- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Experimental methodologyRice branRi
Experimental methodology
Rice bran
Rice bran was packed in polypropylene bags of 5 kg, being kept at the temperature of -10 ºC, until the moment of its use in the fermentative process. Its granulometry was standardized between 0.35 and 0.70 mm, using an electromagnetic agitator (Bertel) of 60 Hz, equipped with sieves of different meshes.
Fermentative process
Fermentation was carried out in tray bioreactors, with dimensions of 29 x 17 x 5.5 cm3.The rice bran substratum (100 g) was placed in bioreactors, in the form of a fine layer of ~2 cm, after the substratum homogenization with 45 mL of the saline solution (KH2PO4 2 g.L-1, MgSO4 1 g.L-1, NH2CONH2 1.8 g.L-1 in HCl 0.4 M). Bran initial spores concentration was 4.0x106 spores g-1 (Badiale-Furlong et al., 2007). According to Hasan et al. (1998), the moisture was adjusted to 50% with sterilized water addition and trays were covered with sterilized gauze to allow aeration, before being incubated at 30 ºC for 120 h. To carry out physico-chemical characterization, samples were withdrawn at the beginning of the process and each 24 h, being stored at -18 ºC.
Lipid extraction
Rice bran sample with a particle size between 0.35 and 0.7 mm was subjected to two extraction methods: Soxhlet (AOAC, 2000) and Folch et al. (1957). The first followed official recommendations while the latter was performed with adjustments, which are the sample (5 g) was stirred in ultrasonic bath for 5 min with 25 mL of 2:1 chloroform: methanol solution and centrifuged for 10 min. The supernatant was separated and the extraction process was repeated 2 more times by shaking. The supernatants were filtered, the filter paper washed with 10 mL of reagent and transferred to a separatory funnel. A quarter of 0.88% KCl of the extract volume was added followed by manual shaking. The lower phase was collected and homogenized again with ¼ of its volume with a 2:1 methanol: water solution. The organic phase was filtered through anhydrous sodium sulfate and dried in flat-bottomed flask in rotatory evaporator (70 °C). The residue was taken to the oven for 2 h at 50 °C.
Phospholipids assessment
First of all, a calibration curve to determine phospholipids was prepared according to Badiale-Furlong et al. (2006). Phosphor stock solution of 50 mg P.mL-1 (0.2195 g potassium dihydrogen phosphate, previously dried for 1h/100 ºC, then diluted in water and completed to 1 L) was diluted into a working solution of 5 mg P.mL-1. From the last solution, aliquots of 2, 5, 7, 10, 15, 20 and 25 mL were transferred to 100 mL volumetric balloons each. In these balloons, 20 mL sodium molybdate solution were added, being the volume completed with distilled water to 100 mL. These mixtures were heated for 30 min in a water bath at 90 °C followed by ice bath cooling. Absorbance readings of blank and standard solutions were determined at 800 nm in UV-Visible spectrophotometer (Varian, Cary 100), using 1 cm cuvettes.
To determine phospholipids in the samples, lipids extracted from fermented and not fermented rice bran by Folch et al. (1957) method were weighed between 0.3 and 1.0 g in a porcelain dish, covered with 0.75 g of MgO and taken to oven (110 °C) until the sample was completely absorbed by MgO. The residual was incinerated in the flame and then in the oven at 800 °C for 20 min. Ashes were dissolved in 40 mL of water and 20 mL of 2 N sulfuric acid, then stirred until MgO was dissolved. The mixtures were transferred to 100 mL volumetric balloons and the volume completed to 100 mL with water, constituting the analytical solutions.
Aliquots from the analytical solutions were transferred to 100 mL volumetric balloons, according to the required dilution of the sample. Dilutions of 4, 5, 12.5, 25 and 50 times were achieved with 25, 20, 8, 4 and 2 mL of the respective analytical solutions. Each balloon was added of 20 mL molybdate solution and the volume completed with distilled water, being the mixture heated at 90 °C for 30 min. For blank determination, 20 mL molybdate solution were added, besides 0.75 g MgO, 20 mL 2 N sulfuric acid, and the volume completed to 100 mL with distilled water. The units of absorbance at 800 nm were determined in the same equipment as the standards.
The recovery was tested by adding 1.2, 2.4 and 4.8 mg of KH2PO4 to three standard samples of lipids extracted from rice bran. The limit of detection was measured from the reading of 6 blank samples prepared by the same procedure as described for phospholipids. The standard deviation of the blank absorbance multiplied by three was used to estimate the minimum concentration to be detected using the standard curve (Badiale-Furlong et al., 2006).
Fatty acid profile
Bran lipid fraction extracted by Folch et al. (1957) method was subjected to gas chromatography (GC) for fatty acids separation. Lipids were esterified by Metcalfe et al. (1966) adapted method, which consisted in lipid saponification with 0.5 N KOH methanolic solution, under reflux during 15 min. After cooling, esterification reaction with methanol was catalized by BF3 solution (15 mL of 20% BF3 diluted in methanol 1:1) and refluxed for 7 min. Afterward, 15 mL of petroleum ether and 15 mL of saturated saline solution were added. The ether layer was collected and the process repeated twice with 25 mL of petroleum ether. The organic phase was washed twice with 25 mL of distilled water, then filtered in anhydrous sodium sulfate. The solvent was evaporated under nitrogen stream and the residue solubilized by 10 mL hexane for GC analyses.
To separate and quantify the esterified fatty acid mixture, a gas chromatograph was used (Varian Star Chromatograph 3400CX, Palo Alto, CA, USA), equipped with split/splitless injector and FID detector. The separation occurred in polyethyleneglycol capillary column (ZB-WAX 30 m x 0.32 mm) and film thickness of 0.25 µm (Zebron, USA). STAR software was used to analyze data. Hydrogen was the carrier gas at a flow of 1 mL.min-1, while nitrogen was the make-up gas at 30 mL.min-1. The injector and detector temperatures were set to 250 °C and 300 °C, respectively, being 1 µL the injected volume. The chromatographic conditions for separation were as follows: column initial temperature of 40 ºC, raising to 100 ºC at a flow rate of 6 °C.min-1, holding during 1 min at this temperature. The second step consisted in raising the temperature from 100 to 160 ºC (holding for 5 min) and finally the last was increased to 230 ºC for 10 min, being both steps with the same flow rate (6 °C.min-1). Peaks were identified by comparing the retention times with methyl esther standards (Sigma-Aldrich).
Rice bran
Rice bran was packed in polypropylene bags of 5 kg, being kept at the temperature of -10 ºC, until the moment of its use in the fermentative process. Its granulometry was standardized between 0.35 and 0.70 mm, using an electromagnetic agitator (Bertel) of 60 Hz, equipped with sieves of different meshes.
Fermentative process
Fermentation was carried out in tray bioreactors, with dimensions of 29 x 17 x 5.5 cm3.The rice bran substratum (100 g) was placed in bioreactors, in the form of a fine layer of ~2 cm, after the substratum homogenization with 45 mL of the saline solution (KH2PO4 2 g.L-1, MgSO4 1 g.L-1, NH2CONH2 1.8 g.L-1 in HCl 0.4 M). Bran initial spores concentration was 4.0x106 spores g-1 (Badiale-Furlong et al., 2007). According to Hasan et al. (1998), the moisture was adjusted to 50% with sterilized water addition and trays were covered with sterilized gauze to allow aeration, before being incubated at 30 ºC for 120 h. To carry out physico-chemical characterization, samples were withdrawn at the beginning of the process and each 24 h, being stored at -18 ºC.
Lipid extraction
Rice bran sample with a particle size between 0.35 and 0.7 mm was subjected to two extraction methods: Soxhlet (AOAC, 2000) and Folch et al. (1957). The first followed official recommendations while the latter was performed with adjustments, which are the sample (5 g) was stirred in ultrasonic bath for 5 min with 25 mL of 2:1 chloroform: methanol solution and centrifuged for 10 min. The supernatant was separated and the extraction process was repeated 2 more times by shaking. The supernatants were filtered, the filter paper washed with 10 mL of reagent and transferred to a separatory funnel. A quarter of 0.88% KCl of the extract volume was added followed by manual shaking. The lower phase was collected and homogenized again with ¼ of its volume with a 2:1 methanol: water solution. The organic phase was filtered through anhydrous sodium sulfate and dried in flat-bottomed flask in rotatory evaporator (70 °C). The residue was taken to the oven for 2 h at 50 °C.
Phospholipids assessment
First of all, a calibration curve to determine phospholipids was prepared according to Badiale-Furlong et al. (2006). Phosphor stock solution of 50 mg P.mL-1 (0.2195 g potassium dihydrogen phosphate, previously dried for 1h/100 ºC, then diluted in water and completed to 1 L) was diluted into a working solution of 5 mg P.mL-1. From the last solution, aliquots of 2, 5, 7, 10, 15, 20 and 25 mL were transferred to 100 mL volumetric balloons each. In these balloons, 20 mL sodium molybdate solution were added, being the volume completed with distilled water to 100 mL. These mixtures were heated for 30 min in a water bath at 90 °C followed by ice bath cooling. Absorbance readings of blank and standard solutions were determined at 800 nm in UV-Visible spectrophotometer (Varian, Cary 100), using 1 cm cuvettes.
To determine phospholipids in the samples, lipids extracted from fermented and not fermented rice bran by Folch et al. (1957) method were weighed between 0.3 and 1.0 g in a porcelain dish, covered with 0.75 g of MgO and taken to oven (110 °C) until the sample was completely absorbed by MgO. The residual was incinerated in the flame and then in the oven at 800 °C for 20 min. Ashes were dissolved in 40 mL of water and 20 mL of 2 N sulfuric acid, then stirred until MgO was dissolved. The mixtures were transferred to 100 mL volumetric balloons and the volume completed to 100 mL with water, constituting the analytical solutions.
Aliquots from the analytical solutions were transferred to 100 mL volumetric balloons, according to the required dilution of the sample. Dilutions of 4, 5, 12.5, 25 and 50 times were achieved with 25, 20, 8, 4 and 2 mL of the respective analytical solutions. Each balloon was added of 20 mL molybdate solution and the volume completed with distilled water, being the mixture heated at 90 °C for 30 min. For blank determination, 20 mL molybdate solution were added, besides 0.75 g MgO, 20 mL 2 N sulfuric acid, and the volume completed to 100 mL with distilled water. The units of absorbance at 800 nm were determined in the same equipment as the standards.
The recovery was tested by adding 1.2, 2.4 and 4.8 mg of KH2PO4 to three standard samples of lipids extracted from rice bran. The limit of detection was measured from the reading of 6 blank samples prepared by the same procedure as described for phospholipids. The standard deviation of the blank absorbance multiplied by three was used to estimate the minimum concentration to be detected using the standard curve (Badiale-Furlong et al., 2006).
Fatty acid profile
Bran lipid fraction extracted by Folch et al. (1957) method was subjected to gas chromatography (GC) for fatty acids separation. Lipids were esterified by Metcalfe et al. (1966) adapted method, which consisted in lipid saponification with 0.5 N KOH methanolic solution, under reflux during 15 min. After cooling, esterification reaction with methanol was catalized by BF3 solution (15 mL of 20% BF3 diluted in methanol 1:1) and refluxed for 7 min. Afterward, 15 mL of petroleum ether and 15 mL of saturated saline solution were added. The ether layer was collected and the process repeated twice with 25 mL of petroleum ether. The organic phase was washed twice with 25 mL of distilled water, then filtered in anhydrous sodium sulfate. The solvent was evaporated under nitrogen stream and the residue solubilized by 10 mL hexane for GC analyses.
To separate and quantify the esterified fatty acid mixture, a gas chromatograph was used (Varian Star Chromatograph 3400CX, Palo Alto, CA, USA), equipped with split/splitless injector and FID detector. The separation occurred in polyethyleneglycol capillary column (ZB-WAX 30 m x 0.32 mm) and film thickness of 0.25 µm (Zebron, USA). STAR software was used to analyze data. Hydrogen was the carrier gas at a flow of 1 mL.min-1, while nitrogen was the make-up gas at 30 mL.min-1. The injector and detector temperatures were set to 250 °C and 300 °C, respectively, being 1 µL the injected volume. The chromatographic conditions for separation were as follows: column initial temperature of 40 ºC, raising to 100 ºC at a flow rate of 6 °C.min-1, holding during 1 min at this temperature. The second step consisted in raising the temperature from 100 to 160 ºC (holding for 5 min) and finally the last was increased to 230 ºC for 10 min, being both steps with the same flow rate (6 °C.min-1). Peaks were identified by comparing the retention times with methyl esther standards (Sigma-Aldrich).
0/5000
วิธีการทดลองรำข้าวรำข้าวที่บรรจุในถุง 5 กก. อายุการเก็บรักษาที่อุณหภูมิ-10 ºC จนถึงเวลาที่ใช้ในกระบวนการ fermentative polypropylene Granulometry เป็นมาตรฐานระหว่าง 0.35 0.70 มม. ใช้ agitator การไฟฟ้า (Bertel) ของ 60 Hz, sieves ตาข่ายต่าง ๆ ครบครันกระบวนการ fermentativeหมักถูกดำเนินในถาด bioreactors มีขนาด 29 x 17 x 5.5 cm3ฐานในรำข้าว (100 กรัม) ถูกวางไว้ใน bioreactors ในรูปแบบของชั้นดีของ ~ 2 ซม. หลัง homogenization ฐานกับ 45 mL ของเกลือ (KH2PO4 2 g.L-1, MgSO4 1 g.L-1, NH2CONH2 1.8 g.L-1 ใน HCl 0.4 M) ความเข้มข้นเริ่มต้นเพาะเฟิร์นรำ 4.0x106 เพาะเฟิร์น g-1 (เฟอร์ลอง Badiale et al., 2007) ได้ ตามฮะ et al. (1998), มีการปรับปรุงความชื้น 50% บวก sterilized น้ำ และถาดถูกปกคลุม ด้วยตาข่าย sterilized ให้ aeration ก่อนที่จะถูก incubated ที่ 30 ºC สำหรับ 120 h การดำเนินการจำแนกดิออร์ ตัวอย่างถูกถอนที่จุดเริ่มต้นของกระบวนการและแต่ละ 24 ชม มีการเก็บที่-18 ºCสกัดไขมันตัวอย่างการรำข้าว มีขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 0.7 มม.ถูกยัดเยียดให้สองวิธีสกัด: Soxhlet (AOAC, 2000) และ Folch et al. (1957) ครั้งแรกไปมาแล้วทางคำแนะนำขณะหลังทำ มีการปรับปรุง ซึ่งเป็นตัวอย่าง (5 กรัม) เป็นกวนในอ่างอัลตราโซนิคสำหรับ 5 นาทีกับ 25 mL ของคลอโรฟอร์ม 2:1: เมทานอลโซลูชั่น และ centrifuged สำหรับ 10 นาที Supernatant ถูกแยก และกระบวนการสกัดได้ซ้ำ 2 ครั้ง โดยการสั่น Supernatants แบบมีกรอง กระดาษกรองล้าง ด้วย 10 mL ของรีเอเจนต์ และโอนย้ายไปยังปล่อง separatory ไตรมาสของ 0.88% KCl ของปริมาณสารสกัดที่เพิ่มตามสั่นด้วยตนเอง ระยะล่างถูกรวบรวม และอีก homogenized เป็นกลุ่มกับ¼ของปริมาณด้วยเมทานอล 2:1: น้ำโซลูชัน ระยะอินทรีย์กรองผ่านไดโซเดียมซัลเฟต และแห้งในหนาว flat-bottomed ใน rotatory evaporator (70 ° C) สารตกค้างถูกนำไปยังเตาอบสำหรับ h 2 ที่ 50 องศาเซลเซียสประเมิน phospholipidsครั้งแรกของทั้งหมด เส้นโค้งเทียบกำหนด phospholipids ถูกจัดเตรียมตามเฟอร์ลอง Badiale et al. (2006) Phosphor หุ้นโซลูชั่นของ P.mL-1 50 มิลลิกรัม (0.2195 กรัมโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟต ก่อนหน้านี้แห้งสำหรับ 1h/100 ºC ผสมในน้ำ แล้วเสร็จสมบูรณ์ใน 1 L) ถูกทำให้เจือจางเป็นโซลูชันทำ 5mg ยา P.mL-1 จากโซลูชั่นล่าสุด aliquots 2, 5, 7, 10, 15, 20 และ 25 mL ถูกโอนย้ายไป 100 มล volumetric บอลลูนแต่ละ ในบอลลูน 20 mL โซเดียม molybdate โซลูชันเพิ่ม กำลังปริมาณที่เติม ด้วยน้ำกลั่น 100 mL ส่วนผสมเหล่านี้ถูกความร้อนใน 30 นาทีในการอาบน้ำที่ 90 ° C ตาม ด้วยน้ำแข็งน้ำเย็น อ่าน absorbance ของว่าง และมาตรฐานที่กำหนดที่ 800 nm ในเครื่องทดสอบกรดด่างเห็น UV (แล้วแต่กำหนด แครีแกรนต์ 100), ใช้ cuvettes 1 ซ.ม.กำหนด phospholipids ในตัวอย่าง โครงการสกัดจากรำข้าวหมัก และไม่หมักโดย Folch et al. (1957) วิธีมีน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัมจานเครื่องเคลือบดินเผา ปกคลุมไป ด้วย 0.75 g ของ MgO และนำเตาอบ (110 ° C) จนกระทั่งตัวอย่างถูกดูดซึมอย่างสมบูรณ์ โดย MgO ส่วนที่เหลือจากการถูก incinerated ในเปลวไฟแล้ว อบในเตาที่ 800 ° C ประมาณ 20 นาทีสำหรับ ขี้เถ้าถูกละลายใน 40 mL ของน้ำ และปริมาณ 20 mL ของ 2 N ซัลฟิวริก กวนจนกว่า MgO มีส่วนยุบแล้ว ส่วนผสมมีการถ่ายโอน 100 มล volumetric ลูกโป่งและเสียงที่สมบูรณ์เพื่อ 100 mL ด้วยน้ำ พ.ศ.2542 แก้ไขปัญหาวิเคราะห์Aliquots จากโซลูชั่นวิเคราะห์ถูกโอนย้ายไป 100 มล volumetric บอลลูน ตามเจือจางต้องใช้ของตัวอย่าง บรรลุ dilutions ครั้งที่ 4, 5, 12.5, 25 และ 50 กับ 25, 20, 8, 4 และ 2 mL ในโซลูชั่นการวิเคราะห์นั้น ๆ บอลลูนแต่ละถูกเพิ่ม 20 mL molybdate โซลูชันและปริมาณที่เติม ด้วยน้ำกลั่น การผสมผสานระหว่างความร้อนที่ 90 ° C สำหรับ 30 นาที สำหรับการกำหนดที่ว่าง 20 mL molybdate โซลูชันเพิ่ม นอกจาก 0.75 g MgO กรดกำมะถัน 20 mL 2 N และเสียงที่สมบูรณ์เพื่อ 100 mL ด้วยน้ำกลั่น หน่วย absorbance ที่ 800 nm ได้ถูกกำหนดในอุปกรณ์เดียวกันเป็นมาตรฐาน ทดสอบการกู้คืน โดยเพิ่ม 1.2, 2.4 และ 4.8 มิลลิกรัมของ KH2PO4 ไปสามตัวอย่างมาตรฐานของโครงการที่สกัดจากรำข้าว ขีดจำกัดของการตรวจสอบได้โดยวัดจากการอ่านอย่าง 6 ว่างไว้ ด้วยกระบวนการเดียวกันตามที่อธิบายไว้สำหรับ phospholipids ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของ absorbance เปล่าคูณสามถูกใช้ในการประเมินความเข้มข้นต่ำจะพบการใช้เส้นโค้งมาตรฐาน (Badiale-เฟอร์ลองและ al., 2006)ส่วนกำหนดค่าของกรดไขมันรำเศษไขมันที่สกัด โดยวิธี Folch et al. (1957) ถูกยัดเยียดให้ก๊าซ chromatography (GC) สำหรับแยกกรดไขมัน โครงการถูก esterified โดยเมตคาล์ฟ et al. (1966) ดัดแปลงวิธี ซึ่งประกอบด้วยในกระบวนการสะพอนิฟิด้วย 0.5 N เกาะ methanolic โซลูชั่น ภายใต้ป้องกันกรดไหลย้อนในช่วง 15 นาที หลังจากระบายความร้อน ปฏิกิริยา esterification ด้วยเมธานอ catalized จากโซลูชัน BF3 (15 mL 20% BF3 ผสมในเมทานอล 1:1) และ refluxed สำหรับเพิ่มหลังจากนั้น นาทีที่ 7, 15 mL ของปิโตรเลียมอีเทอร์ และ 15 mL ของน้ำเกลืออิ่มตัว ชั้นอีเทอร์ถูกรวบรวม และการซ้ำสองกับ 25 mL ของปิโตรเลียมอีเทอร์ ระยะอินทรีย์ถูกล้าง ด้วย 25 mL ของน้ำกลั่นสองครั้ง แล้วถูกกรองในไดโซเดียมซัลเฟต ตัวทำละลายไม่หายไปภายใต้กระแสไนโตรเจนและสารตกค้าง solubilized ด้วยเฮกเซน 10 mL สำหรับวิเคราะห์ GC การแยก และการกำหนดปริมาณส่วนผสมกรดไขมัน esterified, chromatograph แก๊ส ถูกใช้ (แล้วแต่กำหนดดาว Chromatograph 3400CX ดัลลัส CA, USA), พร้อมหัวฉีด แยก/splitless และสลักเครื่องตรวจจับ แยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ polyethyleneglycol รูพรุน (ZB WAX 30 ม. x $ 0.32 มม.) และฟิล์มหนา 0.25 µm (Zebron สหรัฐอเมริกา) ดาวซอฟต์แวร์ถูกใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล ไฮโดรเจนเป็นก๊าซผู้ขนส่งที่ไหล mL.min 1-1 ในขณะที่ไนโตรเจนเป็นแก๊สเครื่องสำอาง 30 mL.min-1 อุณหภูมิหัวฉีดและเครื่องตรวจจับถูกตั้งค่า 250 ° C และ 300 ° C ตามลำดับ ถูก 1 µL ปริมาณฉีด เงื่อนไข chromatographic สำหรับแยกได้ดังนี้: อุณหภูมิเริ่มต้นคอลัมน์ของ 40 ºC เพิ่มให้ 100 ºC ที่อัตราการไหลของ 6 ° C.min-1 โฮลดิ้งใน 1 นาทีที่อุณหภูมินี้ ขั้นตอนสองประกอบด้วยในการเพิ่มอุณหภูมิจาก 100 ไป 160 ºC (ถือใน 5 นาที) และสุดท้าย ล่าสุดเพิ่มขึ้นถึง 230 ºC สำหรับ 10 นาที การทั้งสองขั้นตอน ด้วยอัตราการไหลเดียวกัน (6 ° C.min-1) ระบุยอดเขา โดยการเปรียบเทียบเวลารักษากับ methyl มาตรฐานเอสเธอร์ (ซิก-Aldrich)
การแปล กรุณารอสักครู่..
วิธีการทดลองรำข้าวรำข้าวได้รับการบรรจุในถุงโพรพิลีนจาก 5 กิโลกรัมถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -10 องศาเซลเซียสจนถึงช่วงเวลาของการใช้งานในกระบวนการหมัก เซลล์ขนาดเล็กมันเป็นมาตรฐานระหว่าง 0.35 และ 0.70 มมใช้ปลุกปั่นแม่เหล็กไฟฟ้า (Bertel) 60 เฮิร์ตซ์พร้อมกับตะแกรงตาข่ายที่แตกต่างกัน. ขั้นตอนการหมักการหมักได้ดำเนินการในถังหมักถาดที่มีขนาด 29 x 17 x 5.5 cm3.The ข้าว ฐานรำ (100 กรัม) ถูกวางไว้ในถังหมักในรูปแบบของชั้นดีของ ~ 2 ซม. หลังจากที่เป็นเนื้อเดียวกันกับฐาน 45 มลน้ำเกลือ (KH2PO4 2 GL-1, MgSO4 1 GL-1, NH2CONH2 1.8 gL -1 ใน HCl 0.4 M) สปอร์เริ่มต้นรำเข้มข้นเป็น 4.0x106 สปอร์กรัม-1 (Badiale-หลา et al., 2007) ตามฮะซันและคณะ (1998) ความชื้นมีการปรับถึง 50% ด้วยนอกจากนี้น้ำที่ผ่านการฆ่าเชื้อและถาดถูกปกคลุมไปด้วยผ้ากอซฆ่าเชื้อเพื่อให้อากาศก่อนที่จะถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 ชั่วโมง เพื่อดำเนินการลักษณะทางกายภาพและทางเคมีตัวอย่างถูกถอนออกที่จุดเริ่มต้นของกระบวนการและแต่ละ 24 ชั่วโมงถูกเก็บไว้ที่ -18 องศาเซลเซียส. ไขมันสกัดตัวอย่างรำข้าวที่มีขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 0.7 มมถูกยัดเยียดให้สองวิธีการสกัด: วิธีการสกัดแบบ (AOAC, 2000) และ Folch และคณะ (1957) แรกตามคำแนะนำอย่างเป็นทางการในขณะที่หลังได้ดำเนินการกับการปรับเปลี่ยนซึ่งเป็นตัวอย่าง (5 กรัม) ถูกกวนในอ่างอัลตราโซนิกเป็นเวลา 5 นาทีกับ 25 มิลลิลิตร 2: 1 คลอโรฟอร์มสารละลายเมทานอลและปั่นเป็นเวลา 10 นาที ใสถูกแยกออกและกระบวนการสกัดซ้ำ 2 ครั้งโดยการเขย่า supernatants ถูกกรองกระดาษกรองล้างด้วย 10 มลสารและโอนไปยังช่องทาง Separatory หนึ่งในสี่ของ 0.88% KCl ของปริมาณสารสกัดที่ถูกเพิ่มตามด้วยคู่มือการสั่น ขั้นตอนล่างได้รับการเก็บรวบรวมและหดหายอีกครั้งกับ¼ของปริมาณกับ 2: 1 เมทานอล: การแก้ปัญหาน้ำ เฟสอินทรีย์ถูกกรองผ่านโซเดียมซัลเฟตปราศจากและแห้งในขวดแบนจุดต่ำสุดในการสับเปลี่ยนระเหย (70 ° C) ที่เหลือถูกนำไปอบเป็นเวลา 2 ชั่วโมงที่ 50 ° C. Phospholipids ประเมินแรกของทุกเส้นโค้งการสอบเทียบเพื่อตรวจสอบ phospholipids ถูกจัดทำขึ้นตาม Badiale-หลาและคณะ (2006) วิธีการแก้ปัญหาหุ้น Phosphor 50 มิลลิกรัม P.mL-1 (0.2195 กรัมโพแทสเซียมไดไฮโดรเจนฟอสเฟตแห้งก่อนหน้านี้สำหรับ 1H / 100 องศาเซลเซียสเจือจางแล้วในน้ำและเสร็จสิ้นการ 1 ลิตร) ถูกปรับลดลงในการแก้ปัญหาการทำงานของ 5 มิลลิกรัม P.mL-1 . จากการแก้ปัญหาที่ผ่านมาส่วนลงตัวของ 2, 5, 7, 10, 15, 20 และ 25 มิลลิลิตรถูกถ่ายโอนไป 100 มลลูกโป่งปริมาตรแต่ละ ในลูกโป่งเหล่านี้, 20 มิลลิลิตรสารละลายโซเดียมโมลิบถูกเพิ่มเป็นปริมาณเสร็จสมบูรณ์ด้วยน้ำกลั่น 100 มิลลิลิตร ผสมเหล่านี้ถูกความร้อนเป็นเวลา 30 นาทีในอ่างน้ำที่ 90 ° C ตามด้วยน้ำแข็งระบายความร้อนอาบน้ำ การอ่านการดูดกลืนแสงของการแก้ปัญหาที่ว่างเปล่าและมาตรฐานได้รับการพิจารณาที่ 800 นาโนเมตร UV-Visible Spectrophotometer (Varian นิวเคลียส 100) โดยใช้ 1 ซม cuvettes. การตรวจสอบ phospholipids ในตัวอย่างไขมันที่สกัดได้จากการหมักและไม่รำข้าวหมักโดย Folch และคณะ (1957) วิธีการได้รับการชั่งน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัมในจานพอร์ซเลนปกคลุมด้วย 0.75 กรัมของ MgO และนำไปอบ (110 ° C) จนกระทั่งตัวอย่างถูกดูดซึมอย่างสมบูรณ์โดย MgO ที่เหลือถูกเผาในเปลวไฟและจากนั้นในเตาอบที่อุณหภูมิ 800 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที ขี้เถ้าถูกกลืนหายไปใน 40 มลของน้ำและปริมาณ 20 มล 2 ไม่มีกรดกำมะถันแล้วกวนจน MgO ก็เลือนหายไป ผสมถูกถ่ายโอนไป 100 มลลูกโป่งปริมาตรและปริมาณเสร็จถึง 100 มิลลิลิตรน้ำ constituting โซลูชั่นการวิเคราะห์. aliquots จากโซลูชั่นการวิเคราะห์ที่ถูกถ่ายโอนไป 100 มลลูกโป่งปริมาตรตามการลดสัดส่วนที่ต้องการของกลุ่มตัวอย่าง เจือจางของ 4, 5, 12.5, 25 และครั้งที่ 50 ได้รับการประสบความสำเร็จกับ 25, 20, 8, 4 และ 2 มิลลิลิตรของโซลูชั่นการวิเคราะห์ที่เกี่ยวข้อง บอลลูนแต่ละคนได้ที่เพิ่มขึ้นของปริมาณ 20 มลแก้ปัญหาโมลิบและปริมาณเสร็จสมบูรณ์ด้วยน้ำกลั่นเป็นส่วนผสมความร้อนที่ 90 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 นาที สำหรับความมุ่งมั่นที่ว่างเปล่า, 20 มิลลิลิตรโมลิบถูกเพิ่มนอกเหนือจาก 0.75 กรัม MgO, 20 มิลลิลิตร 2 ไม่มีกรดกำมะถันและปริมาณเสร็จถึง 100 มิลลิลิตรด้วยน้ำกลั่น หน่วยของการดูดกลืนแสงที่ 800 นาโนเมตรได้รับการพิจารณาในอุปกรณ์เดียวกับมาตรฐาน. การกู้คืนได้รับการทดสอบโดยการเพิ่ม 1.2, 2.4 และ 4.8 มิลลิกรัม KH2PO4 ถึงสามตัวอย่างมาตรฐานของไขมันที่สกัดจากรำข้าว ขีด จำกัด ของการตรวจสอบการวัดจากการอ่านของ 6 ตัวอย่างว่างเปล่าที่เตรียมโดยวิธีการเดียวกันตามที่อธิบายไว้สำหรับ phospholipids เบี่ยงเบนมาตรฐานของการดูดกลืนแสงว่างเปล่าคูณด้วยสามถูกนำมาใช้ในการประเมินความเข้มข้นขั้นต่ำที่จะถูกตรวจพบโดยใช้เส้นโค้งมาตรฐาน (Badiale-หลา et al., 2006). กรดไขมันไขมันส่วนรำสกัดโดย Folch และคณะ (1957) วิธีการที่ถูกยัดเยียดให้แก๊ส chromatography (GC) สำหรับกรดไขมันที่แยก ไขมันถูก esterified โดยเมทคาล์ฟและคณะ (1966) ดัดแปลงวิธีการซึ่งประกอบในสะพอไขมัน 0.5 ยังไม่มีการแก้ปัญหา KOH เมทานอลภายใต้การไหลย้อนกลับในช่วง 15 นาที หลังจากที่เย็นปฏิกิริยา esterification กับเมทานอลได้รับการ catalized โดย BF3 การแก้ปัญหา (15 มิลลิลิตร 20% BF3 เจือจางในเมทานอล 1: 1) และ refluxed 7 นาที ต่อจากนั้น 15 มลปิโตรเลียมอีเทอร์และ 15 มลน้ำเกลืออิ่มตัวถูกเพิ่ม ชั้นอีเทอร์ถูกเก็บรวบรวมและขั้นตอนการทำซ้ำเป็นครั้งที่สองที่มี 25 มลปิโตรเลียมอีเทอร์ เฟสอินทรีย์ถูกล้างครั้งที่สองกับ 25 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นกรองแล้วในโซเดียมซัลเฟตปราศจาก ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสไนโตรเจนและสารตกค้างโดยละลายเฮกเซนมิลลิลิตร 10 สำหรับการวิเคราะห์ GC. เพื่อแยกและปริมาณ esterified ส่วนผสมของกรดไขมัน, gas chromatograph ที่ถูกนำมาใช้ (Varian ดาว Chromatograph 3400CX, พาโลอัลโต, CA, USA) พร้อมกับ แยก / หัวฉีด Splitless และเครื่องตรวจจับ FID แยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ฝอย polyethyleneglycol (ZB-WAX 30 เมตร x 0.32 มิลลิเมตร) ความหนาของฟิล์ม 0.25 ไมครอน (Zebron สหรัฐอเมริกา) ซอฟแวร์ STAR ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ข้อมูล ไฮโดรเจนเป็นก๊าซที่ไหลของ 1 mL.min-1 ในขณะที่ไนโตรเจนเป็นก๊าซแต่งหน้าวันที่ 30 mL.min-1 หัวฉีดและอุณหภูมิที่ตรวจจับได้กำหนดถึง 250 ° C และ 300 ° C ตามลำดับเป็น 1 ไมโครลิตรปริมาณการฉีด เงื่อนไขโครมาสำหรับการแยกได้ดังนี้คอลัมน์อุณหภูมิเริ่มต้นจาก 40 องศาเซลเซียสเพิ่มถึง 100 องศาเซลเซียสที่อัตราการไหลของ 6 ° C.min-1, โฮลดิ้งในช่วง 1 นาทีที่อุณหภูมินี้ ขั้นตอนที่สองประกอบด้วยในการเพิ่มอุณหภูมิจาก 100 ถึง 160 องศาเซลเซียส (ถือเป็นเวลา 5 นาที) และสุดท้ายที่ผ่านมาเพิ่มขึ้นถึง 230 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาทีเป็นทั้งสองขั้นตอนที่มีอัตราการไหลเดียวกัน (6 ° C.min-1) ยอดเขาที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบเวลาการเก็บรักษาที่มีมาตรฐานเมทิลเอสเธอร์ (Sigma-Aldrich)
การแปล กรุณารอสักครู่..
ทดลองวิธีการ
น้ำมันรำข้าวรำข้าวบรรจุในถุงโพลีโพรพิลีน 5 กิโลกรัม ที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 10 º C จนถึงช่วงเวลาของการใช้งานในกระบวนการวิศวกรรมเคมี . ของ granulometry เป็นมาตรฐานระหว่าง 0.35 และ 0.70 มม. ใช้กวนแม่เหล็กไฟฟ้า ( bertel ) 60 Hz พร้อมตะแกรงตาข่ายที่แตกต่างกัน กระบวนการ
วิศวกรรมเคมีการหมักเป็นการทดลองในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพถาด ขนาด 29 x 17 x 5.5 cm3 . น้ำมันรำข้าว ชั้นล่าง ( 100 กรัม ) ลงในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ในรูปแบบของชั้นที่ดีของ ~ 2 เซนติเมตร หลังจากการชั้นล่าง 45 มล. เกลือ ( 2 g.l-1 kh2po4 , 1 g.l-1 nh2conh2 MgSO4 ใ , 1.8 g.l-1 ใน HCL 0.4 M ) น้ำมันรำข้าวเริ่มต้นสปอร์ความเข้มข้น 40x106 สปอร์ G-1 ( badiale เฟอร์ลอง et al . , 2007 ) ตาม Hasan et al . ( 1998 ) , ความชื้นปรับ 50% กับฆ่าเชื้อน้ำจากถาดที่ถูกปกคลุมด้วยผ้ากอซฆ่าเชื้อเพื่อให้อากาศ ก่อนถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 120 ชั่วโมง ºเนินที่มีลักษณะเฉพาะตัวอย่าง ถอนที่จุดเริ่มต้นของกระบวนการและใน 24 ชั่วโมงจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 18 C .
º
การสกัดไขมัน
น้ำมันรำข้าว ตัวอย่างที่มีขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 0.7 มม. ภายใต้สองวิธีการสกัด : 1 ( โปรตีน , 2000 ) และฟอล์ช et al . ( 1957 ) ครั้งแรกตามคำแนะนำอย่างเป็นทางการในขณะที่หลังทำการปรับปรุง ซึ่งมีตัวอย่าง ( 5 กรัม ) คือคนอาบด้วย 5 นาที 25 มิลลิลิตร ( 2 : 1 :สารละลายเมทานอลและระดับ 10 นาทีนำแยกและกระบวนการสกัดซ้ำอีก 2 ครั้ง โดยการเขย่า การ supernatants ถูกกรอง , กรองกระดาษซัก 10 ml ของรีเอเจนต์และโอนไปยังช่องทางตัว . ไตรมาส เท่ากับ 0.88 % ปริมาณของสารสกัด ปริมาณก็เพิ่มตามด้วยมือสั่นขั้นตอนลดรวบรวมและบดอีกครั้งด้วย¼ของปริมาณของเมทานอล : น้ำ 2 : 1 แก้ไข ระยะอินทรีย์ถูกกรองผ่านไฮดรัสโซเดียมซัลเฟตและอบแห้งในขวดแบน bottomed ในซึ่งทำให้หมุนรอบระเหย ( 70 °องศาเซลเซียส ) ที่เหลือเอาไปอบ 2 ชั่วโมง 50 ° C .
ดการประเมิน
ครั้งแรกของทั้งหมดเป็นรูปโค้งเพื่อกำหนดกลุ่มเป้าหมายที่เตรียมไว้ตาม badiale เฟอร์ลอง et al . ( 2006 ) ฟอสโซลูชั่นหุ้น 50 มก. p.ml-1 ( สวนป่ากรัมโพแทสเซียม dihydrogen ฟอสเฟต ก่อนหน้านี้แห้ง 1 / 100 º C แล้วเจือจางในน้ำและเสร็จสิ้นการ 1 ) เจือจางในสารละลายทำงาน 5 p.ml-1 มิลลิกรัม จากโซลูชั่นสุดท้าย เฉยๆ ของ 2 , 5 , 7 , 10 , 1520 และ 25 มลโอนให้ 100 มล. ปริมาตรลูกโป่งแต่ละ ในบอลลูน 20 ml สารละลายโซเดียมโมลิบเดตเพิ่มเป็นปริมาณน้ำกลั่น 100 มิลลิลิตร เสร็จสมบูรณ์ ด้วยส่วนผสมเหล่านี้ร้อนเป็นเวลา 30 นาทีในน้ำอาบที่ 90 ° C ตามด้วยน้ำแข็งอาบน้ำเย็นนอ่าน ว่าง และโซลูชั่นมาตรฐานที่กำหนด 800 nm ในเครื่องมองเห็นแสงยูวี ( Varian แครี่ 100 ) ใช้ 1 ซม. คิวเวทท .
หาดในตัวอย่างไขมันสกัดจากรำข้าวหมักและไม่หมักฟอล์ช et al . ( 1957 ) วิธีการชั่งน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัมในเครื่องเคลือบดินเผาจาน , ปกคลุมด้วย 075 กรัมขึ้นไปเตาอบ ( 110 ° C ) จนตัวอย่างสมบูรณ์ดูดซึมโดยสตอย . ที่เหลือถูกทำลายในเปลวไฟและในเตาอบที่อุณหภูมิ 800 องศา C เป็นเวลา 20 นาที ขี้เถ้าถูกละลายใน 40 มิลลิลิตรของน้ำและ 20 ml 2 N กรดซัลฟูริก แล้วกวนจน MgO ละลาย . ส่วนผสมที่ถูกโอนไปยัง 100 มล. ปริมาตรลูกโป่งและปริมาณ 100 มิลลิลิตร สมบูรณ์ ด้วยน้ำประกอบเป็นโซลูชั่นเชิงวิเคราะห์
เฉยๆจากการแก้ปัญหาวิเคราะห์ คือ ลูกโป่งปริมาตร 100 มิลลิลิตร ตามต้องการเจือจางตัวอย่าง วิธีการที่ 4 , 5 , 15 , 25 และ 50 ครั้งก็ประสบกับ 25 , 20 , 8 , 4 และ 2 ml ของตนวิเคราะห์ โซลูชั่น บอลลูนแต่ละเพิ่ม 20 ml โมลิบเดต โซลูชั่น และปริมาณ เสร็จสมบูรณ์ ด้วยน้ำกลั่นเป็นส่วนผสมที่อุณหภูมิ 90 องศา C เป็นเวลา 30 นาที เพื่อหาช่องว่าง โซลูชั่น โมลิบเดท 20 ml เพิ่ม นอกจากขึ้น 0.75 กรัม , 20 ml 2 N กรดซัลฟูริกและปริมาณ 100 ml เสร็จด้วยน้ำกลั่น หน่วยของค่าการดูดกลืนแสงที่ 800 nm ซึ่งในอุปกรณ์เดียวกันเป็นมาตรฐาน
การกู้คืนถูกทดสอบโดยการเพิ่ม 1.2 , 2.4 และ 48 มิลลิกรัม kh2po4 สามตัวอย่างมาตรฐานของไขมันที่สกัดจากรำข้าว ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ คือ วัดจากการอ่าน 6 ตัวอย่างเปล่าที่เตรียมโดยกระบวนการเดียวกันตามที่อธิบายไว้สำหรับ phospholipids ค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของค่าการดูดกลืนแสงคูณสามว่างถูกใช้เพื่อประมาณความเข้มข้นต่ำสุดที่จะตรวจพบการใช้เส้นโค้งมาตรฐาน ( badiale เฟอร์ลอง et al . , 2006 ) .
กรดไขมัน
รำข้าวสกัดไขมันส่วนฟอล์ช et al . ( 1957 ) ภายใต้ก๊าซโครมาโทกราฟี ( GC ) สำหรับกรดไขมันแยก ไขมันเป็น esterified โดยเมตคาล์ฟ et al . ( 1966 ) ดัดแปลงวิธี ซึ่งมีในไขมันสปอนนิฟิเคชั่น 0.5 N เกาะสารละลายเมทานอลภายใต้ย้อนในช่วง 15 นาทีหลังเย็นปฏิกิริยาเอสเทอริฟิเคชันกับเมทานอลเป็น catalized โดย BF3 ( 15 มิลลิลิตร สารละลายเมทานอล 20% BF3 เจือจาง 1 : 1 ) และ refluxed 7 นาที หลังจากนั้น 15 ml ของอีเธอร์ 15 มิลลิลิตร และน้ำเกลือ ปิโตรเลียมถูกเพิ่ม อีเทอร์ชั้นรวบรวมและกระบวนการทำซ้ำสองครั้งกับ 25 มิลลิลิตร ปิโตรเลียมอีเทอร์ . ระยะอินทรีย์ซักสองครั้งกับ 25 มล. น้ำกลั่นแล้วกรองในอันไฮดรัสโซเดียมซัลเฟต ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสและมีไนโตรเจนตกค้าง 10 ml สารละลายเฮกเซนวิเคราะห์ GC
เพื่อแยกและปริมาณกรดไขมัน esterified ผสม แก๊สโครมาโตกราฟที่ใช้ ( เครื่องโครมาโตกราฟ 3400cx ดาว , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) พร้อมแยก / splitless ฉีดและ เครื่องฟิต .การแยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ capillary glycol ( zb-wax 30 เมตร x 0.32 มม. ) และความหนา 0.25 µ m ( zebron , USA ) ซอฟต์แวร์ดาวนำมาวิเคราะห์ข้อมูล ไฮโดรเจนเป็นก๊าซที่ไหลพา 1 ml.min-1 ในขณะที่ไนโตรเจนเป็นก๊าซที่ 30 ml.min-1 แต่งหน้า . หัวฉีดและเครื่องตรวจจับอุณหภูมิ 250 องศา C และตั้ง 300 ° C ( 1 µผมฉีดปริมาตรเงื่อนไขทางโครมาโทกราฟีสำหรับแยกดังนี้ : คอลัมน์เริ่มต้นที่อุณหภูมิ 40 º C เพิ่ม 100 º C ที่อัตราการไหล 6 ° c.min-1 ถือในช่วง 1 นาทีที่อุณหภูมินี้ ขั้นตอนที่สองคือ ในการเพิ่มอุณหภูมิจาก 100 ถึง 160 º C ( รอ 5 นาที ) และในที่สุด ล่าสุดเพิ่มขึ้นเป็น 230 º C 10 นาที มีทั้งขั้นตอน ด้วยอัตราการไหลเดียวกัน ( 6 / c.min-1 )ยอดที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบความคงทนในการจำด้วยเมทิลเอสเทอร์ครั้งมาตรฐาน ( Sigma
ดิช )
น้ำมันรำข้าวรำข้าวบรรจุในถุงโพลีโพรพิลีน 5 กิโลกรัม ที่ถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 10 º C จนถึงช่วงเวลาของการใช้งานในกระบวนการวิศวกรรมเคมี . ของ granulometry เป็นมาตรฐานระหว่าง 0.35 และ 0.70 มม. ใช้กวนแม่เหล็กไฟฟ้า ( bertel ) 60 Hz พร้อมตะแกรงตาข่ายที่แตกต่างกัน กระบวนการ
วิศวกรรมเคมีการหมักเป็นการทดลองในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพถาด ขนาด 29 x 17 x 5.5 cm3 . น้ำมันรำข้าว ชั้นล่าง ( 100 กรัม ) ลงในเครื่องปฏิกรณ์ชีวภาพ ในรูปแบบของชั้นที่ดีของ ~ 2 เซนติเมตร หลังจากการชั้นล่าง 45 มล. เกลือ ( 2 g.l-1 kh2po4 , 1 g.l-1 nh2conh2 MgSO4 ใ , 1.8 g.l-1 ใน HCL 0.4 M ) น้ำมันรำข้าวเริ่มต้นสปอร์ความเข้มข้น 40x106 สปอร์ G-1 ( badiale เฟอร์ลอง et al . , 2007 ) ตาม Hasan et al . ( 1998 ) , ความชื้นปรับ 50% กับฆ่าเชื้อน้ำจากถาดที่ถูกปกคลุมด้วยผ้ากอซฆ่าเชื้อเพื่อให้อากาศ ก่อนถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 120 ชั่วโมง ºเนินที่มีลักษณะเฉพาะตัวอย่าง ถอนที่จุดเริ่มต้นของกระบวนการและใน 24 ชั่วโมงจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ - 18 C .
º
การสกัดไขมัน
น้ำมันรำข้าว ตัวอย่างที่มีขนาดอนุภาคระหว่าง 0.35 และ 0.7 มม. ภายใต้สองวิธีการสกัด : 1 ( โปรตีน , 2000 ) และฟอล์ช et al . ( 1957 ) ครั้งแรกตามคำแนะนำอย่างเป็นทางการในขณะที่หลังทำการปรับปรุง ซึ่งมีตัวอย่าง ( 5 กรัม ) คือคนอาบด้วย 5 นาที 25 มิลลิลิตร ( 2 : 1 :สารละลายเมทานอลและระดับ 10 นาทีนำแยกและกระบวนการสกัดซ้ำอีก 2 ครั้ง โดยการเขย่า การ supernatants ถูกกรอง , กรองกระดาษซัก 10 ml ของรีเอเจนต์และโอนไปยังช่องทางตัว . ไตรมาส เท่ากับ 0.88 % ปริมาณของสารสกัด ปริมาณก็เพิ่มตามด้วยมือสั่นขั้นตอนลดรวบรวมและบดอีกครั้งด้วย¼ของปริมาณของเมทานอล : น้ำ 2 : 1 แก้ไข ระยะอินทรีย์ถูกกรองผ่านไฮดรัสโซเดียมซัลเฟตและอบแห้งในขวดแบน bottomed ในซึ่งทำให้หมุนรอบระเหย ( 70 °องศาเซลเซียส ) ที่เหลือเอาไปอบ 2 ชั่วโมง 50 ° C .
ดการประเมิน
ครั้งแรกของทั้งหมดเป็นรูปโค้งเพื่อกำหนดกลุ่มเป้าหมายที่เตรียมไว้ตาม badiale เฟอร์ลอง et al . ( 2006 ) ฟอสโซลูชั่นหุ้น 50 มก. p.ml-1 ( สวนป่ากรัมโพแทสเซียม dihydrogen ฟอสเฟต ก่อนหน้านี้แห้ง 1 / 100 º C แล้วเจือจางในน้ำและเสร็จสิ้นการ 1 ) เจือจางในสารละลายทำงาน 5 p.ml-1 มิลลิกรัม จากโซลูชั่นสุดท้าย เฉยๆ ของ 2 , 5 , 7 , 10 , 1520 และ 25 มลโอนให้ 100 มล. ปริมาตรลูกโป่งแต่ละ ในบอลลูน 20 ml สารละลายโซเดียมโมลิบเดตเพิ่มเป็นปริมาณน้ำกลั่น 100 มิลลิลิตร เสร็จสมบูรณ์ ด้วยส่วนผสมเหล่านี้ร้อนเป็นเวลา 30 นาทีในน้ำอาบที่ 90 ° C ตามด้วยน้ำแข็งอาบน้ำเย็นนอ่าน ว่าง และโซลูชั่นมาตรฐานที่กำหนด 800 nm ในเครื่องมองเห็นแสงยูวี ( Varian แครี่ 100 ) ใช้ 1 ซม. คิวเวทท .
หาดในตัวอย่างไขมันสกัดจากรำข้าวหมักและไม่หมักฟอล์ช et al . ( 1957 ) วิธีการชั่งน้ำหนักระหว่าง 0.3 และ 1.0 กรัมในเครื่องเคลือบดินเผาจาน , ปกคลุมด้วย 075 กรัมขึ้นไปเตาอบ ( 110 ° C ) จนตัวอย่างสมบูรณ์ดูดซึมโดยสตอย . ที่เหลือถูกทำลายในเปลวไฟและในเตาอบที่อุณหภูมิ 800 องศา C เป็นเวลา 20 นาที ขี้เถ้าถูกละลายใน 40 มิลลิลิตรของน้ำและ 20 ml 2 N กรดซัลฟูริก แล้วกวนจน MgO ละลาย . ส่วนผสมที่ถูกโอนไปยัง 100 มล. ปริมาตรลูกโป่งและปริมาณ 100 มิลลิลิตร สมบูรณ์ ด้วยน้ำประกอบเป็นโซลูชั่นเชิงวิเคราะห์
เฉยๆจากการแก้ปัญหาวิเคราะห์ คือ ลูกโป่งปริมาตร 100 มิลลิลิตร ตามต้องการเจือจางตัวอย่าง วิธีการที่ 4 , 5 , 15 , 25 และ 50 ครั้งก็ประสบกับ 25 , 20 , 8 , 4 และ 2 ml ของตนวิเคราะห์ โซลูชั่น บอลลูนแต่ละเพิ่ม 20 ml โมลิบเดต โซลูชั่น และปริมาณ เสร็จสมบูรณ์ ด้วยน้ำกลั่นเป็นส่วนผสมที่อุณหภูมิ 90 องศา C เป็นเวลา 30 นาที เพื่อหาช่องว่าง โซลูชั่น โมลิบเดท 20 ml เพิ่ม นอกจากขึ้น 0.75 กรัม , 20 ml 2 N กรดซัลฟูริกและปริมาณ 100 ml เสร็จด้วยน้ำกลั่น หน่วยของค่าการดูดกลืนแสงที่ 800 nm ซึ่งในอุปกรณ์เดียวกันเป็นมาตรฐาน
การกู้คืนถูกทดสอบโดยการเพิ่ม 1.2 , 2.4 และ 48 มิลลิกรัม kh2po4 สามตัวอย่างมาตรฐานของไขมันที่สกัดจากรำข้าว ขีด จำกัด ของการตรวจสอบ คือ วัดจากการอ่าน 6 ตัวอย่างเปล่าที่เตรียมโดยกระบวนการเดียวกันตามที่อธิบายไว้สำหรับ phospholipids ค่าส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐานของค่าการดูดกลืนแสงคูณสามว่างถูกใช้เพื่อประมาณความเข้มข้นต่ำสุดที่จะตรวจพบการใช้เส้นโค้งมาตรฐาน ( badiale เฟอร์ลอง et al . , 2006 ) .
กรดไขมัน
รำข้าวสกัดไขมันส่วนฟอล์ช et al . ( 1957 ) ภายใต้ก๊าซโครมาโทกราฟี ( GC ) สำหรับกรดไขมันแยก ไขมันเป็น esterified โดยเมตคาล์ฟ et al . ( 1966 ) ดัดแปลงวิธี ซึ่งมีในไขมันสปอนนิฟิเคชั่น 0.5 N เกาะสารละลายเมทานอลภายใต้ย้อนในช่วง 15 นาทีหลังเย็นปฏิกิริยาเอสเทอริฟิเคชันกับเมทานอลเป็น catalized โดย BF3 ( 15 มิลลิลิตร สารละลายเมทานอล 20% BF3 เจือจาง 1 : 1 ) และ refluxed 7 นาที หลังจากนั้น 15 ml ของอีเธอร์ 15 มิลลิลิตร และน้ำเกลือ ปิโตรเลียมถูกเพิ่ม อีเทอร์ชั้นรวบรวมและกระบวนการทำซ้ำสองครั้งกับ 25 มิลลิลิตร ปิโตรเลียมอีเทอร์ . ระยะอินทรีย์ซักสองครั้งกับ 25 มล. น้ำกลั่นแล้วกรองในอันไฮดรัสโซเดียมซัลเฟต ตัวทำละลายระเหยภายใต้กระแสและมีไนโตรเจนตกค้าง 10 ml สารละลายเฮกเซนวิเคราะห์ GC
เพื่อแยกและปริมาณกรดไขมัน esterified ผสม แก๊สโครมาโตกราฟที่ใช้ ( เครื่องโครมาโตกราฟ 3400cx ดาว , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ) พร้อมแยก / splitless ฉีดและ เครื่องฟิต .การแยกที่เกิดขึ้นในคอลัมน์ capillary glycol ( zb-wax 30 เมตร x 0.32 มม. ) และความหนา 0.25 µ m ( zebron , USA ) ซอฟต์แวร์ดาวนำมาวิเคราะห์ข้อมูล ไฮโดรเจนเป็นก๊าซที่ไหลพา 1 ml.min-1 ในขณะที่ไนโตรเจนเป็นก๊าซที่ 30 ml.min-1 แต่งหน้า . หัวฉีดและเครื่องตรวจจับอุณหภูมิ 250 องศา C และตั้ง 300 ° C ( 1 µผมฉีดปริมาตรเงื่อนไขทางโครมาโทกราฟีสำหรับแยกดังนี้ : คอลัมน์เริ่มต้นที่อุณหภูมิ 40 º C เพิ่ม 100 º C ที่อัตราการไหล 6 ° c.min-1 ถือในช่วง 1 นาทีที่อุณหภูมินี้ ขั้นตอนที่สองคือ ในการเพิ่มอุณหภูมิจาก 100 ถึง 160 º C ( รอ 5 นาที ) และในที่สุด ล่าสุดเพิ่มขึ้นเป็น 230 º C 10 นาที มีทั้งขั้นตอน ด้วยอัตราการไหลเดียวกัน ( 6 / c.min-1 )ยอดที่ถูกระบุโดยการเปรียบเทียบความคงทนในการจำด้วยเมทิลเอสเทอร์ครั้งมาตรฐาน ( Sigma
ดิช )
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- วันนั้น. วันที่เราทำอาหาร เนื่องจากว่าเร
- รักดาว
- บางเวลาฉันอยากอยู่ในความฝันมากกว่าอยู่คว
- yes , I think a Good job
- ปลาตะเพียนใบลานมักทาด้วยสีเหลืองซีดๆ ที่
- ชีวิตที่แตกต่าง
- evry day open both
- Take a picture now and send it
- ambitious
- ความรู้สึกดีๆครั้งแรกของการได้ไปเที่ยวบ่
- เราจะมานำเสนอสินค้า
- พักสายตา
- คุณพูดว่าอะไรเมื่อกี้
- Rice
- ฉันเพลียมาก งานเลิก4ทุ่ม
- The Ministry of education has allocated
- 厅堂
- ฉันเรียนอยู่มหาลัยรามคำแหง
- สวัสดี เรามาคุยกันไหม
- Autodesk Learning Central - Partner Acco
- ราคาเดินทางไปดวงจันทร์เท่าไหร่?
- Upon fertilization,ovary begins developi
- with abrasive water jet turning (AWJT
- it is gf from my old friend who died
