Escherichia coli is a versatile, lo

Escherichia coli is a versatile, low-cost, and popular host for expressing recombinant proteins. However, extracting recombinant proteins from E. coli requires cell wall breakage, which is both time- and effort-consuming. Here we report a novel cell breakage method based on our recent finding that VanX, which is a d-Ala-d-Ala dipeptidase encoded in a vancomycin-resistant VanA gene cluster, exhibits a strong cell lysis activity when expressed in isolation in E. coli. In our strategy, we coexpress VanX with the target protein, causing cell autolysis and release of the cellular content into the culture medium. We demonstrated this strategy for two model proteins, a green fluorescent protein variant (GFPuv) and Gaussia luciferase, and optimized the autolysis conditions and coexpression vectors. The fluorescence activity of GFPuv collected from the medium was identical to that of GFPuv purified by conventional methods. Cell breakage by VanX-mediated autolysis is very simple to implement and will efficiently complement traditional methods.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Escherichia coli เป็นโฮสต์เอนกประสงค์ ประหยัด และเป็นที่นิยมสำหรับกำลัง recombinant โปรตีน อย่างไรก็ตาม แยก recombinant โปรตีนจาก E. coli ต้องเคมีฯ ผนังเซลล์ซึ่งเป็นทั้งเวลา - และความพยายามบริโภค ที่นี่เรารายงานวิธีเคมีฯ นวนิยายเซลล์ตามที่ค้นหาล่าสุดของเราที่เข้า VanX ซึ่งเป็น dipeptidase d-อลา-d-อลา ใน vancomycin ทนวนายีนคลัสเตอร์ การจัดแสดงกิจกรรมการ lysis เซลล์แข็งแรงเมื่อแสดงแยกใน E. coli ในกลยุทธ์ของเรา เรา coexpress VanX กับโปรตีนเป้าหมาย เกิด autolysis เซลล์และปล่อยเนื้อหาโทรศัพท์มือถือเป็นสื่อวัฒนธรรมการ ว่ากลยุทธ์นี้สำหรับสองรุ่นโปรตีน โปรตีนเรืองแสงสีเขียวแปร (GFPuv) และ Gaussia luciferase และปรับเงื่อนไข autolysis และเวกเตอร์ coexpression กิจกรรม fluorescence ของ GFPuv ที่รวบรวมจากสื่อไม่เหมือนกับของ GFPuv ที่บริสุทธิ์ โดยวิธีปกติ เซลล์เคมีฯ โดย VanX mediated autolysis ได้ง่ายมากที่จะใช้ และจะเสริมวิธีการแบบเดิมได้อย่างมีประสิทธิภาพ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Escherichia coli เป็นอเนกประสงค์ที่มีราคาต่ำและโฮสต์ที่เป็นที่นิยมสำหรับการแสดงโปรตีน แต่การสกัดโปรตีนจาก E. coli ต้องแตกผนังเซลล์ซึ่งเป็นทั้งเวลาและความพยายามมาก ที่นี่เราแจ้งวิธีการแตกเซลล์ใหม่ขึ้นอยู่กับผลการวิจัยที่ผ่านมาของเราที่ VanX ซึ่งเป็น dipeptidase D-Ala-D-Ala เข้ารหัสในกลุ่มยีน vancomycin ทนวนา, การจัดแสดงกิจกรรมการสลายเซลล์ที่แข็งแรงในการแสดงออกในการแยกในอี coli ในกลยุทธ์ของเราเรา coexpress VanX ด้วยโปรตีนเป้าหมายที่ก่อให้เกิดการออโตไลซิเซลล์และการเปิดตัวของเนื้อหาที่โทรศัพท์มือถือเป็นสื่อกลางในการเพาะเลี้ยง เราแสดงให้เห็นถึงกลยุทธ์นี้สำหรับสองโปรตีนรูปแบบสีเขียวเรืองแสงที่แตกต่างกันของโปรตีน (GFPuv) และ Gaussia luciferase และเงื่อนไขที่ดีที่สุด autolysis และเวกเตอร์ coexpression กิจกรรมการเรืองแสงของ GFPuv ที่เก็บรวบรวมจากสื่อก็เหมือนกับที่ GFPuv บริสุทธิ์โดยวิธีการทั่วไป การแตกของเซลล์โดยออโตไลซิ VanX สื่อเป็นเรื่องง่ายมากที่จะใช้และมีประสิทธิภาพจะเสริมวิธีการแบบเดิม

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

Escherichia coli เป็นเอนกประสงค์ ต้นทุนต่ำ และโฮสต์ที่เป็นที่นิยมแสดงโปรตีนรีคอมบิแนนท์ . อย่างไรก็ตาม การสกัดโปรตีนรีคอมบิแนนท์จาก E . coli มีเซลล์แตกผนังซึ่งมีทั้งเวลาและความพยายามที่ใช้ ที่นี่เรารายงานนวนิยายการแตกเซลล์วิธีการขึ้นอยู่กับการค้นพบล่าสุดของเราที่ vanx ซึ่งเป็น d-ala-d-ala ไดเพปทิเดสเข้ารหัสในกลุ่มยีนดื้อยาแวนโคมัยซิน จอง ,นิทรรศการแข็งแรงการสลายเซลล์กิจกรรมเมื่อแสดงออกในการแยกใน E . coli . ในกลยุทธ์ของเรา เรา coexpress vanx กับโปรตีนเป้าหมายที่ก่อให้เกิดการย่อยเซลล์และปล่อยเนื้อหาของเซลล์ในวัฒนธรรมสื่อ เราแสดงให้เห็นถึงกลยุทธ์นี้สำหรับสองตัวแปรรูปแบบโปรตีน , โปรตีนเรืองแสงสีเขียว ( gfpuv ) และเอนไซม์ลูซิเฟอเรส gaussia ,และพบว่าเงื่อนไขและเวกเตอร์ coexpression ที่ดีที่สุด เรืองแสงด้วยกิจกรรม gfpuv รวบรวมจากสื่อเหมือนกันว่า gfpuv บริสุทธิ์โดยวิธีปกติ เซลล์แตกเพื่อการย่อย โดย vanx เป็นเรื่องง่ายมากที่จะใช้และจะได้อย่างมีประสิทธิภาพกว่าวิธีแบบดั้งเดิม