DNA for Southern hybridization was

DNA for Southern hybridization was isolated from leaves of in
vitro-grown plants using the method of Dellaporta et al. (1983).
Undigested DNA (10 μg) and DNA digested with either EcoRI or
PstI were electrophoresed on a 0.7% (w/v) agarose (BioRad,
Richmond, Calif.) gel in TBE (89 mM Tris-borate, 89 mM boric
acid, 2 mM EDTA, pH 8) buffer at 75 V, 50 mA for »4 h. Following
electrophoresis, the DNA was transferred by capillary movement
ova-night to Nytran nylon membrane (Schleicher and Schuell,
Keene, N. Y.) (Maniatis et al., 1982). The probe used for hybridization
was p35SAc digested with SalI followed by gel purification
and labeled by random primer [a- 32P] dCTP using the Megaprime
Kit (Amersham, Arlington Heights, Ill.). Blots were incubated in
prehybridization buffer for 2 h at 42C followed by hybridization
buffer and probe at 60C for 16 h (Maniatis et al., 1982). Three
washes in 6x SSC, 1% SDS for 5 min each at 26C, two washes in
lx SSC, 1% SDS for 1 min each at 65C, and two washes in 2x SSC
for 5 min each at 26C were done before exposure of the blot at –
70C with an intensifying screen.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

DNA hybridization ใต้ถูกแยกจากใบของในหลอดทดลองที่มีปลูกพืชโดยใช้วิธีของ Dellaporta et al. (1983)ไม่ได้แยกแยะดีเอ็นเอ (10 μ) และดีเอ็นเอที่ถูกย่อย ด้วย EcoRI อย่างใดอย่างหนึ่ง หรือPstI มี electrophoresed บน agarose มี 0.7% (w/v) (BioRadริชมอนด์ มลรัฐแคลิฟอร์เนีย) ใน TBE (89 มม.ทริสเรทติ้ง borate, boric 89 มม.กรด EDTA 2 มม. pH 8) บัฟเฟอร์ที่ 75 V, 50 mA สำหรับ» 4 h. ต่อไปนี้อิ ดีเอ็นเอถูกถ่ายโอน โดยฝอยการเคลื่อนไหวova-คืนไป Nytran เมมเบรนไนลอน (Schleicher และ Schuellเคนน์ N. Y) (Maniatis et al. 1982) โพรบที่ใช้สำหรับการ hybridizationp35SAc ถูกย่อย ด้วยสลี่ตาม ด้วยเจลทำให้บริสุทธิ์และติดป้าย ด้วยไพร์เมอร์แบบสุ่ม [มี - 32 P] dCTP ใช้ Megaprimeชุด (Amersham อาร์ลิงตันไฮทส์ Ill.) จัดได้รับการกกในprehybridization บัฟเฟอร์สำหรับ 2h ที่ 42C ตาม ด้วย hybridizationบัฟเฟอร์และสอบสวนที่ 60C สำหรับ 16 ชม. (Maniatis et al. 1982) สามล้างใน 6 x 1% SDS ราคาชิ้นละ 5 นาทีที่ 26C ล้างสองใน SSClx SSC, 1% SDS ราคาชิ้นละ 1 นาทีที่ 65C และล้างสองใน 2 x SSC5 นาที แต่ละที่ 26C ทำก่อนรับของน้า–C 70 พร้อมจอภาพ intensifying

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ดีเอ็นเอสำหรับการผสมพันธุ์ภาคใต้ที่แยกได้จากใบใน
พืชที่ปลูกในหลอดทดลองใช้วิธีการ Dellaporta et al, (1983).
ที่ไม่สามารถย่อยดีเอ็นเอ (10 g) และ DNA ย่อยมีทั้ง EcoRI หรือ
PstI ถูก electrophoresed บน 0.7% (w / v) agarose (BioRad,
ริชมอนด์, Calif.) เจลใน TBE (89 mM Tris-borate 89 มิลลิ บอริก
กรด 2 mm EDTA, ค่า pH 8) บัฟเฟอร์ที่ 75 V, 50 mA สำหรับ» 4 ชั่วโมง ต่อไปนี้
electrophoresis, ดีเอ็นเอถูกย้ายโดยการเคลื่อนไหวของเส้นเลือดฝอย
ไข่คืนเยื่อไนลอน Nytran (Schleicher และ Schuell,
คีน, นิวยอร์ก) (Maniatis et al., 1982) การสอบสวนที่ใช้ในการผสมพันธุ์
เป็น p35SAc ย่อยด้วยสาลี่ตามด้วยเจลฟอก
และโดดเด่นด้วยไพรเมอร์แบบสุ่ม [A- 32P] dCTP ใช้ Megaprime
Kit (Amersham อาร์ลิงตันไฮทส์, Ill.) blots ถูกบ่มใน
บัฟเฟอร์ prehybridization เป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 42C ตามด้วยการผสมข้ามพันธุ์
บัฟเฟอร์และสอบสวนที่ 60C เป็นเวลา 16 ชั่วโมง (Maniatis et al., 1982) สาม
ล้างใน 6x SSC, 1% SDS เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละที่ 26C สองล้างใน
LX SSC, 1% SDS เป็นเวลา 1 นาทีในแต่ละที่ 65C และสองล้างใน 2x SSC
เป็นเวลา 5 นาทีในแต่ละที่ 26C ถูกทำมาก่อนการสัมผัสของ หยดที่ -
70C พร้อมกับหน้าจอที่ทวีความรุนแรง