Ad5 wildtype and mock infected HeLa

Ad5 wildtype and mock infected HeLa cells were grown on glass coverslips and harvested at various times post-infection. The cells were washed twice in phosphate buffered saline (PBS) and subsequently fixed in 4% paraformaldehyde in PBS for 15 min at room temperature. After fixation, the cells were permeabilized with 0.5% Triton X-100 in PBS for 15 min at room temperature. Alternatively, the cells were washed twice with PBS, and permeabilized and fixed simultaneously in 4% paraformaldehyde in PBS containing 0.5% Triton X-100 for 15 min at room temperature. Free aldehydes were quenched by incubation with 25 mM glycine in PBS for 15 min at room temperature. After fixation and permeabilization, the cells were rinsed three times in PBS, blocked in PBS containing 1% bovine serum albumin (BSA) and 0.2% fish skin gelatin (FSG) for 20 min, incubated for 1 h with primary antibodies diluted in PBS containing 1% BSA and 0.2% FSG, washed three times for 5 min in PBS containing 1% BSA and 0.2% FSG and incubated with secondary antibodies for 45 min. Alternatively, primary antibodies were fluorescently labeled with Zenon®-labeling technology (Life Technologies) using Zenon® Tricolor Mouse IgG1 Labeling Kit 1 (For Green, Orange and Deep Red Fluorescence Imaging) according to the manufacturer's instructions. DNA was stained with DAPI (0.07 μg/ml in PBS for 5 min) and the samples were mounted in ProLong® Antifade mounting medium (Life Technologies).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Ad5 wildtype และเซลล์ HeLa ติดไวรัสจำลองถูกปลูกในแก้ว coverslips และเก็บเกี่ยวที่ต่าง ๆ เวลาหลังติดเชื้อ เซลล์ถูกล้างในน้ำเกลือฟอสเฟต buffered (PBS) สองครั้ง และคงมาใน paraformaldehyde 4% ใน PBS ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากเบี เซลล์ถูก permeabilized 0.5% 100 X ไตรตั้นใน PBS ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หรือ เซลล์ถูกล้าง ด้วย PBS สอง permeabilized และแก้ไขพร้อมกันใน paraformaldehyde 4% ใน PBS ที่ประกอบด้วย 0.5% 100 X ไตรตั้นใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง Aldehydes ฟรีถูก quenched โดยบ่มกับ glycine 25 มม.ใน PBS ใน 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากปฏิกิริยาการตรึงและ permeabilization เซลล์ถูก rinsed สามครั้งใน PBS บล็อกใน PBS ประกอบด้วย 1% วัว serum albumin (บีเอสเอ) และตุ๋นผิวปลา 0.2% (FSG) สำหรับ 20 นาที incubated สำหรับ h 1 กับแอนตี้หลักยกเว้นใน PBS ประกอบด้วยบีเอสเอ 1% และ 0.2% FSG ล้างสามครั้งสำหรับ 5 นาทีใน PBS ประกอบด้วยบีเอสเอ 1% และ 0.2% FSG และ incubated กับแอนตี้รองสำหรับ 45 นาทีหรือ แอนตี้หลัก fluorescently ถูกป้าย ด้วยกองกำลังยอด:®ติดฉลากเทคโนโลยี (เทคโนโลยีชีวิต) โดยใช้กองกำลังยอด:® Tricolor เมาส์ IgG1 ติดฉลากชุด 1 (สำหรับสีเขียว สีส้ม และสีแดงลึก ภาพ Fluorescence) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ดีเอ็นเอถูกสี ด้วย DAPI (0.07 μg/ml ใน PBS ใน 5 นาที) และตัวอย่างถูกติดตั้งใน Antifade ®ยืดติด (ชีวิตเทคโนโลยี)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

AD5 wildtype และจำลองการติดเชื้อเซลล์ HeLa ถูกปลูกใน coverslips แก้วและเก็บเกี่ยวในหลาย ๆ ครั้งหลังการติดเชื้อ เซลล์ที่ถูกล้างครั้งที่สองในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ (พีบีเอส) และคงต่อมาใน 4% ใน paraformaldehyde พีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการตรึงเซลล์ที่ถูก permeabilized 0.5% Triton X-100 พีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง อีกวิธีหนึ่งคือเซลล์ถูกล้างครั้งที่สองกับพีบีเอสและ permeabilized และคงพร้อมกันใน paraformaldehyde 4% ในพีบีเอสที่มี 0.5% Triton X-100 เป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ลดีไฮด์ฟรีดับโดยถูกบ่มกับ glycine 25 มิลลิพีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการตรึงและ permeabilization เซลล์ถูกล้างสามครั้งในพีบีเอสที่ถูกบล็อกในพีบีเอสที่มีอัลบูมิซีรั่มวัว 1% (BSA) และเจลาตินหนังปลา 0.2% (FSG) เป็นเวลา 20 นาที, บ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงกับแอนติบอดีหลักเจือจางในพีบีเอสที่มี บีเอสเอ 1% และ 0.2% FSG ล้างสามครั้งเป็นเวลา 5 นาทีในพีบีเอสบีเอสเอที่มี 1% และ 0.2% FSG และบ่มกับแอนติบอดีรองสำหรับ 45 นาที อีกทางเลือกหนึ่งแอนติบอดีหลักมีป้าย fluorescently ด้วยเทคโนโลยีZenon®ติดฉลาก (เทคโนโลยีชีวิต) โดยใช้Zenon®ไตรรงค์เมาส์ IgG1 ฉลาก 1 ชุด (สำหรับสีเขียว, สีส้มและสีแดงลึกเรืองแสงการถ่ายภาพ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ดีเอ็นเอถูกย้อมด้วยสี DAPI (0.07 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรในพีบีเอสเป็นเวลา 5 นาที) และตัวอย่างที่ถูกติดตั้งในการติดตั้งขนาดกลางProLong® Antifade (เทคโนโลยีชีวิต)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ad5 wildtype เยาะเย้ย Hela cells ที่ปลูกใน coverslips แก้วและเก็บเกี่ยวในการติดเชื้อครั้งที่โพสต์ต่างๆ เซลล์ก็ล้างสองครั้งในฟอสเฟตบัฟเฟอร์น้ำเกลือ ( PBS ) และต่อมาคงที่ 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง หลังจากการดอง เซลล์ที่ถูก permeabilized กับ 0.5% Triton X-100 ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง อีกวิธีหนึ่งคือเซลล์ก็ล้างสองครั้งกับ PBS และ permeabilized แก้พร้อมกันใน 4 % พาราฟอร์มาลดิไฮด์ใน PBS ที่มี 0.5% Triton X-100 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง อัลดีไฮด์ฟรีถูกดับโดยการบ่มด้วย 25 มม. ไกลซีนใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง และหลังจากการตรึง permeabilization เซลล์ถูกล้างสามครั้งในพีบีเอสบล็อกใน PBS ที่มี 1% อัลบูมินและเซรั่ม ( BSA ) และ 0.2% ( FSG ) เจลาตินหนังปลา 20 นาทีบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง กับหลักภูมิคุ้มกันเจือจางใน PBS ที่มี BSA 1% และ 0.2% FSG , ล้างสามครั้งเป็นเวลา 5 นาทีใน PBS ที่มี BSA 1% และ 0.2% FSG และบ่มกับแอนติบอดี มัธยม 45 นาที อีกวิธีหนึ่งคือชนิดปฐมภูมิ fluorescently ป้ายกับซีนอน® - เทคโนโลยีการติดฉลาก ( เทคโนโลยี ) ใช้ซีนอน®ไตรรงค์เมาส์ ( ชุด 1 ฉลาก ( เขียว , ส้ม และแดงเข้ม การถ่ายภาพ ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ดีเอ็นเอเปื้อน dapi ( 0.07 μ g / ml ในรัชกาลที่ 5 นาที ) และตัวอย่างที่ติดตั้งในการยืด® antifade ขนาดกลาง ( เทคโนโลยีกับชีวิต )