PNAs are one example of DNA mimics for which, in general, the same rules of base pairing apply as for DNA. However, PNA probes lack the negative charge of DNA and, therefore, less repulsive forces between two hybridizing strands occur. This enables the PNA probe to bind stronger and the length of the probe can be shortened. PNA probes have a superior performance compared to DNA probes if regions of the rRNA with complex secondary structures shall be targeted which have a poor accessibility for DNA probes (Frischer et al., 1996). PNA probes bind to their complementary strands even at low salt concentrations and high temperatures whereas secondary structures consisting out of DNA or RNA dissolve (Brehm-Stecher, 2008). Hence, PNA probes can bind to structures which are hidden from DNA probes. The accessibility of the rRNA has been shown to possess a great impact on the fluorescence intensity which might differ significantly depending on the target region (Fuchs et al., 1998), and DNA probe design thus has to take the accessibility into account. The use of PNA probes (PNA FISH) and suitable hybridization conditions can circumvent this problem enabling high fluorescence intensities. The unpolar characteristics of PNA probes also increase the general penetration properties of the probe, resulting in an enhanced permeability for the entry into the cell through cell membrane and cell walls, and, therefore, the hybridization time can be reduced while keeping high hybridization efficiency. The resistance to nucleases represents another advantage of PNA probes or other DNA mimics and RNA derivatives such as locked nucleic acids (LNA). Accordingly, the use of PNA probes for FISH analysis of food products has increased significantly in recent years (Almeida et al., 2013b, Almeida et al., 2013a, Almeida et al., 2009, Machado et al., 2013 and Zhang et al., 2012). Lately, it was shown for E. coli O157 that PNA probes allow the specific detection of this particular serotype, which has not been achieved with a DNA probe (Almeida et al., 2013b). The use of other DNA-mimics (i.e. LNA-DNA hybrid structures with incorporated LNAs to enhance mismatch discrimination) may promise similar or even further benefits for FISH-testing in food microbiology (Cerqueira et al., 2008) although these mimics have only rarely been employed. Unfortunately, already published DNA probes cannot be easily converted into PNA probes or other DNA mimics since hybridization temperature, buffer stringency and the number of nucleotides have to be reevaluated and optimized in each case and self-complementarity has to be avoided (Amann and Fuchs, 2008 and Cerqueira et al., 2008). The considerable higher costs for PNA probes and other DNA-mimics as well as a still inferior predictability of the results in contrast to conventional DNA probes also limit their potential for a broader diagnostic use.
PNAs เป็นตัวอย่างหนึ่งของดีเอ็นเอเลียนที่ ทั่วไป กฎการจับคู่ฐานเดียวกันใช้กับดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตาม PNA probes ขาดประจุลบของดีเอ็นเอ และ ดังนั้น การเกิดขึ้นของกองกำลัง repulsive น้อยระหว่างสอง strands hybridizing ทำให้โพรบ PNA ผูกแข็งแกร่ง และความยาวโพรบสามารถจะตัดให้สั้นลง คลิปปากตะเข้ PNA มีประสิทธิภาพที่เหนือกว่าเมื่อเทียบกับดีเอ็นเอคลิปปากตะเข้ถ้าภูมิภาคของ rRNA มีโครงสร้างซับซ้อนที่รองจะมีการกำหนดเป้าหมายซึ่งมีความยากจนสำหรับคลิปปากตะเข้ DNA (Frischer et al., 1996) PNA probes ผูกกับ strands ของเสริมแม้ที่ความเข้มข้นเกลือต่ำและอุณหภูมิสูงในขณะที่โครงสร้างรองประกอบด้วยจากดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอละลาย (Brehm-Stecher, 2008) ดังนั้น คลิปปากตะเข้ PNA สามารถผูกกับโครงสร้างที่ถูกซ่อนจาก DNA probes การเข้าถึงของ rRNA ได้รับการแสดงจะมีผลกระทบมากในความเข้ม fluorescence ซึ่งอาจแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญภูมิภาคเป้าหมาย (Fuchs et al., 1998), และดีเอ็นเอโพรบออกได้จึงจะเข้าบัญชี ใช้ PNA probes PNA ปลา) และเงื่อนไข hybridization เหมาะสามารถหลีกเลี่ยงปัญหานี้เปิด fluorescence สูงปลดปล่อยก๊าซ ลักษณะ unpolar ของ PNA คลิปปากตะเข้ยังเพิ่มคุณสมบัติทั่วไปการเจาะของโพรบ ในมี permeability เพิ่มขึ้นสำหรับรายการในเซลล์ผ่านเยื่อหุ้มเซลล์และผนังเซลล์ และ ดังนั้น สามารถลดเวลาการ hybridization ขณะรักษาประสิทธิภาพสูง hybridization ความต้านทานการ nucleases แสดงประโยชน์อื่นคลิปปากตะเข้ PNA หรืออื่น ๆ เลียนแบบดีเอ็นเอ และอาร์เอ็นเออนุพันธ์เช่นกรดนิวคลีอิกล็อค (LNA) ตาม การใช้ PNA probes สำหรับวิเคราะห์ปลาผลิตภัณฑ์อาหารได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในปีที่ผ่านมา (al. et Almeida, 2013b, Almeida et al., 2013a, Almeida et al., 2009, al. et มาชาโด 2013 และเตียว et al., 2012) เมื่อเร็ว ๆ นี้ จะถูกแสดงสำหรับ E. coli O157 ที่ PNA probes อนุญาตให้มีการตรวจพบเฉพาะ serotype เฉพาะนี้ ซึ่งไม่ได้รับความ มีเป็นดีเอ็นเอโพรบ (Almeida et al., 2013b) ใช้อื่น ๆ DNA-เลียนแบบ (เช่น LNA DNA ผสมโครงสร้างกับ LNAs เรทเพื่อเลือกปฏิบัติไม่ตรงกัน) อาจสัญญาผลประโยชน์คล้ายคลึงกัน หรือยังสำหรับทดสอบปลาในอาหารจุลชีววิทยา (Cerqueira et al., 2008) แม้ว่าเลียนแบบเหล่านี้ได้เท่านั้นไม่ค่อยถูกว่าจ้าง อับ คลิปปากตะเข้ดีเอ็นเอแล้วเผยแพร่ไม่ได้แปลงเป็น PNA คลิปปากตะเข้หรือดีเอ็นเออื่น ๆ เลียนแบบเนื่องจากอุณหภูมิการ hybridization, stringency บัฟเฟอร์ และจำนวนนิวคลีโอไทด์มี reevaluated และเพิ่มประสิทธิภาพในแต่ละกรณี และ complementarity ตนเองยังต้องหลีกเลี่ยง (Amann และ Fuchs, 2008 และ Cerqueira et al., 2008) ต้นทุนสูงมากสำหรับคลิปปากตะเข้ PNA และอื่น ๆ ดีเอ็นเอเลียนแบบ ตลอดจนแอพพลิเคชันยังน้อยผลตรงข้ามคลิปปากตะเข้ DNA ปกติยังจำกัดศักยภาพของพวกเขาสำหรับการวินิจฉัยใช้กว้างขึ้น
การแปล กรุณารอสักครู่..

PNAS เป็นตัวอย่างหนึ่งของการเลียนแบบดีเอ็นเอซึ่งโดยทั่วไปกฎเดียวกันของการจับคู่ใช้เป็นฐานสำหรับดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตามฟิวส์ขาด PNA ประจุลบของดีเอ็นเอและมีกองกำลังน่ารังเกียจน้อยระหว่างสองเส้น hybridizing เกิดขึ้น นี้จะช่วยให้การสอบสวน PNA ผูกแข็งแกร่งและความยาวของหัววัดที่สามารถจะสั้นลง ยานสำรวจ PNA มีประสิทธิภาพที่เหนือกว่าเมื่อเทียบกับดีเอ็นเอโพรบถ้าภูมิภาคของ rRNA มีโครงสร้างทุติยภูมิที่ซับซ้อนจะต้องมีการกำหนดเป้าหมายที่มีการเข้าถึงที่ดีสำหรับดีเอ็นเอโพรบ (Frischer et al., 1996) ยานสำรวจ PNA ผูกกับเส้นที่สมบูรณ์ของพวกเขาแม้ในความเข้มข้นของเกลือต่ำและอุณหภูมิสูงในขณะที่โครงสร้างประกอบด้วยรองจากดีเอ็นเอหรืออาร์เอ็นเอละลาย (Brehm-Stecher 2008) ดังนั้นฟิวส์ PNA สามารถผูกกับโครงสร้างที่ถูกซ่อนอยู่จากดีเอ็นเอโพรบ การเข้าถึงของ rRNA ได้รับการแสดงที่จะมีผลกระทบต่อความเข้มของแสงที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญอาจจะขึ้นอยู่กับพื้นที่เป้าหมาย (Fuchs et al., 1998) และการออกแบบการสอบสวนดีเอ็นเอจึงมีการใช้การเข้าถึงเข้าบัญชี การใช้ฟิวส์ PNA (PNA FISH) และเงื่อนไขการผสมข้ามพันธุ์ที่เหมาะสมสามารถหลีกเลี่ยงปัญหานี้ช่วยให้ความเข้มแสงสูง ลักษณะของยานสำรวจ unpolar PNA ยังเพิ่มคุณสมบัติการเจาะทั่วไปของการสอบสวนส่งผลให้การซึมผ่านที่เพิ่มขึ้นสำหรับการเข้าสู่เซลล์ผ่านเยื่อหุ้มเซลล์และผนังเซลล์และดังนั้นเวลาผสมพันธุ์จะลดลงขณะที่การรักษาที่มีประสิทธิภาพสูงการผสมพันธุ์ ความต้านทานที่จะแสดงให้เห็นถึงนิประโยชน์อีกอย่างหนึ่งของยานสำรวจ PNA หรือเลียนแบบอื่น ๆ ดีเอ็นเออาร์เอ็นเอและสัญญาซื้อขายล่วงหน้าเช่นล็อคกรดนิวคลิอิก (LNA) ดังนั้นการใช้ฟิวส์ PNA สำหรับการวิเคราะห์ปลาของผลิตภัณฑ์อาหารได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในปีที่ผ่านมา (ไมย์ et al., 2013b, ไมย์ et al., 2013a, ไมย์ et al., 2009 Machado et al., 2013 และและวอชิงตันโพสต์ al., 2012) เมื่อเร็ว ๆ นี้มันก็แสดงให้เห็น O157 เชื้อ E. coli ที่ยานสำรวจ PNA ช่วยให้การตรวจสอบที่เฉพาะเจาะจงของ serotype นี้โดยเฉพาะที่ยังไม่ได้ประสบความสำเร็จกับการสอบสวนดีเอ็นเอ (ไมย์ et al., 2013b) การใช้ดีเอ็นเอเลียนแบบอื่น ๆ (เช่นโครงสร้างไฮบริด LNA ดีเอ็นเอกับ LNAs นิติบุคคลที่จัดตั้งขึ้นเพื่อเพิ่มศักยภาพในการเลือกปฏิบัติที่ไม่ตรงกัน) อาจสัญญาผลประโยชน์ที่คล้ายกันหรือดียิ่งขึ้นสำหรับปลาการทดสอบทางจุลชีววิทยาอาหาร (Cerqueira et al., 2008) แม้ว่าจะเลียนแบบเหล่านี้มีน้อยมาก ได้รับการว่าจ้าง แต่น่าเสียดายที่การเผยแพร่แล้วดีเอ็นเอโพรบไม่สามารถเปลี่ยนได้ง่ายในยานสำรวจ PNA หรือเลียนแบบดีเอ็นเอตั้งแต่อุณหภูมิผสมพันธุ์เข้มงวด buffer และจำนวนนิวคลีโอจะต้องมีการทบทวนและปรับให้เหมาะสมในแต่ละกรณีและ complementarity ตัวเองจะต้องมีการหลีกเลี่ยง (Amann และฟิวค์ 2008 และ Cerqueira et al., 2008) ค่าใช้จ่ายที่สูงมากสำหรับการโพรบ PNA และเลียนแบบดีเอ็นเออื่น ๆ เช่นเดียวกับการคาดการณ์ยังคงด้อยกว่าของผลในทางตรงกันข้ามกับดีเอ็นเอโพรบแบบเดิมยัง จำกัด ศักยภาพของพวกเขาสำหรับการใช้งานที่กว้างขึ้นวินิจฉัย
การแปล กรุณารอสักครู่..

พีเอ็นเอเป็นหนึ่งตัวอย่างของ DNA mimics ซึ่งโดยทั่วไปกฎเดียวกันของฐานการจับคู่ใช้สำหรับดีเอ็นเอ อย่างไรก็ตาม พีเอ็นเอที่ฟิวส์ขาดประจุลบของดีเอ็นเอ และกองกำลังที่น่ารังเกียจน้อยระหว่างสอง hybridizing เส้นเกิดขึ้น นี้จะช่วยให้เครื่อง PNA ผูกแข็งแกร่งและความยาวของมันจะสั้นลงพีเอ็นเอโพรบมีสมรรถนะที่เหนือกว่าเมื่อเทียบกับดีเอ็นเอโพรบถ้าภูมิภาคของ rRNA ที่มีโครงสร้างทุติยภูมิที่ซับซ้อนจะเป็นเป้าหมายซึ่งมีการเข้าถึงดีเอ็นเอโพรบ ( น่าสงสาร frischer et al . , 1996 ) PNA และผูกกับของเสริมเส้นแม้ที่ความเข้มข้นเกลือต่ำและอุณหภูมิสูง ขณะที่โครงสร้างทุติยภูมิประกอบด้วยดีเอ็นเอ หรืออาร์เอ็นเอที่ละลายออกมาจากสเต็กเคอร์ ( เบรม ,2008 ) ดังนั้น จึงสามารถจับกับ PNA โครงสร้างซึ่งจะถูกซ่อนไว้จาก DNA probes . การเข้าถึงของ rRNA ได้ถูกแสดงที่มีผลกระทบที่ดีในการเข้มซึ่งอาจแตกต่างกันขึ้นอยู่กับพื้นที่เป้าหมาย ( ฟุชส์ et al . , 1998 ) , และการออกแบบดีเอ็นเอจึงได้รับการพิจารณาใช้ PNA ( พีเอ็นเอโพรบ ( ปลา ) และเงื่อนไขที่เหมาะสมสามารถหลีกเลี่ยงปัญหานี้ให้ความเข้มแสงสูง ลักษณะ unpolar ของ PNA และยังเพิ่มเจาะทั่วไปคุณสมบัติของโพรบ เป็นผลในการเพิ่มการซึมผ่านเพื่อเข้าสู่เซลล์โดยผ่านเยื่อหุ้มเซลล์ และผนัง เซลล์ และ ดังนั้นการ ( เวลาจะลดลงในขณะที่รักษาประสิทธิภาพสารสูง ความต้านทานต่อ nucleases เป็นอีกข้อดีของ probes PNA หรือเลียนแบบดีเอ็นเอและอาร์เอ็นเออนุพันธ์อื่น ๆเช่น ล็อกกรดนิวคลีอิก ( LNA ) ดังนั้นการใช้ PNA และการวิเคราะห์ของปลาในผลิตภัณฑ์อาหารได้เพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญในปีที่ผ่านมา ( เมด้า et al . , 2013b อัลเมด้า 2013A , et al . ,อัลเมด้า et al . , 2009 , Machado et al . , 2013 และ Zhang et al . , 2012 ) เมื่อเร็ว ๆนี้พบใน E . coli เป็นสมาชิกที่ PNA ) ให้ตรวจสอบเฉพาะนี้โดยเฉพาะ ซึ่งได้ไม่เป็นไปตามที่มีดีเอ็นเอโพรบ ( อัลเมด้า et al . , 2013b ) การใช้ดีเอ็นเออื่นเลียนแบบ ( เช่นlna-dna ไฮบริดโครงสร้างรวม lnas เพื่อเพิ่มค่าสัญญาไม่ตรงกัน ) อาจคล้ายกันหรือแม้กระทั่งเพิ่มเติมประโยชน์สำหรับการทดสอบทางจุลชีววิทยาอาหาร ( ปลา cerqueira et al . , 2008 ) แม้ว่าเลียนแบบเหล่านี้มีเพียงแต่ไม่ค่อยมีคน แต่น่าเสียดายที่ตีพิมพ์แล้ว DNA probes ไม่สามารถได้อย่างง่ายดายแปลงใช้ PNA หรือดีเอ็นเออื่น ๆเนื่องจากอุณหภูมิทำเลียนแบบ ,stringency บัฟเฟอร์และหมายเลขของนิวคลีโอไทด์ ต้องเป็นพวก และปรับให้เหมาะสมในแต่ละกรณี และข้อมูลที่ตนเองมีเพื่อหลีกเลี่ยง ( และแอเมินฟุชส์ , 2008 และ cerqueira et al . , 2008 )มากค่าใช้จ่ายที่สูงขึ้นสำหรับ PNA probes และดีเอ็นเออื่น ๆรวมทั้งสามารถเลียนแบบยังด้อยกว่าของผลลัพธ์ในทางตรงกันข้ามกับดีเอ็นเอโพรบยังปกติจำกัดศักยภาพ เช่น การใช้
การแปล กรุณารอสักครู่..
