the supernatant was collected and t

the supernatant was collected and the residue was treated followed
the preceding steps.
Combined the supernatants in a 10 mL vial and diluted with acetonitrile.

2.4. Derivatization procedure
The derivatization reaction schemes are shown in Supplementary Material Fig. S2.
The procedure was developed by pipetting 20 lL BAs standard solution or rice wine sample into a
1.5 mL screw-capped vial, 100 lL sodium borate buffer (0.1 M, pH 9.4) and 280 lL derivatization reagent (1.0  103 M) were successively added.
The vial was sealed and heated in a thermostatic water-bath at 55 C for 15 min.
After the derivatization reaction, cooled to room temperature and 100 lL of 50% acetic acid was
added for the stability of the mixture.
Then the diluted solution (0.5 lL) was injected directly into the HPLC–MS/MS system.

2.5. HPLC–MS/MS analysis
An Agilent 1290 series HPLC system coupled with an Agilent 6460 Triple Quadrupole MS/MS system (Agilent, USA) equipped with an Agilent Jet Stream electrospray ionization source (ESI
source) was employed in the process of the HPLC–MS/MS analysis.
HPLC separation was achieved using an Eclipce Plus C18 column (2.1 mm  50 mm, 1.8 lm) made in USA which was kept at 30 C. Eluent A was 5% acetonitrile containing 0.1% formic acid and B was 0.1% formic acid in pure acetonitrile.
The gradient conditions were as follows: 80–10% A from 0 to 6 min and then held for 2 min.
The injection volume was 0.5 lL at a constant flow rate of 0.2 mL/min.
The optimal ESI source conditions were described as follows: capillary voltage +4.0 kV; nebulizer 40 psi; dry gas 11.0 L/min; dry temperature 300 C; Sheath gas temperature 280 C; Sheath gas flow 10 L/min.
Agilent Mass Hunter Data Acquisition, Qualitative Analysis and Quantitative Analysis software were used for method development and data acquisition.
The optimal HPLC–MS/MS method parameters of the corresponding d0-MASC/d3-MASC derivatives are shown in Table 1.
The whole chromatographic windows were divided into three time segments: Segment I is set to waste; Segment II and III are set to source.
Data were collected under positive ionization mode with multiple reactions monitoring (MRM).

2.6. Quantification
The relative quantification method used in this work was established as follows.
Two aliquots of BAs were derivatized by d3-MASC (heavy form) and d0-MASC (light form), respectively.
To construct the calibration curves, d0-MASC and d3-MASC derivatives of standards were mixed in ratios of 1:10–10:1 for all BAs, and analyzed by HPLC–MS/MS.
The linear regression equations were obtained by plotting the experimental peak area ratios of d0-MASC/d3-MASC derivatives (y) against nominal concentration ratios (x).
Slopes of regression equation of calibration curves for the seven derivatives approximated to 1.0, the correlation coefficient values (R2) of above 0.99 were obtained for all the analytes, indicating good correlation of the experimental data with the theoretical ratios (See Supplementary Material Fig. S3).
For real

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

supernatant รวบรวม และสารตกค้างได้รับการรักษาด้วย ขั้นตอนก่อนหน้านี้ รวม supernatants ในขวด 10 mL และเจือจาง ด้วย acetonitrile2.4. ขั้นตอน derivatizationแบบปฏิกิริยา derivatization จะแสดงในรูปวัสดุเสริม S2 กระบวนการที่พัฒนา โดยปิเปต 20 lL BAs มาตรฐานโซลูชันหรือไวน์ข้าวตัวอย่างในการ1.5 mL ขวดต่อยอดสกรู 100 lL borate โซเดียมบัฟเฟอร์ (0.1 M ค่า pH 9.4) และ 280 จะ derivatization สาร (1.0 10 3 M) ถูกเพิ่มอย่างต่อเนื่อง ขวดปิดผนึก และอุ่นในอ่างอาบน้ำน้ำอุณหภูมิ 55 c เป็นเวลา 15 นาที หลังจากปฏิกิริยา derivatization เย็นที่อุณหภูมิห้องถึง 100 ก็จะ 50% กรดอะซิติกเพิ่มความเสถียรของส่วนผสม โซลูชันที่ปรับลดแล้ว (0.5 จะ) ถูกส่งเข้าระบบ HPLC – MS/MS โดยตรง2.5 การ HPLC – MS/MS วิเคราะห์มีชุด Agilent 1290 ระบบ HPLC ควบคู่กับระบบ Agilent 6460 สาม Quadrupole MS/MS (Agilent สหรัฐอเมริกา) มีแหล่งไอออไนซ์มิกส์ Agilent เจ็ตสตรีม (ESIแหล่งที่มา) ถูกใช้ในกระบวนการวิเคราะห์ HPLC – MS/MSแยก HPLC สำเร็จใช้มีคอลัมน์ C18 บวก Eclipce (2.1 มม. 50 มม. 1.8 lm) ในประเทศสหรัฐอเมริกาซึ่งถูกเก็บไว้ที่ c 30 Eluent A acetonitrile 5% ที่ประกอบด้วยกรด 0.1% และ B 0.1% กรดใน acetonitrile บริสุทธิ์ สภาพการไล่ระดับสีก็เป็นดังนี้: 80 – 10% A จาก 0 ถึง 6 นาทีแล้ว จัด 2 นาที ปริมาณฉีดได้ 0.5 จะอัตราไหลคงที่ 0.2 mL/นาที แหล่งที่มาของเงื่อนไขที่เหมาะสมของ ESI ถูกอธิบายเป็นดังนี้: แรงดันไฟฟ้าฝอย +4.0 kV ฝอยละออง 40 ปอนด์ แห้งก๊าซ 11.0 ลิตร/นาที แห้งที่อุณหภูมิ 300 C ฝักอุณหภูมิก๊าซ 280 C ฝักก๊าซไหล 10 ลิตร/นาที ซอฟต์แวร์ เก็บข้อมูล Agilent มวลฮันเตอร์ วิเคราะห์คุณภาพ และวิเคราะห์เชิงปริมาณที่ใช้สำหรับวิธีพัฒนาและข้อมูลซื้อวิธีพารามิเตอร์ที่เหมาะสมของ HPLC – MS/MS อนุพันธ์ d0-MASC/d3-MASC สอดคล้องกันจะแสดงในตารางที่ 1 Windows โครมาทั้งหมดถูกแบ่งออกเป็นสามส่วนเวลา: ส่วนจะตั้งให้เสีย ส่วน II และ III ถูกกำหนดเป็นต้น ข้อมูลถูกรวบรวมภายใต้โหมดบวกไอออไนซ์ มีหลายปฏิกิริยา (MRM) การตรวจสอบ2.6 การนับ การก่อตั้งวิธีการนับญาติที่ใช้ในงานนี้เป็นดังนี้ มี aliquots สองของ BAs derivatized d3-MASC (หนักแบบฟอร์ม) และ d0-MASC (แบบฟอร์มแสง), ตามลำดับ การสร้างกราฟสอบเทียบ อนุพันธ์ d0 MASC และ d3 MASC มาตรฐานถูกผสมในอัตราส่วน 1:10 10:1 สำหรับ BAs ทั้งหมด และวิเคราะห์ ด้วย HPLC – MS/MS สมการถดถอยเชิงเส้นได้รับ โดยพล็อตช่วงทดลองตั้งอัตราการตราสารอนุพันธ์ d0-MASC/d3-MASC (y) กับอัตราส่วนความเข้มข้นที่กำหนด (x) ลาดชันของการถดถอยสมการของเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับตราสารอนุพันธ์เจ็ดที่ประมาณ 1.0 รับค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ค่า (R2) ของเหนือ 0.99 สำหรับทั้งหมดวิเคราะห์ ระบุความสัมพันธ์ที่ดีของข้อมูลทดลองมีอัตราส่วนทางทฤษฎี (ดูเสริมวัสดุมะเดื่อ S3) สำหรับจริง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

สารละลายที่ถูกเก็บรวบรวมและสารตกค้างได้รับการรักษาตามขั้นตอนก่อนหน้า.
รวม supernatants ในขวดมิลลิลิตร 10 และเจือจางด้วย acetonitrile. 2.4 ขั้นตอน derivatization แผนการปฏิกิริยาอนุพันธ์จะแสดงในรูปที่เสริมวัสดุ S2. ขั้นตอนที่ได้รับการพัฒนาโดยการปิเปต 20 LL BAs สารละลายมาตรฐานหรือข้าวตัวอย่างไวน์เป็น1.5 มิลลิลิตรขวดสกรูปกคลุม 100 LL โซเดียมบัฟเฟอร์ borate (0.1 M ค่า pH 9.4) และ 280 LL สารอนุพันธ์ (1.0? 10? 3 M ) มีการเพิ่มอย่างต่อเนื่อง. ขวดถูกปิดผนึกไว้และให้ความร้อนในอุณหภูมิน้ำอาบน้ำที่ 55 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที. หลังจากปฏิกิริยาอนุพันธ์ที่ระบายความร้อนที่อุณหภูมิห้องและ 100 LL 50% กรดอะซิติกได้รับการเพิ่มความมั่นคงของส่วนผสม. แล้วการแก้ปัญหาการเจือจาง (0.5 LL) ได้รับการฉีดโดยตรงลงในระบบ HPLC-MS / MS. 2.5 HPLC-MS / MS วิเคราะห์Agilent 1290 ชุดระบบ HPLC คู่กับ Agilent 6460 Triple Quadrupole MS / MS ระบบ (Agilent สหรัฐอเมริกา) พร้อมกับแหล่งที่มาของไอออนไนซ์เจ็ทสตรีม Agilent electrospray (ESI แหล่งที่มา) ทำงานอยู่ในกระบวนการของการ HPLC- ที่ MS / MS วิเคราะห์. แยก HPLC ก็ประสบความสำเร็จโดยใช้คอลัมน์ Eclipce พลัส C18 (2.1 มิลลิเมตร 50 มิลลิเมตร 1.8 ไมครอน) ทำในประเทศสหรัฐอเมริกาซึ่งได้รับการเก็บรักษาไว้ที่ 30 องศาเซลเซียส ตัวชะเป็น 5% acetonitrile มีกรดฟอร์มิ 0.1% และ B เป็น 0.1% กรดใน acetonitrile บริสุทธิ์. เงื่อนไขการไล่ระดับสีได้ดังนี้:. 80-10% 0-6 นาทีแล้วจัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาทีปริมาณการฉีดคือ. 0.5 LL ในอัตราการไหลคงที่ 0.2 มิลลิลิตร / นาทีแหล่งที่ดีที่สุดของESI อธิบายเงื่อนไขดังต่อไปนี้: แรงดันของเส้นเลือดฝอย 4.0 กิโลโวลต์; nebulizer 40 ปอนด์ต่อตารางนิ้ว; ก๊าซแห้ง 11.0 ลิตร / นาที; อุณหภูมิแห้ง 300 C; อุณหภูมิก๊าซเปลือก 280 C; การไหลของก๊าซเปลือก 10 ลิตร / นาที. Agilent มวลฮันเตอร์มาซึ่งข้อมูลเชิงคุณภาพวิเคราะห์และซอฟต์แวร์การวิเคราะห์เชิงปริมาณถูกนำมาใช้ในการพัฒนาวิธีการและข้อมูลที่ได้มา. ที่ดีที่สุด HPLC-MS / MS พารามิเตอร์วิธีการของ d0-masc สอดคล้อง / d3-masc เป็นอนุพันธ์ ดังแสดงในตารางที่ 1 หน้าต่างโครมาทั้งหมดถูกแบ่งออกเป็นสามส่วนเวลา: เซกเมนต์ที่ฉันมีการตั้งค่าที่จะเสีย; ส่วนงานที่สองและสามมีการกำหนดให้แหล่งที่มา. เก็บข้อมูลภายใต้โหมดไอออนไนซ์บวกกับปฏิกิริยาการตรวจสอบหลาย (MRM). 2.6 ปริมาณวิธีการปริมาณญาตินำมาใช้ในงานนี้ก่อตั้งขึ้นดังต่อไปนี้. สอง aliquots ของ BAs ถูก derivatized โดย d3-masc (แบบหนัก) และ d0-masc (แบบแสง) ตามลำดับ. เพื่อสร้างเส้นโค้งการสอบเทียบ, d0-masc และ d3 สัญญาซื้อขายล่วงหน้า -MASC มาตรฐานถูกผสมในอัตราส่วน 1: 10-10:. 1 สำหรับ BAs ทั้งหมดและการวิเคราะห์โดยวิธี HPLC-MS / MS สมการถดถอยเชิงเส้นที่ได้รับจากการวางแผนอัตราส่วนพื้นที่สูงสุดทดลอง d0-masc / d3- สัญญาซื้อขายล่วงหน้า masc (y) กับอัตราส่วนความเข้มข้นน้อย (x). ลาดของสมการถดถอยของเส้นโค้งการสอบเทียบสำหรับเจ็ดอนุพันธ์ประมาณ 1.0 ค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ (R2) ข้างต้น 0.99 ได้รับสำหรับการวิเคราะห์ทั้งหมดที่แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ที่ดีของ ข้อมูลการทดลองที่มีอัตราส่วนทางทฤษฎี (ดูรูปที่เสริมวัสดุ. S3). สำหรับจริง