DNA isolation. For the isolation of

DNA isolation. For the isolation of DNA, the protocol described by van Elsas and Smalla (57) was slightly modified. Freeze-dried soil (0.3 to 1.0 g) and 0.38 g of lysozyme were resuspended in 0.75 ml of 0.12 M sodium phosphate buffer (pH
8.0), and this mixture was incubated at 37°C for 15 min. After the samples had been cooled on ice, 750 mg of acid-washed glass beads (Sigma; 0.09 to 0.13 mm) was added, and bead beating was performed three times for 90 s at full speed in a mixer mill (type MM2000; 220 V, 50 Hz; Retsch GmbH & Co. KG, Haam,Germany) with intervals of 30 s. Sodium dodecyl sulfate (45 ml of a 20% solution) was added, and the mixture was incubated at room temperature for 15 min.Subsequently, 1 volume of phenol was added, and the mixture was mixed and centrifuged for 5 min at 10,000 3 g. The organic phase was extracted again with 0.12 M sodium phosphate solution, and aqueous phases were pooled and extracted with 1 volume of chloroform. After centrifugation for 5 min at 10,000 3 g, 0.1 volume of 5 M potassium acetate was added to the aqueous phase, and humic acids were precipitated for 15 min at room temperature. Samples were
then centrifuged for 5 min at 10,000 3 g, and the supernatant was amended with 0.1 volume of 5 M NaCl and 0.7 volume of isopropanol and incubated for 30 min at 280°C in order to precipitate DNA. DNA was obtained by centrifugation for
10 min at 10,000 3 g, and the resulting pellet was washed with 70% ethanol,dried, and resuspended in 80 ml of TE (10 mM Tris-HCl [pH 8.0], 1 mM EDTA).For further purification, spin columns that contained Sepharose CL-6B (Pharmacia)
and polyvinylpyrrolidone (20 mg of Sepharose CL-6B ml21) were prepared.In most cases, passage through two columns was needed to remove all PCR-inhibiting substances.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การแยกดีเอ็นเอ สำหรับการแยกดีเอ็นเอโปรโตคอลที่อธิบายไว้โดยรถตู้และ Smalla Elsas (57) มีการปรับเปลี่ยนเล็กน้อย ดินแห้ง (0.3-1.0 กรัม) และ 0.38 กรัมของไลโซไซม์ถูก resuspended ใน 0.75 มิลลิลิตร 0.12 M โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH
8.0) และส่วนผสมนี้ถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที หลังจากที่กลุ่มตัวอย่างที่ได้รับการระบายความร้อนบนน้ำแข็ง 750 มิลลิกรัมกรดล้างลูกปัดแก้ว (ซิกม่า; 0.09-0.13 มิลลิเมตร) ถูกบันทึกและเต้นลูกปัดได้ดำเนินการสามครั้งเป็นเวลา 90 วินาทีที่ความเร็วเต็มในโรงงานผสม (ชนิด MM2000; 220 V, 50 Hz; Retsch GmbH & Co. KG, ห้าม, เยอรมนี) กับช่วงเวลาของ 30 วินาที โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (45 มล. ของการแก้ปัญหา 20%) ถูกบันทึกและส่วนผสมที่ถูกบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 min.Subsequently 1 ปริมาณของฟีนอลที่เพิ่มขึ้นและส่วนผสมที่เป็นผสมและปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่ 10,000 3 กรัม . เฟสอินทรีย์ถูกสกัดอีกครั้งกับ 0.12 M สารละลายโซเดียมฟอสเฟตและขั้นตอนน้ำถูกรวบรวมและสกัดด้วย 1 ปริมาณของคลอโรฟอร์ม หลังจากที่ปั่นเป็นเวลา 5 นาทีที่ 10,000 3 กรัม 0.1 ปริมาณ 5 M acetate โพแทสเซียมถูกเพิ่มลงในเฟสน้ำและกรดฮิวมิกได้รับการตกตะกอนเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ตัวอย่างปั่นแล้วเป็นเวลา 5 นาทีที่ 10,000 3 กรัมและใสแก้ไขเพิ่มเติม 0.1 ปริมาณของโซเดียมคลอไรด์ 5 เมตรและ 0.7 ปริมาณของ isopropanol และบ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 280 องศาเซลเซียสเพื่อให้เกิดการตกตะกอนดีเอ็นเอ
ดีเอ็นเอที่ได้จากการหมุนเหวี่ยงสำหรับ
10 นาทีที่ 10,000 3 กรัมและเม็ดผลถูกล้างด้วยเอทานอล 70%, แห้งและ resuspended ใน 80 มิลลิลิตร TE (10 มิลลิ Tris-HCl [พีเอช 8.0] 1 มิลลิ EDTA) การกีฬา การทำให้บริสุทธิ์เพิ่มเติมคอลัมน์หมุนที่มี Sepharose CL-6B (Pharmacia)
และ polyvinylpyrrolidone (20 มิลลิกรัม Sepharose CL-6B ml21) ถูก prepared.In กรณีส่วนใหญ่ผ่านทางเสาสองเป็นสิ่งที่จำเป็นที่จะลบทั้งหมดสารยับยั้ง-PCR

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การแยกดีเอ็นเอ สำหรับการแยกดีเอ็นเอ ซึ่งอธิบายโดยรถตู้และ elsas smalla ( 57 ) คือการแก้ไขเล็กน้อย . ดินแห้งแข็ง ( 0.3 1.0 กรัม ) และ 0.38 กรัม ไลโซไซม์ ( resuspended ใน 0.75 มิลลิลิตร 0.12 เมตร โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH
8.0 ) , และส่วนผสมนี้ถูกบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 15 นาที หลังตัวอย่างได้ระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง , 750 มิลลิกรัมของกรดล้างลูกปัดแก้ว ( ซิกม่า ; 0.09 013 มม. ) คือการเพิ่มและลูกปัดเต้นได้สามครั้งสำหรับ 90 วินาทีที่ความเร็วเต็มในเครื่องบด ( ประเภท mm2000 ; 220 V , 50 Hz ; retsch GmbH & Co . KG , haam , เยอรมนี ) กับช่วงเวลา 30 วินาที โซเดียมโดเดซิลซัลเฟต ( 45 มิลลิลิตรของสารละลาย 20% ) คือการเพิ่มและ ส่วนผสมคือ บ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 15 นาที ต่อมา 1 ปริมาณของฟีนอลเป็นเพิ่มและผสมผสมไฟฟ้าสำหรับ 5 นาทีที่ 10 , 000 3 . ระยะอินทรีย์สกัดอีกครั้งกับโซเดียมฟอสเฟต 0.12 เมตร การแก้ปัญหา และมีขั้นตอนโดยรวมและแยก 1 ปริมาณคลอโรฟอร์ม หลังการปั่นเหวี่ยงสำหรับ 5 นาทีที่ 10 , 000 3 กรัม ปริมาณ 5 , โพแทสเซียม 0.1 M เพิ่มระยะน้ำและกรดฮิวมิคเป็นตะกอน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องจำนวน
แล้วระดับสำหรับ 5 นาทีที่ 10 , 000 3 กรัม และนำการแก้ไขปริมาณ 5 M NaCl 0.1 และ 0.7 ปริมาณไอโซโพรพานอล และ บ่มเป็นเวลา 30 นาทีที่ 280 องศา C เพื่อตกตะกอน DNA ดีเอ็นเอได้โดยการเหวี่ยงแยก สำหรับ 10 นาทีที่ 10
3 G และเกิดเม็ดถูกล้างด้วยแอลกอฮอล์ 70% แห้ง และ resuspended ใน 80 ml ของ Te ( 10 มม. นอกจากนี้ HCl [ pH 8.0 ] 1 mM EDTA )สำหรับการปั่นคอลัมน์ที่เกี่ยวข้องเพิ่มเติม ซึ่ง cl-6b ( มุ่งมั่น )
พอลิวินิลไพร์โรลิโดน ( 20 มิลลิกรัม และเกี่ยวข้อง cl-6b ml21 ) เตรียม ในกรณีส่วนใหญ่ ผ่านคอลัมน์ที่สองคือต้องการลบทั้งหมดสามารถยับยั้งสาร