Culturing and Preparing BacteriaUsi

Culturing and Preparing Bacteria

Using good aseptic culturing technique, grow cells in liquid culture or on agar plates until solid cultures are dense or liquid cultures are in early stationary phase. In practice, this would be equivalent of shaking a bacterial culture overnight or letting cells grow on a plate for 1-2 days. For agar cultures, growing cells on slants (glass tubes) may be more practical as it omits the centrifugation step below. However, liquid cultures normally yield a greater number of viable cells.

For liquid cultures, the cells are centrifuged, the culture broth is removed, and the pellet is suspended in an equal volume of lyophilization medium. We recommend Reagent 18 or the Microbial Freeze Drying Buffer, though skim milk and sucrose will work. For agar cultures, flood the plate/tube with 5-10 ml of lyophilization medium. Using a sterile pipette, flush the medium over the colonies to dislodge the cells. Transfer the cell suspension to a sterile tube. We recommend that a cell count is performed which can be compared to cells following freeze drying. A simple dilution to extinction protocol is available here.

Aliquot the cell suspension into sterile vials or tubes. Only 250-500 μl is needed per vial as this represents around 108 bacteria. Place split stoppers on the vials or loosely plug tubes with glass wool. Vials with split stoppers are technically open to the air, thus at risk of contamination. In practice we have not found this to be an issue. If a vial contains upwards of a billion bacteria, one or two contaminating microbes become insignificant when that culture is rehydrated and streaked. If there is fear of contamination, or containment, then glass wool or cotton can be placed under the stopper to prevent contamination.
Freeze Drying Process - Shelf Lyophilizer

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แบคทีเรียที่เพาะเลี้ยงและการจัดเตรียม

โดยใช้เทคนิคการเพาะเลี้ยงที่ดีปลอดเชื้อเติบโตเซลล์ในวัฒนธรรมของเหลวหรือบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อจนวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งวัฒนธรรมหนาแน่นหรือของเหลวอยู่ในเฟสแรก ในทางปฏิบัตินี้จะเทียบเท่ากับการสั่นวัฒนธรรมแบคทีเรียในชั่วข้ามคืนหรือจะปล่อยให้เซลล์เจริญเติบโตบนแผ่น 1-2 วัน วัฒนธรรมวุ้นเซลล์ที่เจริญเติบโตบน slants (หลอดแก้ว) อาจมีการปฏิบัติมากขึ้นเท่าที่จะละเว้นขั้นตอนการปั่นแยกด้านล่าง แต่วัฒนธรรมของเหลวปกติผลผลิตจำนวนมากของเซลล์ทำงานได้.

วัฒนธรรมของเหลวเซลล์จะปั่น, น้ำซุปวัฒนธรรมจะถูกลบออกและเม็ดถูกระงับในปริมาตรที่เท่ากันของสื่อ lyophilization เราขอแนะนำสาร 18 หรือบัฟเฟอร์การอบแห้งแช่แข็งของจุลินทรีย์แม้ว่านมพร่องมันเนยและน้ำตาลซูโครสจะทำงาน วัฒนธรรมวุ้นน้ำท่วมแผ่น / หลอด 5-10 มล. ของกลาง lyophilization โดยใช้ปิเปตผ่านการฆ่าเชื้อล้างกลางผ่านอาณานิคมที่จะทำให้หลุดจากเซลล์ โอนเซลล์แขวนลอยเพื่อหลอดปลอดเชื้อ เราขอแนะนำให้นับเซลล์จะดำเนินการที่สามารถนำมาเปรียบเทียบกับการแช่แข็งเซลล์ต่อไปนี้การอบแห้งการลดสัดส่วนที่ง่ายในการโปรโตคอลการสูญเสียสามารถใช้ได้ที่นี่.

หารเซลล์แขวนลอยลงในขวดผ่านการฆ่าเชื้อหรือท่อ เพียง 250-500 ไมโครลิตรเป็นสิ่งจำเป็นต่อขวดเช่นนี้แสดงให้เห็นถึงรอบ 108 แบคทีเรีย วาง Stoppers แยกบนขวดหรือหลวมเสียบหลอดด้วยใยแก้ว ขวดด้วย Stoppers แยกเป็นเทคนิคเปิดให้อากาศจึงมีความเสี่ยงของการปนเปื้อนในทางปฏิบัติเรายังไม่ได้พบนี้เป็นปัญหา ถ้าขวดมีมากกว่าพันล้านแบคทีเรียหนึ่งหรือสองปนเปื้อนเชื้อจุลินทรีย์ที่ไม่มีนัยสำคัญเมื่อกลายเป็นวัฒนธรรมที่มีการคืนรูปและลาย ถ้ามีความกลัวการปนเปื้อนหรือบรรจุแล้วใยแก้วหรือผ้าฝ้ายสามารถอยู่ภายใต้การปิดเพื่อป้องกันการปนเปื้อน
กระบวนการอบแห้งแช่แข็ง -. ชั้น lyophilizer

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Culturing และเตรียมแบคทีเรีย

ใช้เทคนิคเข้มข้น culturing ดี โตเซลล์ ในวัฒนธรรมของเหลว หรือแผ่น agar จนวัฒนธรรมที่เป็นของแข็งมีความหนาแน่นสูง หรือวัฒนธรรมของเหลวในระยะเริ่มต้นกับการ ในทางปฏิบัติ นี้จะเทียบเท่ากับการสั่นวัฒนธรรมแบคทีเรียเซลล์ค้างคืน หรือ letting เติบโตบนแผ่น 1-2 วัน สำหรับวัฒนธรรม agar เติบโตเซลล์บน slants (หลอดแก้ว) อาจจะมากจริงที่จะข้ามขั้นตอน centrifugation ด้านล่าง ผลอย่างไรก็ตาม วัฒนธรรมของเหลวปกติผลิตจำนวนของเซลล์ทำงานมากกว่า

สำหรับวัฒนธรรมของเหลว เซลล์มี centrifuged ซุปวัฒนธรรมจะถูกลบออก และเม็ดที่ถูกระงับในปริมาณเท่ากันของ lyophilization กลาง เราขอแนะนำ 18 รีเอเจนต์หรือจุลินทรีย์ตรึงแห้งบัฟเฟอร์ แม้ว่านม skim และซูโครสจะทำงาน สำหรับวัฒนธรรม agar น้ำท่วมแผ่น/หลอด มี 5-10 ml ของ lyophilization กลาง ใช้เปตต์กอซ ล้างสื่อผ่านอาณานิคมเพื่อไล่ออกเซลล์ โอนย้ายการระงับเซลล์ไปใส่หลอด เราขอแนะนำว่า จำนวนเซลล์จะทำซึ่งสามารถเปรียบเทียบกับเซลล์ที่ตรึงต่อการอบแห้ง เจือจางอย่างการดับโพรโทคอลได้มีที่นี่

ส่วนลงตัวระงับเซลล์ vials กระบอกหรือท่อ เพียง 250-500 μl เป็นสิ่งจำเป็นต่อคอนแทคนี้หมายถึงแบคทีเรียประมาณ 108 วางแบ่งจุกบน vials หรือต่อท่อ ด้วยเส้นใยแก้วซึ่ง Vials กับจุกแยกเทคนิคเปิดอากาศ ดังนั้นที่มีความเสี่ยงการปนเปื้อนได้ ในทางปฏิบัติ เราไม่พบนี้จะเป็นปัญหา ถ้าประกอบด้วยคอนแทคกับ upwards of พันล้านแบคทีเรีย จุลินทรีย์ contaminating หนึ่ง หรือสองเป็นสำคัญเมื่อว่า วัฒนธรรม rehydrated และลาย มีความกลัวปนเปื้อน หรือหาก ถ้าแก้วผ้าขนสัตว์หรือผ้าฝ้ายสามารถวางอยู่ใต้จุกเพื่อป้องกันการปนเปื้อน
กระบวนตรึงการแห้ง - Lyophilizer ชั้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เปรียบและการเตรียมตัวเชื้อ แบคทีเรีย

โดยใช้เทคนิคการเล่นที่ดีขึ้นเปรียบ aseptic เซลล์ในวัฒนธรรมของเหลวหรือในแผ่นความร้อนจนกว่าทางวัฒนธรรมที่แข็งแกร่งสาหร่ายทะเลมีความหนาแน่นสูงหรือของเหลววัฒนธรรมอยู่ในช่วงต้นหยุดนิ่งอยู่กับที่ ในการปฏิบัติแบบนี้จะได้รับวัฒนธรรมของการสั่นเกิดจากเชื้อแบคทีเรียที่พักค้างคืนหรือปล่อยให้เซลล์ขึ้นอยู่บนแผ่นสำหรับ 1-2 1-2 วัน สำหรับวัฒนธรรมสาหร่ายทะเลเซลล์ขึ้นอยู่บน slants (ท่อแก้ว)อาจจะมากขึ้นในทางปฏิบัติซึ่งความช่วยเหลือต่างๆยังคงถูกละเลยจากขั้นตอนที่ผลิตที่ด้านล่าง แต่ถึงอย่างไรก็ตามทางวัฒนธรรมผสมน้ำยาทำความสะอาดตามปกติให้ผลตอบแทนจำนวนมากของเซลล์ได้.

สำหรับผสมน้ำยาทำความสะอาดวัฒนธรรมเซลล์ที่มีน้ำซุป centrifuged วัฒนธรรมจะถูกลบออกไปและเม็ดที่ถูกพักชั่วคราวในปริมาณเท่ากับที่มีขนาดกลาง lyophilization เราขอแนะนำให้คุณยาซัด 18 หรือจุลินทรีย์ที่เป่าผมแห้งแช่แข็งบัฟเฟอร์แม้ว่านมพร่องและซูโครสจะทำงาน สำหรับวัฒนธรรมสาหร่ายทะเลน้ำท่วมแผ่น/ท่อดูดฝุ่นที่มี 5-10 5-10 5-10 มล.ขนาดกลาง lyophilization การใช้หลอดเล็กสำหรับดูดของเหลวฆ่าเชื้อขวดนมที่ติดตั้งแบบฝังขนาดกลางที่เหนืออาณานิคมที่เพื่อขจัดสิ่งสกปรกเซลล์ บริการรับส่งบริการข้อมูลของสถานีฐานระบบกันสะเทือนเข้ากับท่อดูดขวดนมปราศจากเชื้อได้ที่ เราขอแนะนำให้จำนวนเซลล์ที่จะดำเนินการซึ่งสามารถนำไปเปรียบเทียบกับเซลล์ต่อไปนี้แช่แข็งทำให้แห้งเจือจางแบบเรียบง่ายที่เป็นโปรโตคอลการสูญพันธุ์มีให้ที่นี่.

aliquot ระบบกันสะเทือนแบบเซลล์ที่เข้าไปในท่อดูดหรือ vials ฆ่าเชื้อขวดนม เฉพาะ 250-500 μl เป็นสิ่งจำเป็นต่อขวดเป็นแห่งนี้ประมาณ 108 แบคทีเรีย ที่แยกตัวยึดบนท่อเสียบปลั๊ก vials หรือแก้ผ้าขนสัตว์ที่พร้อมด้วยกระจก vials พร้อมด้วยตัวยึดแยกในทางเทคนิคเปิดให้บริการไปในอากาศทำให้ที่ความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนในทางปฏิบัติเราไม่พบนี้เพื่อจะเป็นปัญหาอย่างหนึ่ง หากขวดที่มีขึ้นในหนึ่งพันล้านแบคทีเรียหนึ่งหรือสองจุลชีพอาจไม่มีความหมายเมื่อกลายเป็นวัฒนธรรมที่มี rehydrated และลาย หากมีความกลัวของการปนเปื้อนหรือการปนเปื้อนในแล้วผ้าขนสัตว์กระจกหรือผ้าฝ้ายสามารถนำไปวางไว้ใต้จุกปิดเพื่อป้องกันไม่ให้สิ่งสกปรก.
แช่แข็งทำให้แห้งกระบวนการ - ชั้น lyophilizer