The S-Tbr and Taq DNA polymerases w

The S-Tbr and Taq DNA polymerases were used for PCR. S-Tbr is an engineered polymerase where the N-terminal 5′-3′ exonuclease domain of Thermus brockianus DNA polymerase I has been removed and replaced by the 7-kDa double-stranded DNA-binding protein Sso7d from Sulfolobus solfataricus . Oligonucleotide primers were synthesized by Operon or Integrated DNA Technologies . PCR was performed in 20 or 30 μl with sterile, nucleic acid-free water, 1× Taq polymerase reaction buffer (10 mM Tris-HCl, 1.5 mM MgCl2, 5 mM KCl, pH 8.3 at 20°C), 200 μM each deoxynucleoside triphosphate, 0.75 U of polymerase, and primers at a concentration of 10 pmol/μl. PCR components were mixed on ice before placing them in a thermocycler preheated to 80°C. PCR samples were incubated at 95°C for 120 s; thermally cycled 30 times at 94°C for 5 s, 40 to 50°C for 40 s, and 72°C for 60 s; and finally incubated at 72°C for 600 s. Unless otherwise noted in the text and figures, an annealing temperature of 40°C was used. MJ Research PTC-100, PTC-200, and Tetrad PTC-225 thermocyclers were used for thermal cycling.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

s-TBR และ taq polymerases ดีเอ็นเอถูกนำมาใช้เพื่อ pcr s-TBR เป็นโพลิเมอร์วิศวกรรมที่ n-ขั้ว 5'-3 'exonuclease โดเมนของ thermus brockianus dna โพลิเมอร์ที่ฉันได้ถูกลบออกไปและแทนที่ด้วยเกลียวคู่ดีเอ็นเอมัด sso7d โปรตีน 7-kda จาก Sulfolobus solfataricus ไพรเมอร์ oligonucleotide ถูกสังเคราะห์โดย operon หรือบูรณาการเทคโนโลยีดีเอ็นเอpcr ได้ดำเนินการใน 20 หรือ 30 ไมโครลิตรที่มีการฆ่าเชื้อน้ำกรดนิวคลีอิก 1 × taq บัฟเฟอร์ปฏิกิริยาโพลิเมอร์ (10 มิลลิเมตร tris-hcl 1.5 มม. MgCl2, 5 มม. kcl, ph 8.3 ที่ 20 ° C), 200 ไมโครเมตรแต่ละ deoxynucleoside triphosphate 0.75 u ของโพลิเมอร์และไพรเมอร์ที่มีความเข้มข้นจาก 10 pmol / ไมโครลิตร ส่วนประกอบ pcr ผสมบนน้ำแข็งก่อนที่จะวางไว้ใน thermocycler อุ่นถึง 80 องศาเซลเซียสpcr ตัวอย่างที่ถูกบ่มที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 120 วินาที; ความร้อนกรณื 30 ครั้งที่ 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 วินาที, 40 ถึง 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 40 วินาที, และ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 60 วินาที; และบ่มจนได้ที่ 72 องศาเซลเซียส 600 s ยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นในข้อความและตัวเลขอุณหภูมิการหลอมจาก 40 องศาเซลเซียสถูกนำมาใช้ MJ วิจัย PTC-100, PTC-200 และ tetrad PTC-225 thermocyclers ถูกนำมาใช้สำหรับการขี่จักรยานร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

S Tbr และ Taq DNA polymerases ถูกใช้สำหรับ PCR S Tbr เป็นพอลิเมอเรสการออกแบบที่โดเมน exonuclease 5′-3′ N-เทอร์มินัลของ Thermus brockianus ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสฉันได้ถูกเอาออก และแทนที่ ด้วย 7-kDa คู่-stranded DNA รวมโปรตีน Sso7d จาก Sulfolobus solfataricus มีสังเคราะห์ oligonucleotide ไพรเมอร์ โดย Operon หรือดีเอ็นเอเทคโนโลยี ทำ PCR ใน 20 หรือ 30 μl น้ำกอซ ปราศจากกรดนิวคลีอิก 1 การปฏิกิริยาพอลิเมอเรส Taq บัฟเฟอร์โนซีนไตร (10 mM ตรี-HCl, 1.5 มม. MgCl2, 5 mM KCl, pH 8.3 ที่ 20° C), 200 μM deoxynucleoside ฟอสเฟต 0.75 U ของพอลิเมอเรส และไพรเมอร์ที่ความเข้มข้นของ 10 pmol μl ส่วน PCR ได้ผสมในน้ำแข็งก่อนวางใน thermocycler preheated ถึง 80 องศาเซลเซียส ตัวอย่างของ PCR ได้ incubated ที่ 95° C สำหรับ 120 s แพล้ม 30 ครั้งที่ 94° C สำหรับ 5 s, 40-50° C สำหรับ 40 s และ 72° C 60 s และสุดท้าย incubated ที่ 72° C สำหรับ 600 s. เว้นแต่จะระบุเป็น ข้อความและตัวเลข 40° C อุณหภูมิการหลอมใช้ MJ วิจัย PTC-100, PTC 200 และ Tetrad PTC-225 thermocyclers ถูกใช้สำหรับการขี่จักรยานความร้อน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ดีเอ็นเอ polymerases S - TBR และ taq ที่ถูกนำไปใช้เพื่อ pcr. S - TBR เป็นการออกแบบ polymerase ที่ N - อาคารโดยสาร 5 - 3 '' exonuclease โดเมนของดีเอ็นเอ thermus brockianus polymerase ผมได้ถูกถอดออกแล้วและถูกแทนที่ด้วย 7 - kda ดับเบิลคลิกที่สายตีเกลียวดีเอ็นเอ - มีผลผูกพันโปรตีน SSO 7 d จาก sulfolobus solfataricus . primers oligonucleotide สังเคราะห์ความถี่ได้โดย operon หรือดีเอ็นเอเทคโนโลยีแบบอินทิเกรตpcr ได้ดำเนินการใน 20 หรือ 30 μl ฆ่าเชื้อขวดนมด้วย,อยู่กรด - แบบไม่เสียค่าบริการน้ำ, 1 × taq polymerase ปฏิกริยา Buffer ( 10 มม.ผลิตไฟฟ้าราชบุรีโฮลดิ้งจำกัด - HCL /, 1.5 มม. mgcl2 , 5 มม. kcl , pH 8.3 ที่ 20 ° C ), 200 μ m แต่ละ deoxynucleoside triphosphate , 0.75 U ของ polymerase ,และ primers ที่ที่การรวมศูนย์ของ 10 pmol / μl. คอมโพเนนต์ pcr มาบนน้ำแข็งก่อนที่จะอุ่นไว้ thermocycler ที่ไปที่ 80 ° Cpcr ตัวอย่างเป็น incubated ที่ 95 ° C สำหรับ 120 s ;ระบบระบายอากาศหมุนเวียน 30 ครั้งที่ 94 ° C สำหรับ 5 S , 40 ถึง 50 ° C 40 S และ 72 ° C 60 s ;และสุดท้าย incubated ที่ 72 ° C สำหรับ 600 S . เว้นแต่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นในข้อความและตัวเลข อุณหภูมิ annealing ที่ 40 ° C ได้ถูกใช้ MJ การวิจัย PTC PTC Model XT - 200 - 100 และ tetrad PTC -225 thermocyclers ได้ถูกนำมาใช้สำหรับการขี่จักรยานระบายความร้อน.