Depends on which bacteria you want

Depends on which bacteria you want to isolate plasmid from. It should be very similar, expect of cell lysis (step4), which may require additional treatment to open the cell. For instance, to isolate plasmid from Agrobacterium, it usually adds lysozyme at lysis step. Since it is fair quick procedure once you have solutions ready (you can use solutions from commercial mini prep kits), I’d suggest to try it using this protocol and see if it works. Also, if your plasmid is low copy (

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขึ้นอยู่กับแบคทีเรียที่คุณต้องการแยก plasmid จาก มันควรจะคล้ายกันมาก การคาดหวังของเซลล์ lysis (step4), ซึ่งอาจต้องรักษาเพิ่มเติมเพื่อเปิดเซลล์ เช่น การแยก plasmid จากอโกรแบคทีเรียม มันมักจะเพิ่ม lysozyme ในขั้นตอนการ lysis เนื่องจากเป็นขั้นตอนรวดเร็วยุติธรรมคุณได้ (คุณสามารถใช้โซลูชั่นจากธุรกิจขนาดเล็กเป็นการเตรียมชุด) พร้อมโซลูชั่น ฉันจะแนะนำให้ลองใช้โพรโทคอลนี้ และดูว่างาน ยัง ถ้าคุณ plasmid เป็นสำเนาต่ำ (< 10copies), คุณวัฒนธรรมเซลล์ลาเกอร์ (เช่น 50 ml) เริ่มต้นด้วย และปรับโซลูชั่นทั้งหมดที่ใช้โพรโทคอล (ใช้ตัวอย่าง การเพาะเลี้ยงเซลล์ 50 ml, 1ml โซลูชันฉัน)ผมคิดว่า ประสบการณ์ก่อสร้างไลบรารีไม่แข็งพอที่จะให้โพรโทคอลที่นี่ แต่ เราจะเชิญผู้ที่มีประสบการณ์ความสำเร็จกับการทดลองนี้เพื่อสนับสนุนโพรโทคอลในฐานข้อมูลของเราเร็ว ๆ นี้ จะ ให้คุณปรับปรุง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ขึ้นอยู่กับที่คุณต้องการแยกสายพันธุ์แบคทีเรียจาก มันควรจะคล้ายกันมาก คาดหวังจากการสลายเซลล์ ( step4 ) ซึ่งอาจต้องมีการรักษาเพิ่มเติมเพื่อเปิดเซลล์ ตัวอย่าง แยกพลาสมิดจาก Agrobacterium มันมักจะเพิ่มไลโซไซม์ในขั้นตอนการสลาย . เพราะมันเป็นขั้นตอนที่รวดเร็วเป็นธรรมเมื่อคุณมีโซลูชั่นพร้อม ( คุณสามารถใช้โซลูชั่นจากพาณิชย์ขนาดเล็กเตรียมชุด )ผมแนะนำให้ลองใช้โปรโตคอลนี้และดูว่ามันทำงานอย่างไร นอกจากนี้ถ้าพลาสของคุณคัดลอกต่ำ ( < 10copies ) , คุณอาจต้องการเซลล์เพาะเลี้ยงเบียร์ ( เช่น 50 ml ) ที่จะเริ่มต้นด้วยและขยายโซลูชั่นทั้งหมดที่ใช้ในระบบ ( เช่น 50 ml เซลล์ , ใช้ 1ml โซลูชั่นผม )

ฉันคิดว่าประสบการณ์ของฉันกับการก่อสร้างห้องสมุดยังไม่แข็ง เพียงพอเพื่อให้โปรโตคอลที่นี่เลย แต่เราก็จะเชิญผู้ที่มีประสบการณ์ที่ประสบความสำเร็จกับการทดลองนี้สนับสนุนโปรโตคอลของฐานข้อมูลของเราเร็ว ๆ นี้จะช่วยให้คุณปรับปรุง