2. Materials and methods2.1. Materi

2. Materials and methods
2.1. Materials

Porcine pancreatic lipase, p-NPB, morpholinepropanesulphonic acid, quercetin, colchicine and gallic acid were purchased from Sigma Aldrich. The fresh leaves of 28 plants were collected from Plant Genetic Conservation Forest, Ubon Ratchathani Rajabhat University, Ubonratchathani Province, Thailand. All plant species were identified and authenticated by Mr. Prakorb Boonma, Senior Plant Taxonomist, Ubon Ratchathani Rajabhat University, Thailand.

2.2. Preparation of plant extracts

The leaves were dried in hot air oven at 50 °C for 48 h and grounded into fine powder. A total of 50 g powder was extracted in 95% ethanol and concentrated at 55 °C in a rotary vacuum evaporator (Heidorf, Germany). The obtained extracts were stored at −20 °C until use.

2.3. Porcine pancreatic lipase inhibition assay

Lipase activity was measured using p-NPB as a substrate. The method was modified from the previously described by Kim et al. [17]. Briefly, an enzyme buffer was prepared by the addition 30 μL of solution of porcine pancreatic lipase (2.5 mg/mL in 10 mmol/L morpholinepropanesulphonic acid and 1 mmol/L ethylenediamine tetraacetic acid, pH 6.8) to 850 μL of Tris buffer (100 mmol/L Tris–HCl and 5 mmol/L CaCl2, pH 7.0). Then, either 100 μL of the plant extracts (100 μg/mL) or Orlistat was added and incubated for 15 min at 37 °C. Ten microliter of substrate (10 mmol/L p-NPB in dimethyl formamide) was then added and incubated for 30 min at 37 °C. Lipase activity was determined by measuring the hydrolysis of p-NPB to p-nitrophenol at 405 nm using an ELISA reader (Biochrome, England). The inhibitory activity (I) was calculated according to the following formula:

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1. วัสดุเอนไซม์ไลเปสช่วงที่ตับอ่อน p-NPB กรด morpholinepropanesulphonic, quercetin โคลชิซีน และกรด gallic ซื้อจาก Aldrich ซิก ใบสดของพืช 28 ถูกเก็บจาก ป่าอนุรักษ์พันธุพืช มหาวิทยาลัยราชภัฏอุบลราชธานี จังหวัดอุบลราชธานี ไทย ชนิดพืชทั้งหมดที่ระบุ และรับรองความถูกต้อง โดยนาย Prakorb บุญ อาวุโสโรง Taxonomist มหาวิทยาลัยราชภัฏอุบลราชธานี ไทย2.2 การเตรียมสารสกัดจากพืชใบไม้ที่แห้งในเตาอบอากาศร้อนที่ 50 ° C สำหรับ 48 h และสูตรเป็นผงดี จำนวน 50 กรัมผงสกัดใน 95% เอทานอล และเข้มข้นที่ 55 ° C ใน evaporator สิวโรตารี่ (Heidorf เยอรมนี) สารสกัดได้รับถูกเก็บไว้ที่ −20 ° C จนกว่าจะใช้2.3 ทดสอบการยับยั้งเอนไซม์ไลเปสช่วงที่ตับอ่อนกิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสถูกวัดโดยใช้ p NPB กับพื้นผิว มีการปรับเปลี่ยนวิธีการจากที่ก่อนหน้านี้อธิบายโดย Kim et al. [17] สั้น ๆ บัฟเฟอร์เอนไซม์ที่ถูกจัดทำ โดย μL เพิ่ม 30 ของโซลูชันของช่วงตับอ่อนเอนไซม์ไลเปส (2.5 mg/mL ใน 10 mmol/L morpholinepropanesulphonic กรดและกรด 1 mmol/L ethylenediamine tetraacetic, pH 6.8) เพื่อ μL 850 ของทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ (100 mmol/L ตรี – HCl และ 5 mmol/L CaCl2, pH 7.0) แล้ว 100 อย่างใดอย่างหนึ่ง μL ของสารสกัด (100 μg/mL) หรือ Orlistat เพิ่ม และ incubated สำหรับ 15 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส 10 ไมโครลิตรของพื้นผิว (10 mmol/L p-NPB ใน dimethyl formamide) แล้วเพิ่ม และ incubated ใน 30 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส กิจกรรมของเอนไซม์ไลเปสที่ตามวัดไฮโตรไลซ์ของ NPB p กับ p-nitrophenol ที่ 405 nm โดยใช้เครื่องอ่าน ELISA (Biochrome อังกฤษ) ลิปกลอสไขกิจกรรม (I) คำนวณตามสูตรต่อไปนี้:

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 วัสดุสุกรตับอ่อนเอนไซม์ไลเปส, p-NPB กรด morpholinepropanesulphonic, quercetin, โคลชิซินและกรดฝรั่งเศสที่ซื้อมาจากซิกม่าดิช ใบสด 28 พืชที่ถูกเก็บรวบรวมจากการอนุรักษ์พันธุกรรมพืชป่ามหาวิทยาลัยราชภัฏอุบลราชธานีอุบลราชธานีจังหวัด พันธุ์พืชทั้งหมดถูกระบุและรับรองความถูกต้องโดยนายบุญมา Prakorb โรงงานอาวุโส Taxonomist, มหาวิทยาลัยราชภัฏอุบลราชธานี, ไทย. 2.2 การเตรียมสารสกัดจากพืชใบแห้งในเตาอบลมร้อนที่ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงและมีเหตุผลเป็นผงดี จำนวน 50 กรัมผงสกัดเอทานอล 95% และความเข้มข้นที่ 55 ° C ในสูญญากาศเครื่องระเหยแบบหมุน (Heidorf, เยอรมนี) สารสกัดที่ได้มาเก็บไว้ที่ -20 ° C จนการใช้งาน. 2.3 การยับยั้งเอนไซม์ไลเปสตับอ่อนหมูทดสอบกิจกรรมเอนไซม์ไลเปสที่ถูกวัดโดยใช้ P-NPB เป็นสารตั้งต้น วิธีการที่ถูกปรับเปลี่ยนจากอธิบายไว้ก่อนหน้าโดยคิม et al, [17] สั้น ๆ , บัฟเฟอร์เอนไซม์ถูกจัดทำขึ้นโดยนอกจาก 30 ไมโครลิตรของการแก้ปัญหาของเอนไซม์ไลเปสตับอ่อนหมู (2.5 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรใน 10 มิลลิโมล / ลิตรกรด morpholinepropanesulphonic 1 มิลลิโมล / ลิตร ethylenediamine กรด tetraacetic ค่า pH 6.8) 850 ไมโครลิตรของบัฟเฟอร์ Tris (100 มิลลิโมล / ลิตร Tris-HCl และ 5 มิลลิโมล / ลิตร CaCl2 ค่า pH 7.0) จากนั้นทั้ง 100 ไมโครลิตรของสารสกัดจากพืช (100 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร) หรือ Orlistat ถูกบันทึกและบ่มเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส สิบไมโครลิตรของพื้นผิว (10 มิลลิโมล / ลิตรพี NPB ใน dimethyl formamide) ถูกเพิ่มเข้ามาแล้วและบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส กิจกรรมเอนไซม์ไลเปสที่ถูกกำหนดโดยการวัดการย่อยสลายของพี NPB เพื่อ-nitrophenol พีที่ 405 นาโนเมตรโดยใช้เครื่องอ่านวิธี ELISA (Biochrome อังกฤษ) กิจกรรมการยับยั้ง (I) ที่คำนวณตามสูตรต่อไปนี้: