Cell Growth and Flow Microfluoromet

Cell Growth and Flow Microfluorometry
For growth measurements, cells were removed from cultures at timed intervals
and the samples were sonieated for 20 s to obtain single cells. Cell
counts were obtained using a ZM particle counter (Coulter Electronics,
Inc., Hialeah, FL). Generation times were estimated by a nonlinear least
squares fit to the exponential portion of the growth curve (24). Cell volume
distributions were collected using a C256 Channelizer pulse height analyzer
(Coulter Electronics, Inc.) connected to the ZM particle counter.
Cells for flow cytometry were fixed and stained with mithramycin as described
by Slater et al. (44). Histograms of relative fluorescence for DNA
content were collected using an EPICS fluorescence activated cell sorter
(Coulter Electronics, Inc.). The mithramycin was excited with the laser set
at 457-nm and 250-mW output. The histograms of DNA distribution were
analyzed using a nonlinear least squares fit to multiple Gaussian populations
(14). The data were modeled as four functions, one for each of the G1, S,
and G2 periods and a fourth for the small fraction of aggregated cells remaining
in the sample. The four Gaussian functions were constrained to
have a constant ratio of mean to standard deviation. The resulting lO-parameter
model was fit using a nonlinear curve fitting program (24).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เติบโตของเซลล์และการไหล Microfluorometryสำหรับการวัดการเจริญเติบโต เซลล์ถูกเอาออกจากวัฒนธรรมตามช่วงเวลาที่และตัวอย่าง sonieated สำหรับ 20 s รับเซลล์เดียว เซลล์รับตรวจนับโดยใช้เครื่องนับอนุภาค ZM (อิ Coulterอิงค์ เวสตัน FL) เวลาที่สร้างถูกประเมิน โดยน้อยไม่เชิงเส้นสี่เหลี่ยมให้พอดีกับส่วนของเส้นโค้งการเจริญเติบโต (24) เนน ปริมาณเซลล์การกระจายถูกเก็บรวบรวมโดยใช้ตัววิเคราะห์คำสูงชีพจร C256 Channelizer(Coulter อิ Inc.) เชื่อมต่อกับตัวนับอนุภาค ZMเซลล์สำหรับการตรวจวิเคราะห์เซลล์ไหลคงที่ และย้อมสี ด้วย mithramycin ตามที่อธิบายไว้โดยสเลเทอร์ et al. (44) ฮิสโตแกรมของสารเรืองแสงสัมพัทธ์สำหรับดีเอ็นเอเนื้อหาที่ถูกเก็บรวบรวมการคัดแยกเซลล์เรืองแสงที่เปิดใช้งานบทมหากาพย์โดยใช้(Coulter อิ Inc.) Mithramycin ที่ตื่นเต้นกับชุดเลเซอร์ที่ออก 457-nm และ 250 mW ฮิสโตแกรมของแจกดีเอ็นเอได้สี่เหลี่ยมอย่างน้อยการไม่เชิงเส้นการใช้วิเคราะห์กับประชากรนที่หลาย(14) . ข้อมูลถูกจำลองเป็นสี่ฟังก์ชัน หนึ่งสำหรับแต่ละของ G1, Sและระยะ G2 และสี่ส่วนขนาดเล็กรวมเซลล์ที่เหลือในตัวอย่าง นที่ปิดได้ถูกจำกัดมีอัตราส่วนคงหมายถึงการเบี่ยงเบนมาตรฐาน ผลหล่อ พารามิเตอร์แบบได้พอดีโดยใช้โปรแกรมติดตั้งไม่เชิงเส้นโค้ง (24)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เจริญเติบโตของเซลล์และการไหล Microfluorometry
สำหรับการวัดการเจริญเติบโตของเซลล์ที่ถูกถอดออกจากวัฒนธรรมในช่วงเวลาที่กำหนด
และตัวอย่างที่ถูก sonieated 20 วินาทีเพื่อให้ได้เซลล์เดียว มือถือ
ข้อหาที่ได้รับใช้เคาน์เตอร์ ZM อนุภาค (โคลเตอร์อิเล็กทรอนิกส์,
อิงค์ไฮอาลีอาห์, FL) ครั้งรุ่นที่ได้รับการประเมินโดยการไม่เชิงเส้นอย่างน้อย
สี่เหลี่ยมพอดีกับส่วนโค้งชี้แจงของการเจริญเติบโต (24) ปริมาณเซลล์
กระจายถูกเก็บโดยใช้การเต้นของชีพจรสูง C256 Channelizer วิเคราะห์
(โคลเตอร์ Electronics, Inc. ) เชื่อมต่อกับเคาน์เตอร์ ZM อนุภาค.
เซลล์ภูมิคุ้มกันไหลได้รับการแก้ไขและการย้อมด้วยสี mithramycin ตามที่อธิบายไว้
โดยตำหนิ et al, (44) Histograms เรืองแสงญาติดีเอ็นเอ
เนื้อหาที่ถูกเก็บรวบรวมใช้มหากาพย์การเรืองแสงตัวเรียงลำดับเซลล์เปิดใช้งาน
(โคลเตอร์ Electronics, Inc. ) mithramycin รู้สึกตื่นเต้นกับเลเซอร์ที่กำหนดไว้
ที่ 457 นาโนเมตรและ 250 เมกะวัตต์เอาท์พุท histograms ของการกระจายดีเอ็นเอถูก
วิเคราะห์โดยใช้การไม่เชิงเส้นสี่เหลี่ยมน้อยพอดีกับประชากรหลายแบบเกาส์
(14) ข้อมูลจำลองเป็นสี่หน้าที่หนึ่งสำหรับแต่ละ G1 ซึ่ง S,
และระยะเวลา G2 และสี่ส่วนเล็ก ๆ ของเซลล์ที่รวบรวมที่เหลือ
ในกลุ่มตัวอย่าง สี่หน้าที่เสียนถูกบีบบังคับให้
มีอัตราส่วนคงที่หมายถึงค่าเบี่ยงเบนมาตรฐาน ส่งผลให้ LO-พารามิเตอร์
โมเดลพอดีโดยใช้เส้นโค้งไม่เชิงเส้นโปรแกรมที่เหมาะสม (24)