำดับ IRES (I) และการ p19HA ฟิวชั่นยีน (p19) ใช้ในรายงานนี้ได้มาจากวีนัส-pTA7002GW (ฟูจิโอกะ et al. 2007), yy376 (ยามาโมโตะ et al. 2003) และ pBICp19HA (Kurihara et al. 2007 ทาเคดะ et al. 2002) plasmids ตามลำดับ ลำดับที่ตัวรับ (HA PYR1, P) กรดแอบไซซิก HAtagged ถูกขยาย โดยปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) จากห้องสมุด cDNA Arabidopsis การใช้ไพรเมอร์ดังต่อไปนี้: 5′ATC ป้าย ATG ตาด CCA ททท.แกทพ้อยท์ GTA CCA แกทพ้อยท์ตาด GCT ATG CCT TCG TTA ปิดปาก ACA CCA G-3′ และ 5′-AAA AAA CTA GTT CAC GTC บัญชี TGA เฒ่า CCA CTT CC3′ โครงสร้างที่แสดงในรูปที่ 1 ถูกสร้างขึ้น โดย PCR ขยาย ย่อยอาหาร endonuclease จำกัด และไข่ของชิ้นส่วนที่เลือกลงในเวกเตอร์ pSK1 (มะ et al. 1999) สร้างขนสองวีนัส (dsVenus), ส่วนวีนัสบางส่วน (256 nt) ถูกขยายโดยใช้การ 5′ CAC CGC TGG จีบ GCG จีบแหลมยายณีจีบ-3′ และ LR clonase II (Invitrogen ชีวิตเทคโนโลยีโดยใช้ไพรเมอร์ AGT GTC CTT เฒ่าเฒ่าแกทพ้อยท์ GGT GC-3′ 5′ACT, subcloned เป็นเวกเตอร์ pENTR/D-เดินแล้ว โอนเข้า pBI-ความรู้สึก เวกเตอร์เกตเวย์ antisense (Nemoto et al. 2009) โตเกียว ญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ยีนวีนัส (V) ลำดับ IRES (ฉัน) และยีนฟิวชั่น p19HA (P19) ที่ใช้ในรายงานฉบับนี้ได้มาจากดาวศุกร์-pTA7002GW (Fujioka et al. 2007) yy376 (ยามาโมโตะ et al. 2003) และ pBICp19HA ( Kurihara et al, 2007;.. ทาเคดะ et al, 2002) พลาสมิดตามลำดับ ตัวรับกรดแอบไซซิก HAtagged (HA-PYR1, P) ลำดับที่ได้รับการขยายโดยวิธี Polymerase chain reaction (PCR) จากห้องสมุด cDNA Arabidopsis ใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้: 5'ATC TAG ATG การท่องเที่ยวแห่งประเทศไทยททท CCA GAT GTA CCA GAT ทททจีซีทีซีซีที ATG TCG GAG TTA ACA CCA G-3 'และ 5'-AAA AAA CTA GTT CAC GTC แม็ก TGA GAA CCA CTT CC
3' โครงสร้างที่ปรากฎในรูปที่ 1 ถูกสร้างขึ้นโดยการขยาย PCR การย่อยอาหารและข้อ จำกัด endonuclease ligation ของชิ้นส่วนที่เลือกเป็นเวกเตอร์ pSK1 (ที่โคจิ et al. 1999) เพื่อสร้างวีนัสเกลียวคู่ (dsVenus) บางส่วนส่วนวีนัส (256 เอ็นที) ถูกขยายโดยใช้ 5'-CAC CGC TGG GCG ACG ACG ACG TAA-3 และ 5'ACT AGT GTC CTT GAA GAA GAT GGT GC-3 'ไพรเมอร์, subcloned เข้าไปใน pENTR / เวกเตอร์ D-TOPO และจากนั้นก็ย้ายเข้าไปใน pBI ความรู้สึก, antisense เกตเวย์เวกเตอร์ (Nemoto et al. 2009) โดยใช้ LR clonase ii (Invitrogen เทคโนโลยีชีวิตกรุงโตเกียวประเทศญี่ปุ่น)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ยีนดาวศุกร์ ( V ) IRES ลำดับ ( ฉัน ) และ p19ha ฟิวชั่นยีน ( p19 ) ใช้ในการรายงานครั้งนี้ ได้มาจาก venus-pta7002gw ( ฟุจิโอกะ et al . 2007 ) , yy376 ( Yamamoto et al . 2546 ) และ pbicp19ha ( คุริฮาระ et al . 2007 ; ทาเคดะ et al . ปี 2002 ) ) ตามลำดับ การ hatagged รีเซพเตอร์ ( ha-pyr1 กรด abscisic ,P ) ลำดับถูกขยายโดยวิธีพีซีอาร์ ( PCR ) จาก Arabidopsis cDNA ห้องสมุดโดยใช้ไพรเมอร์ต่อไปนี้ : 5 นั้น ททท. ททท. ATC แท็ก ATG CCA GAT GTA CCA GAT ททท. GCT ATG CCT TCG มุข TTA ACA CCA ได้รับ 3 และ 5 ’ - AAA AAA CTA gtt the GTC บัญชี TGA CCA ซีทีที CC
3 ได้รับกา . ที่สร้างขึ้นโดยแสดงในรูปที่ 1 โดยขยายการย่อยอาหารและเอนโดนิวคลีเอสจำกัด Ligation เลือกชิ้นส่วนใน psk1 เวกเตอร์ ( โคจิม่า et al . 1999 ) สร้างคู่ตกค้าง ดาวศุกร์ ( dsvenus ) ส่วน วีนัส บางส่วน ( 256 NT ) คือขยายโดยใช้ 5 ’ - CAC CGC tgg ACG gcg ACG ถ้า acg-3 MBC และ 5 นั้น GTC agt พระราชบัญญัติกา กาทั้งหลายทั่วโลกก่อน gc-3 ’ของไพรเมอร์ใน pentr / d-topo เวกเตอร์แล้วโอนเข้ามา pbi ความรู้สึกเวกเตอร์ประตู antisense ( nemoto et al . 2009 ) การใช้ LR clonase II ( Invitrogen , เทคโนโลยี , โตเกียว , ญี่ปุ่น ) .