Figure 2. Inhibition of VEGFR-2 act

0/5000

จาก: -

เป็น: -

ผลลัพธ์ (ไทย) 1: [สำเนา]

คัดลอก!

Figure 2. Inhibition of VEGFR-2 activation activity of VEGF byEGCG is retained after removal of unbound polyphenol using adialysis membrane. HUVECs were treated for 5 min with preincubatedbasal medium containing 25 ng/mL VEGF, 25 ng/mLVEGF and 1 M EGCG, or samples prepared by dialysis (includingthe controls). For the dialysed samples, VEGF was incubatedwith or without EGCG for 30 min at room temperature prior todialysis for 2 or 24 h at 4C. The controls were incubated in thesame conditions without dialysis. The retentate was diluted inmedium to give a final concentration of 25 ng/mL VEGF and 1 MEGCG. Phosphorylated VEGFR-2 was determined by ELISA. *p <0.05, **p < 0.01, ***p < 0.001 compared to their stimulated cells,respectively. Data expressed as mean ± SD (n = 3).and non-reducing conditions as un-treated VEGF (SupportingInformation Fig. 1). This strongly suggests that covalentlylinked VEGF-polyphenol adduct(s) were not formed and thatbinding between VEGF and the two polyphenols was the resultof (strong) non-covalent binding. We also attempted todetermine if there were differences in the pI of polyphenoltreatedVEGF and un-treated VEGF but the high intrinsicpI of VEGF (pI = 8.0–8.5) [25] precluded us from visualisingVEGF or putative VEGF adducts on the gels, presumablybecause the VEGF migrated off the top (cathodic) edgeof the gels (data not shown). We also analysed VEGF andpolyphenol-treated VEGF using MALDI-TOF MS to try anddetect changes in the mass of VEGF after polyphenol treatment.However, the mass spectra obtained for VEGF andpolyphenol-treated VEGF were very similar and no modificationswere observed (data not shown). The lack of observed increasesin the mass of VEGF post-treatment with the polyphenolsis not consistent with the formation of covalent bondsbetween the VEGF and the polyphenols, and it likely indicatesthat the non-covalent binding involved in complex formationis disrupted during ionisation such that only massescorresponding with free VEGF are observed in the MALDITOFanalysis. The combination of results obtained fromSDS-PAGE and MALDI-TOF MS do not support the notionthat the binding between VEGF and polyphenol is due to a covalentinteraction. Bearing inmind that VEGF activity was notrecovered from polyphenol-treated VEGF samples followingdialysis, it ismost likely that the polyphenol-mediated inhibitionof VEGF is the result of strong non-covalent interactionsbetween VEGF and the polyphenols.3.3 Kinetics of inhibition of VEGF activity by EGCGand dp4In order to investigate the kinetics of VEGF inhibition by thepolyphenols, VEGF was incubated with EGCG (62.5 nM) ordp4 (200 nM) for extended periods of time (1–270 min and1–120 min, respectively) after which the VEGFR-2-activatingactivity of VEGF was determined by treating HUVECs withthe polyphenol-treated VEGF (5 min). The data clearly showsthat EGCG-mediated inhibition of VEGF activity is time dependent(Fig. 3A), which is not consistent with the very rapid(<1 s) time scales over which classic freely reversible enzymesubstratecomplex equilibria are formed. Further, the EGCGdata fitted very well to a two-phasemodel (two-phase decay) inwhich an initial fast exponential decay phase (KFast = 0.1184± 0.02 319 min−1) was followed by a slow exponential decayphase (KSlow = 0.003505 ± 0.0007308 min−1). Similar resultswere obtained with dp4 but with different rates (Fig. 3B).3.4 In-silico studies of the binding of EGCG and dp4to VEGFEGCG was predicted to bind into a groove at the pole ofVEGF (Fig. 4A) with a binding affinity of −8.1 kcal/mol. dp4was predicted to bind to a region of VEGF that is adjacentto the groove that EGCG is predicted to occupy (Fig. 4B),with an affinity of −8.2 kcal/mol.We also identified potentialresidues on VEGF that EGCG or dp4 may interact with basedon the predicted most energetically favourable binding sites(Table 1). EGCG was predicted to interact with 13 residues onboth subunits of VEGF and form hydrogen bonds with threeresidues (ASP34, LYS48 and SER50). dp4 was predicted tointeract with 15 residues of VEGF including five residues viahydrogen bonds (SER50, ASN62, ASP63, GLU64, GLU67,CYS68).3.5 Effect of polyphenols on VEGF binding toendothelial cellsThe inhibitory effects of the polyphenols on the VEGFR-2activity of VEGF may, or may not be, a consequence of thepolyphenol preventing binding of VEGF to VEGFR-2 on theendothelial cells. We explored the effects of the polyphenoltreatments of VEGF on its ability to bind to the surface ofHUVECs. Using flow cytometry, we show that dp4 treatment

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:[สำเนา]

คัดลอก!

รูปที่ 2 การยับยั้งของกิจกรรมการเปิดใช้งาน VEGFR-2 ของ VEGF โดย
EGCG จะยังคงอยู่หลังจากการกำจัดของโพลีฟีนไม่ได้ผูกไว้โดยใช้
เมมเบรนฟอกไต HUVECs ได้รับการรักษาเป็นเวลา 5 นาทีมี preincubated
ขนาดกลางที่มีฐาน 25 ng / VEGF 25 ng /
VEGF และ 1 M EGCG หรือตัวอย่างที่จัดทำโดยการฟอกเลือด (รวมทั้ง
การควบคุม) สำหรับตัวอย่างไต, VEGF ถูกบ่ม
ที่มีหรือไม่มี EGCG เป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิห้องก่อนที่จะมี
การฟอกไตสำหรับ 2 หรือ 24 ชั่วโมงที่ 4 องศาเซลเซียส การควบคุมถูกบ่มใน
สภาพเดียวกันโดยไม่ต้องฟอกไต retentate ถูกเจือจางใน
สื่อกลางในการให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 25 ng / VEGF และ 1 M
EGCG phosphorylated VEGFR-2 ถูกกำหนดโดยวิธี ELISA * p <
0.05, ** p <0.01, *** p <0.001 เมื่อเทียบกับการกระตุ้นเซลล์ของพวกเขา
ตามลำดับ ข้อมูลแสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD (n = 3).
และไม่ใช่การลดเงื่อนไขที่ VEGF ยกเลิกการรับการรักษา (สนับสนุน
ข้อมูลรูปที่ 1). นี้ขอแนะนำว่า covalently
ดึงเข้าหาเชื่อมโยง-VEGF โพลีฟีน (s) ที่ไม่ได้เกิดขึ้นและที่
มีผลผูกพันระหว่าง VEGF และทั้งสองโพลีฟีนเป็นผลมา
จาก (แข็งแกร่ง) ที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่มีผลผูกพัน นอกจากนี้เรายังพยายามที่จะ
ตรวจสอบว่ามีความแตกต่างใน pI ของ polyphenoltreated
VEGF และ VEGF ยกเลิกการรับการรักษา แต่ที่แท้จริงสูง
pI ของ VEGF (PI = 8.0-8.5) [25] จรรยาบรรณเราจากการแสดง
VEGF หรือ adducts VEGF สมมุติในเจล, สันนิษฐานว่าเป็น
เพราะ VEGF อพยพออกด้านบน (cathodic) ขอบ
ของเจล (ไม่ได้แสดงข้อมูล) นอกจากนี้เรายังวิเคราะห์ VEGF และ
โพลีฟีนได้รับการรักษาโดยใช้ MS VEGF MALDI-TOF ที่จะลองและ
ตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงในมวลของ VEGF หลังการรักษาโพลีฟีน.
อย่างไรก็ตามสเปกตรัมมวลได้รับสำหรับ VEGF และ
VEGF โพลีฟีนที่ได้รับมีความคล้ายคลึงกันมากและไม่มีการปรับเปลี่ยน
ถูกตั้งข้อสังเกต ( ไม่ได้แสดงข้อมูล) ขาดการสังเกตการเพิ่มขึ้น
ในมวลของ VEGF หลังการรักษาด้วยโพลีฟีน
ไม่สอดคล้องกับการก่อตัวของพันธะโควาเลน
ระหว่าง VEGF และโพลีฟีนและมีแนวโน้มที่แสดงให้เห็น
ว่าโควาเลนต์ที่ไม่ผูกพันที่เกี่ยวข้องในการสร้างที่ซับซ้อน
จะหยุดชะงักในช่วง Ionisation ดังกล่าวว่าฝูงเพียง
ที่สอดคล้องกับ VEGF ฟรีสังเกตใน MALDITOF
วิเคราะห์ การรวมกันของผลที่ได้รับจาก
ระบบ SDS-PAGE และ MALDI-TOF MS ไม่สนับสนุนความคิดที่
ว่ามีผลผูกพันระหว่าง VEGF และโพลีฟีนเป็นเพราะโควาเลนต์
การทำงานร่วมกัน แบริ่ง inmind VEGF กิจกรรมที่ไม่ได้
หายจากโพลีฟีนได้รับการรักษาตัวอย่างต่อไปนี้ VEGF
ล้างไตก็ ismost มีแนวโน้มว่าการยับยั้งโพลีฟีนสื่อ
ของ VEGF เป็นผลมาจากการมีปฏิสัมพันธ์ที่ไม่ใช่โควาเลนต์ที่แข็งแกร่ง
ระหว่าง VEGF และโพลีฟีน.
3.3 จลนศาสตร์การยับยั้งของกิจกรรม VEGF โดย EGCG
และ dp4
เพื่อที่จะตรวจสอบจลนศาสตร์การยับยั้ง VEGF โดย
โพลีฟีน VEGF ถูกบ่มด้วย EGCG (62.5 นาโนเมตร) หรือ
dp4 (200 นาโนเมตร) สำหรับการขยายระยะเวลา (นาที 1-270 และ
1-120 นาทีตามลำดับ) หลังจากที่ VEGFR-2-การเปิดใช้งาน
การทำงานของ VEGF ถูกกำหนดโดยการรักษา HUVECs กับ
VEGF โพลีฟีนได้รับการรักษา (5 นาที) ข้อมูลที่แสดงให้เห็นชัดเจน
ว่าการยับยั้ง EGCG สื่อของกิจกรรม VEGF เป็นเวลาที่ขึ้นอยู่กับ
(รูป. 3A) ซึ่งไม่สอดคล้องกับรวดเร็วมาก
(<1 s) เครื่องชั่งน้ำหนักในช่วงเวลาที่คลาสสิกย้อนกลับได้อย่างอิสระ enzymesubstrate
สมดุลที่ซับซ้อนที่เกิดขึ้น นอกจากนี้ EGCG
ข้อมูลที่ติดตั้งเป็นอย่างดีเพื่อสอง phasemodel (ผุสองเฟส) ใน
ที่เริ่มต้นขั้นตอนการสลายตัวได้อย่างรวดเร็วชี้แจง (KFast = 0.1184
± 0.02 319 นาที 1) ตามมาด้วยการสลายตัวช้าชี้แจง
ขั้นตอน (KSlow = 0.003505 ± 0.0007308 นาที 1) ผลที่คล้ายกัน
กับที่ได้รับ dp4 แต่มีอัตราที่แตกต่างกัน (รูป. 3B).
3.4 ใน silico ศึกษาผูกพันของ EGCG และ dp4
เพื่อ VEGF
EGCG เป็นที่คาดการณ์ในการผูกเข้าไปในร่องที่ขั้วของ
VEGF (รูป. 4A) ด้วย ความสัมพันธ์ผูกพันของ -8.1 kcal / mol dp4
ได้รับการคาดการณ์ว่าจะผูกกับพื้นที่ของ VEGF ที่อยู่ติดกัน
เพื่อร่อง EGCG ที่คาดว่าจะครอบครอง (รูป. 4B)
กับความสัมพันธ์ของ -8.2 กิโลแคลอรี / mol.We ยังระบุที่อาจเกิด
สารตกค้างใน VEGF ว่า EGCG หรืออาจ dp4 โต้ตอบกับตาม
ที่คาดการณ์ในที่สุดพลังที่ดีเว็บไซต์ที่มีผลผูกพัน
(ตารางที่ 1) EGCG เป็นที่คาดการณ์ในการโต้ตอบกับ 13 ตกค้างใน
หน่วยย่อยทั้งสอง VEGF และรูปแบบพันธะไฮโดรเจนกับสาม
ตกค้าง (ASP34, LYS48 และ SER50) dp4 ได้รับการคาดการณ์ว่าจะ
มีปฏิสัมพันธ์กับ 15 ตกค้างของ VEGF รวมถึงห้าตกค้างผ่าน
พันธะไฮโดรเจน (SER50, ASN62, ASP63, GLU64, GLU67,
CYS68).
3.5 ผลของโพลีฟีนใน VEGF ผูกพันกับ
endothelial เซลล์
ยับยั้งผลกระทบของโพลีฟีใน VEGFR- 2
กิจกรรมของ VEGF อาจหรือไม่อาจจะเป็นผลมาจาก
โพลีฟีนที่มีผลผูกพันของการป้องกันการ VEGF VEGFR-2 ใน
เซลล์บุผนังหลอดเลือด เราสำรวจผลกระทบของโพลีฟีน
การรักษาของ VEGF กับความสามารถในการผูกกับพื้นผิวของ
HUVECs ใช้โฟเราแสดงให้เห็นว่าการรักษา dp4

การแปล กรุณารอสักครู่..

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:[สำเนา]

คัดลอก!

รูปที่ 2 การยับยั้งกิจกรรมของการศึกษาโดยการกระตุ้น vegfr-2
EGCG ถูกเก็บไว้หลังจากการกำจัดหลุดระหว่างใช้
เยื่อกรอง . กลุ่มได้รับการรักษาเป็นเวลา 5 นาที preincubated
แรกเริ่มขนาดกลางที่มี 25 นาโนกรัม / มิลลิลิตรการศึกษา 25 นาโนกรัม / มิลลิลิตรการศึกษา
1 M EGCG หรือตัวอย่างที่เตรียมโดย Dialysis ( รวมทั้ง
การควบคุม ) สำหรับ dialysed ตัวอย่างการศึกษาคือบ่ม
มีหรือไม่มี EGCG ประมาณ 30 นาที ที่อุณหภูมิห้องก่อน
การล้างไต 2 หรือ 24 ชั่วโมงที่ 4 การควบคุม C )
เงื่อนไขเดียวกันโดยไม่ต้องฟอกไต การรีเทนเททเจือจางใน
ปานกลางเพื่อให้ความเข้มข้นสุดท้าย 25 นาโนกรัม / มิลลิลิตรการศึกษา 1 M
EGCG . ฟอสฟอรีเลเตต vegfr-2 ถูกกำหนดโดยวิธีอีไลซ่า *
* p < 0.05 , p < 0.01 และ * * * p < 0.05 เมื่อเทียบกับการกระตุ้นเซลล์
ตามลำดับข้อมูลที่แสดงเป็นค่าเฉลี่ย± SD ( n = 3 ) .
และไม่ลดเงื่อนไขตามที่สหประชาชาติถือว่าการศึกษา สนับสนุน
ข้อมูลรูปที่ 1 ) นี้ขอแนะนำว่า covalently
เชื่อมโยงการศึกษาต่อปุ่มตัวเลือก ( s ) ไม่เกิดขึ้น และที่
ผูกพันระหว่างการศึกษา และสอง โพลีฟีนอล ผล
( แข็งแรง ) ไม่การเข้าเล่ม เรายังพยายาม

ว่ามีความแตกต่างในส่วนของ polyphenoltreated
พิการศึกษาและการศึกษาและปฏิบัติ แต่ปี่แท้จริง
สูงของการศึกษา ( Pi = 8.0 ( 8.5 ) [ 25 ] ลบเราจากการแสดงผลการศึกษาหรือการศึกษาเกี่ยวกับการแสดงออก adducts

เจล , สันนิษฐาน เพราะการศึกษาอพยพออกด้านบน ( แคโทด ) ขอบ
ของเจล ( ข้อมูลไม่แสดง ) เรายังวิเคราะห์ปริมาณการใช้และการศึกษาการศึกษา
maldi-tof MS และพยายาม
ตรวจหาการเปลี่ยนแปลงในมวลของการศึกษาต่อหลังการรักษา .
อย่างไรก็ตามมวลจะมีค่าสำหรับการศึกษาต่อการศึกษาและปฏิบัติกัน

มาก และไม่มีการพบ ( ข้อมูลไม่แสดง ) การตรวจสอบเพิ่ม
ในมวลของการศึกษาหลังการรักษาด้วยโพลีฟีน
ไม่สอดคล้องกับการพัฒนาของพันธบัตรโควาเลนต์
ระหว่างการศึกษาและ โพลีฟีนอล และมันอาจบ่งชี้ว่าไม่มีการผูก
กับ
เชิงซ้อนคือการหยุดชะงักในระหว่าง ionisation ดังกล่าวที่สอดคล้องกับการศึกษาเพื่อมวลชน
ฟรีจะพบในการวิเคราะห์ malditof

การรวมกันของผลลัพธ์ที่ได้จาก
ถูก maldi-tof MS ไม่สนับสนุนความคิด
ที่ผูกพันระหว่างการศึกษาและโพลีฟีนเป็นเนื่องจากการปฏิสัมพันธ์การ

เรืองปกติ กิจกรรมการศึกษาที่ยังไม่หายจากการการศึกษาต่อ

ตัวอย่างต่อไปนี้ฟอกไต มัน ismost มีแนวโน้มว่า โพลีฟีนอล โดยการยับยั้ง
ของการศึกษาคือ ผลของการปฏิสัมพันธ์ระหว่างการศึกษาที่ไม่แข็งแรง

และ polyphenols 3.3 จลนศาสตร์ของการยับยั้งกิจกรรมการศึกษาโดย EGCG และ

dp4 เพื่อศึกษาจลนพลศาสตร์ของการศึกษาการยับยั้งโดย
โพลีฟีน , การศึกษาถูกบ่มด้วย EGCG ( 62.5 นาโนเมตร ) หรือ
dp4 ( 200 nm ) เป็นระยะเวลานานของเวลา ( 1 ) 270 นาที

การแปล กรุณารอสักครู่..

ภาษาอื่น ๆ

การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.