Housing, Monitoring, and Sample Col

Housing, Monitoring, and Sample Collection
After challenge, pigs were inspected daily for signs of disease.

Study 1: Pigs were anesthetized on days 2, 4, 6, 8, 10, and 13 after exposure to REBOV and sampled for shed virus by deep nasal, throat, and rectal swabs, and blood was taken to monitor for viremia and antibody production. Urine was also collected from the floor of the pens to monitor for the presence of shed virus. Duplicate swabs were collected, with one placed in MagMax extraction buffer (Ambion) for RNA extraction and the other in phosphate-buffered saline containing 1% bovine serum albumin, 100 U penicillin G, and 100 μg streptomycin sulfate. This sample was stored at −80°C until processing for virus isolation. Blood samples were also collected on days 15, 17, 20, and day 28 when pigs were euthanized and tissues collected for real-time PCR analysis and virus isolation. At sampling times pigs were weighed and rectal temperatures recorded.

Study 2: Based on timelines determined from the outcome of study 1, pigs were similarly exposed to 106 TCID50 of REBOV and 2 animals from each group were euthanized on days 6 and 8 following either oronasal or subcutaneous challenge. At necropsy, an extensive range of tissues, swabs, and blood were collected for real-time PCR and virus isolation (including 10 sites in the lung reflecting proximal and distal areas of each lobe) and histology.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

อยู่อาศัย ตรวจสอบ และการเก็บตัวอย่างหลังจากที่ท้าทาย สุกรถูกตรวจสอบทุกวันสำหรับอาการของโรคศึกษาที่ 1: สุกรได้ด้วยในวันที่ 2, 4, 6, 8, 10 และ 13 หลังจาก REBOV และตัวอย่างไวรัสเกลียวลึกนาสิก คอ และทวารหนักสวับ และถ่ายเลือดในการตรวจสอบสำหรับการผลิตแอนติบอดีและ viremia ปัสสาวะยังถูกรวบรวมจากชั้นของปากกาเพื่อตรวจสอบการปรากฏตัวของไวรัสโรง สวับซ้ำถูกเก็บรวบรวม กับหนึ่งใส่ไว้ในบัฟเฟอร์สกัด MagMax (Ambion) สำหรับสกัด RNA และอื่น ๆ ในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่ มี 1% วัว serum albumin ยาเพนนิซิลลิน U 100 กรัม 100 μ streptomycin ซัลเฟต ตัวอย่างนี้ถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนถึงการประมวลผลสำหรับการแยกไวรัส ยังได้รวบรวมตัวอย่างเลือดในวันที่ 15, 17, 20 และวันที่ 28 เมื่อสุกรถูก euthanized และเนื้อเยื่อที่ถูกรวบรวมสำหรับเรียลไทม์ PCR ไวรัสและวิเคราะห์แยก สุ่มตัวอย่างครั้งสุกรมีน้ำหนัก และบันทึกอุณหภูมิทางทวารหนักการศึกษาที่ 2: ตามระยะเวลาที่กำหนดจากผลการศึกษา 1 สุกรได้ในทำนองเดียวกันสัมผัสกับ TCID50 106 ของ REBOV และสัตว์ 2 จากแต่ละกลุ่มถูก euthanized ในวันที่ 6 และ 8 ต่อ oronasal หรือท้าทายใต้ผิวหนัง ที่ necropsy เนื้อเยื่อ แผ่น และเลือดมากมายถูกเก็บรวบรวมแบบเรียลไทม์ PCR และไวรัส (รวมถึงไซต์ 10 สะท้อนพื้นที่ใกล้เคียง และปลายของแต่ละกลีบของปอด) แยกและมิญชวิทยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ที่อยู่อาศัยการตรวจสอบและเก็บตัวอย่าง
หลังจากการท้าทายหมูถูกตรวจสอบรายวันสำหรับอาการของโรค.

การศึกษาที่ 1: สุกรถูกยาสลบในวันที่ 2, 4, 6, 8, 10, และ 13 หลังจากที่สัมผัสกับ REBOV และตัวอย่างไวรัสเพิงโดยลึก จมูกลำคอและ swabs ทวารหนักและเลือดถูกนำตัวไปตรวจสอบ viremia และแอนติบอดีผลิต ปัสสาวะก็ยังเป็นที่เก็บรวบรวมจากพื้นของปากกาในการตรวจสอบการปรากฏตัวของไวรัสเพิง ซ้ำ swabs ถูกเก็บรวบรวมกับหนึ่งวางอยู่ใน MagMax สกัดบัฟเฟอร์ (Ambion) สำหรับการสกัดอาร์เอ็นเอและอื่น ๆ ในน้ำเกลือฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่มี 1% อัลบูมิวัวซีรั่ม 100 U penicillin G, และ 100 ไมโครกรัม streptomycin ซัลเฟต ตัวอย่างนี้ถูกเก็บไว้ที่ -80 องศาเซลเซียสจนการประมวลผลสำหรับการแยกเชื้อไวรัส ตัวอย่างเลือดยังถูกเก็บในวันที่ 15, 17, 20 และ 28 วันเมื่อสุกรถูกฆ่าเพื่อเก็บเนื้อเยื่อและเนื้อเยื่อที่เก็บไว้สำหรับการวิเคราะห์ PCR เวลาจริงและการแยกเชื้อไวรัส ในบางครั้งการสุ่มตัวอย่างสุกรถูกชั่งน้ำหนักและอุณหภูมิทางทวารหนักบันทึก.

การศึกษา 2: ขึ้นอยู่กับระยะเวลาที่กำหนดจากผลของการศึกษาที่ 1 หมูได้สัมผัสคล้ายกับ 106 TCID50 ของ REBOV และ 2 สัตว์จากแต่ละกลุ่มถูก euthanized ในวันที่ 6 และ 8 ต่อไปนี้อย่างใดอย่างหนึ่ง oronasal หรือท้าทายใต้ผิวหนัง ที่ชันสูตรหลากหลายของเนื้อเยื่อ swabs และเลือดที่เก็บไว้สำหรับ Real-time PCR และการแยกเชื้อไวรัส (รวม 10 เว็บไซต์ในปอดสะท้อนใกล้เคียงและพื้นที่ส่วนปลายของแต่ละกลีบ) และจุล

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบที่อยู่อาศัยและการเก็บตัวอย่างหลังจากที่ท้าทาย หมูถูกตรวจสอบทุกวัน สำหรับอาการของโรค1 : หมูถูกวางยาสลบในวันที่ 2 , 4 , 6 , 8 , 10 และ 13 หลังสัมผัสรีบอฟและเก็บตัวอย่างเพื่อหลั่งไวรัสโดยลึก จมูก คอ และลำตัว เลือดน้อย และถูกนำตัวไปตรวจสอบ viremia และการผลิตแอนติบอดี ปัสสาวะถูกเก็บจากพื้นของปากกาเพื่อตรวจสอบสถานะของการหลั่งไวรัส จากการเก็บรวบรวมซ้ำ กับหนึ่งอยู่ในบัฟเฟอร์ การสกัด magmax ( ambion ) สำหรับการสกัด DNA และอื่น ๆ ในบัฟเฟอร์ที่มีเกลือฟอสเฟต 1% อัลบูมิวัวเลือด 100 u penicillin G , และ 100 μกรัม สเตรปโตมัยซินซัลเฟต ตัวอย่างนี้จะถูกเก็บไว้ที่ 80 ° C −จนกว่าการประมวลผลสำหรับการแยกเชื้อไวรัส ตัวอย่างเลือดถูกเก็บในวันที่ 15 , 17 , 20 และ 28 วันเมื่อสุกร euthanized เนื้อเยื่อและรวบรวมเพื่อการวิเคราะห์ PCR แบบเรียลไทม์ และการแยกเชื้อไวรัส จำนวนครั้งที่ชั่งสุกรที่ทวารหนักอุณหภูมิบันทึกการศึกษาที่ 2 : ตามระยะเวลากำหนดจากผลการศึกษา 1 , สุกร และสัมผัสกับ 106 tcid50 รีบอฟและ 2 ของสัตว์แต่ละกลุ่มถูก euthanized ในวันที่ 6 และ 8 oronasal ต่อไปนี้อย่างใดอย่างหนึ่งหรือความท้าทาย และมีช่วงกว้างขวางของเนื้อเยื่อ swabs และเลือด ศึกษาด้าน PCR แบบเรียลไทม์ และไวรัสที่แยก ( รวม 10 เว็บไซต์ในปอดให้พื้นที่ใกล้เคียงและปลายของแต่ละกลีบ ) และขึ้นไป