The recombinant proteins were fresh

The recombinant proteins were freshly expressed and 5 mL cultures
were pelleted after 2 h post induction with IPTG. The cell
pellets were lysed as previously discussed and the fraction that
shows expression were run on SDS-PAGE and blotted onto a nitrocellulose
membrane. For Gal d 1 and Gal d 2, the soluble fraction
was used and for Gal d 3 and Gal d 4, the insoluble fraction was
used. This was done in duplicate, one to be used with allergic sera
and the other with non-allergic control sera. Another nitrocellulose
blot was prepared by immobilising the soluble and insoluble fractions
of E. coli extract (i.e. E. coli containing the vector without an
insert were IPTG induced for 2 h and soluble and insoluble fractions
were collected).
A pool of egg allergic patients’ sera was prepared by combining
50 L of patients 4, 5, 6 & 7 with 1800 L of blocking buffer. The
2 mL allergic patients’ serum pool was first pre-incubated with the
nitrocellulose membrane containing the appropriate E. coli extract
for 2 h at room temperature. Then one of the nitrocellulose membranes
with the recombinant proteins was incubated with the same
E. coli depleted serum pool overnight at 4 ◦C. The remaining recombinant
protein membranes was incubated in a pool of non-allergic
patients sera prepared by combining 50 L of 10 non-allergic serum
pool with1500 L blocking buffer.Allthe blots were thenincubated
with anti-human IgE (alkaline phosphatase conjugated) secondary
antibody produced in goat (1:1000), and detected using the chromogenic
substrate, as described above.
3.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โปรตีน recombinant ถูกแสดงสดและวัฒนธรรม 5 มล
ถูกเม็ดหลังจากที่โพสต์ 2 ชั่วโมงเหนี่ยวนำด้วย IPTG เซลล์
เม็ดถูก lysed ตามที่กล่าวไว้ก่อนหน้านี้และส่วนที่
แสดงให้เห็นถึงการแสดงออกที่ถูกเรียกใช้บนระบบ SDS-PAGE และเปื้อนบน nitrocellulose
เมมเบรน สำหรับสาว D ที่ 1 และ Gal D 2, ส่วนที่ละลายน้ำได้
ถูกนำมาใช้และ D 3 สาวและสาว D 4, ส่วนที่ไม่ละลายน้ำถูก
นำมาใช้ นี้ทำซ้ำกันอย่างใดอย่างหนึ่งที่จะใช้กับซีรั่มแพ้
และอื่น ๆ ที่มีซีรั่มควบคุมไม่แพ้ nitrocellulose อีก
blot ถูกจัดทำขึ้นโดยการตรึงเศษส่วนที่ละลายน้ำและไม่ละลายน้ำ
ของสารสกัดจากเชื้อ E. coli (เช่นเชื้อ E. coli มีเวกเตอร์โดยไม่ต้อง
แทรกถูกเหนี่ยวนำให้เกิด IPTG เป็นเวลา 2 ชั่วโมงและเศษส่วนที่ละลายน้ำและไม่ละลายน้ำ
ที่ถูกเก็บรวบรวม).
สระว่ายน้ำของผู้ป่วยที่แพ้ไข่ ' ซีรั่มถูกจัดทำขึ้นโดยการรวม
50 L ของผู้ป่วยที่ 4, 5, 6 และ 7 กับ 1,800 ลิตรปิดกั้นกันชน
สระว่ายน้ำ 2 เซรั่มมลผู้ป่วยที่แพ้ 'เป็นครั้งแรกก่อนการบ่มด้วย
เมมเบรนไนโตรเซลลูโลสที่มีสารสกัดจากเชื้อ E. coli ที่เหมาะสม
เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นหนึ่งในเยื่อ nitrocellulose
กับโปรตีนถูกบ่มด้วยเหมือนกัน
อี coli หมดลงสระว่ายน้ำในซีรั่มค้างคืนที่ 4 ◦C ส่วนที่เหลืออีก recombinant
เยื่อโปรตีนถูกบ่มในสระว่ายน้ำของการไม่แพ้
ซีรั่มผู้ป่วยที่จัดทำขึ้นโดยรวม 50 L 10 ไม่แพ้เซรั่ม
สระว่ายน้ำ with1500 L ปิดกั้น blots buffer.Allthe ถูก thenincubated
กับ Anti-Human IgE (ด่าง phosphatase ผัน) รอง
แอนติบอดีที่ผลิต ในแพะ (1: 1000) และตรวจพบโดยใช้การแยก
สารตั้งต้นที่อธิบายข้างต้น.
3

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โปรตีนโปรตีนที่ถูกแสดงวัฒนธรรมและสด 5 มล.เป็นเม็ด หลังจาก 2 ชั่วโมงกับโพสต์เหนี่ยวนำเข้ . เซลล์อัตรา lysed ตามที่กล่าวก่อนหน้านี้และส่วนที่แสดงสีหน้าได้วิ่งถูกลบลงไนโตรเยื่อแผ่น สำหรับสาวสาว D D ที่ 1 และ 2 ส่วนที่ละลายได้และใช้สำหรับสาวสาว D 4 D 3 และ สัดส่วนที่ไม่ละลายน้ำคือใช้ ทำในที่ซ้ำกัน , หนึ่งจะใช้กับแพ้เซราและอื่น ๆ กับเซราควบคุมแพ้ไม่ ไนโตรอีกเพื่อเตรียม immobilising เศษส่วนและละลายไม่ละลายน้ำของ E . coli สกัด ( เช่น E . coli ที่มีเวกเตอร์โดยไม่มีมีโปรตีนแทรก ) 2 ชั่วโมงและละลายไม่ละลายและเศษส่วนการเก็บรวบรวม )สระว่ายน้ำของเซราไข่ผู้ป่วยแพ้ " เตรียมโดยรวม50 ลิตรผู้ป่วย 4 , 5 , 6 และ 7 กับ 1800 ลิตรบล็อกบัฟเฟอร์ ที่2 ml ซีรั่มผู้ป่วยแพ้ " พูลเป็นครั้งแรกก่อนบ่มด้วยไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนที่มีเชื้อ อีโคไล สารสกัดที่เหมาะสม2 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง จากนั้นหนึ่งของไนโตรเซลลูโลสเมมเบรนด้วยโปรตีนรีคอมบิแนนท์บ่มด้วยเช่นเดียวกันE . coli หมด เซรั่ม พูล ค้างคืนที่ 4 ◦ C ที่เหลือใช้เมมเบรนโปรตีนถูกบ่มในสระว่ายน้ำที่ไม่แพ้วิธีผู้ป่วยเตรียมโดยรวม 50 ลิตร 10 ไม่ใช่แพ้เซรุ่มสระว่ายน้ำ with1500 ผมบล็อกมาจาก thenincubated blots เป็นบัฟเฟอร์กับ IgE ต่อต้านมนุษย์ ( อัลคาไลน์ ฟอสฟาเตส conjugated ) มัธยมศึกษาแอนติบอดีที่ผลิตในแพะ ( 000 ) และตรวจพบโดยใช้การสนทนาผ่านข้อความโต้ตอบแบบทันที( ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น3 .