AbstractA simplified protocol for t

Abstract

A simplified protocol for the identification of Plasmodium species by semi-nested multiplex polymerase chain reaction (SnM-PCR) in human blood samples is compared with microscopical examination of thin and thick blood films in 2 field trials in Côte d'Ivoire and Cameroon. Also, dried blood spots or liquid blood collected from Dutch soldiers returning from Goma, Zaire (n = 141), Angola (n = 40), and from Marechaussee (Dutch border police) returning from various parts of the world (n = 161) were examined, together with miscellaneous other material obtained from laboratories and hospitals. The method is based on features of the small subunit nuclear ribosomal ribonucleic acid (RNA) gene (ssrDNA), a multicopy gene which possesses both highly conserved domains and domains characteristic for each of the 4 human malaria parasites. The first reaction of the SnM-PCR includes a universal reverse primer with 2 forward primers specific for Plasmodium and mammals, respectively. The mammalian-specific primer was included as a positive control to distinguish uninfected cases from simple PCR failures. The second PCR reaction includes a Plasmodium-specific forward primer plus species-specific reverse primers for P. vivax, P. ovale, P. falciparum and P. malariae. The technique worked better with samples collected in the field as dried blood spots on filter paper and heparinized blood rather than with frozen pelleted blood; it was more sensitive and more specific than the standard microscopical examination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อโพรโทคอลที่เรียบง่ายสำหรับการระบุชนิดพลาสโมเดียมโดยพอลิเมอเรส multiplex กึ่งซ้อนปฏิกิริยาลูกโซ่ (SnM PCR) ในตัวอย่างเลือดมนุษย์ถูกเปรียบเทียบกับการตรวจฟิล์มเลือดบาง และหนา microscopical ในการทดลองระดับ 2 ฟิลด์ในประเทศโกตดิวัวร์และแคเมอรูน ยัง เก็บจุดเลือดแห้งหรือเลือดของเหลวจากความจาก Goma, Zaire ทหารดัตช์ (n = 141), แองโกลา (n = 40), และ Marechaussee (ตำรวจชายแดนดัตช์) กลับจากส่วนต่าง ๆ ของโลก (n = 161) ได้ตรวจสอบ พร้อมเบ็ดเตล็ด วัสดุอื่น ๆ ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการและโรงพยาบาล วิธีการขึ้นอยู่กับลักษณะการทำงานของยีนนิวเคลียร์ ribosomal กรด ribonucleic (อาร์เอ็นเอ) ย่อยขนาดเล็ก (ssrDNA) ยีน multicopy ซึ่งมีทั้งสูงอาศัยลักษณะของโดเมนและโดเมนสำหรับแต่ละของปรสิตมาลาเรียมนุษย์ 4 ปฏิกิริยาแรกของ SnM-PCR ประกอบด้วยสีรองพื้นกลับสากลกับ 2 ไปข้างหน้าไพรเมอร์เฉพาะเดียมและเลี้ยงลูกด้วยนม ตามลำดับ รองพื้นเฉพาะ mammalian เป็นตัวควบคุมบวกเพื่อแยกเชื้อกรณีจากความล้มเหลวของ PCR ที่ง่ายขึ้น ปฏิกิริยา PCR ที่สองรวมเป็นรองพื้นไปข้างหน้าเดียมเฉพาะไพรเมอร์กลับ species-specific P. vivax, P. ovale, P. falciparum และ P. malariae เทคนิคการทำงานดีขึ้น ด้วยตัวอย่างที่เก็บในฟิลด์เป็นแห้งจุดเลือด บนกระดาษกรองและเลือด heparinized แทน ด้วย เลือด pelleted แช่แข็ง มีความไวมาก และเฉพาะเจาะจงมากขึ้นกว่ามาตรฐาน microscopical สอบได้

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อโปรโตคอลที่เรียบง่ายสำหรับการระบุชนิดของ Plasmodium โดยกึ่งซ้อนปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอ multiplex (SNM-PCR) ในตัวอย่างเลือดของมนุษย์เปรียบเทียบกับการตรวจสอบของภาพยนตร์จุลเลือดบางและหนา 2 การทดลองภาคสนามในโกตดิวัวร์และแคเมอรูน นอกจากนี้จุดที่แห้งเลือดหรือของเหลวในเลือดที่เก็บมาจากทหารชาวดัตช์ที่กลับมาจาก Goma ซาอีร์ (n = 141), แองโกลา (n = 40) และจาก Marechaussee (เนเธอร์แลนด์ตำรวจตระเวนชายแดน) กลับมาจากส่วนต่างๆของโลก (n = 161) มีการตรวจสอบร่วมกับวัสดุอื่น ๆ อื่น ๆ ที่ได้รับจากห้องปฏิบัติการและโรงพยาบาล วิธีการจะขึ้นอยู่กับคุณสมบัติของหน่วยย่อยขนาดเล็กนิวเคลียร์โซมอลกรด ribonucleic (RNA) ยีน (ssrDNA) ยีน multicopy ซึ่งมีคุณสมบัติทั้งสองโดเมนอนุรักษ์สูงและลักษณะโดเมนสำหรับแต่ละปรสิตมาลาเรียมนุษย์ 4 ปฏิกิริยาแรกของ SNM-PCR มีไพรเมอร์สากลย้อนกลับไปข้างหน้ามี 2 ไพรเมอร์ที่เฉพาะเจาะจงสำหรับ Plasmodium และเลี้ยงลูกด้วยนมตามลำดับ ไพรเมอร์เลี้ยงลูกด้วยนมที่เฉพาะเจาะจงถูกรวมเป็นตัวควบคุมในเชิงบวกที่จะแยกแยะกรณีที่ไม่ติดเชื้อจากความล้มเหลว PCR ง่าย ปฏิกิริยา PCR สองมีไพรเมอร์ไปข้างหน้า Plasmodium เฉพาะรวมทั้งสายพันธุ์เฉพาะไพรเมอร์กลับสำหรับพี vivax, P. ovale พี falciparum และ P. malariae เทคนิคการทำงานที่ดีขึ้นกับตัวอย่างที่เก็บรวบรวมในสนามเป็นจุดเลือดแห้งบนกระดาษกรองและเลือด heparinized มากกว่าด้วยเลือดเม็ดแช่แข็ง; มันก็มากขึ้นที่สำคัญและเฉพาะเจาะจงมากขึ้นกว่าการตรวจสอบจุลมาตรฐาน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม

ง่ายพิธีสารเพื่อระบุตัวตนของพลาสโมเดียม ชนิดกึ่งซ้อนกันโดยปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอร์เรส ( SNM multiplex PCR ) ในตัวอย่างเลือดของมนุษย์เมื่อเทียบกับการตรวจทางกล้องจุลทรรศน์ของบางและหนาฟิล์มโลหิตใน 2 การทดลองภาคสนามในสาธารณรัฐโกตดิวัวร์ และแคเมอรูน นอกจากนี้ จุดเลือดหรือของเหลวเลือดที่เก็บจากทหารดัตช์กลับมาจากยางแห้ง , ซาอีร์ ( n = 141 )แองโกลา ( n = 40 ) , และจาก marechaussee ( ตำรวจชายแดนดัตช์ ) กลับมาจากส่วนต่างๆของโลก ( n = 161 ) โดยทำการศึกษาร่วมกับเบ็ดเตล็ดอื่น ๆ วัสดุที่ได้จากห้องปฏิบัติการและโรงพยาบาล โดยอาศัยคุณสมบัติของนิวเคลียร์ไรโบโซมหน่วยเล็ก ๆใน acid ( RNA ) ยีน ( ssrdna )เป็น multicopy ยีนที่ครบถ้วนทั้งโดเมนและโดเมนที่มีการอนุรักษ์ลักษณะทั้ง 4 ด้านมาลาเรียปรสิต ปฏิกิริยาแรกของ SNM PCR ไพรเมอร์ย้อนกลับสากลรวมถึงมี 2 ชนิดที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการส่งต่อและสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม ตามลำดับไพรเมอร์เฉพาะ mammalian คือรวมเป็นตัวควบคุมบวกแยกแยะคดีมาก่อน จากความล้มเหลวโดยง่าย ปฏิกิริยา PCR 2 รวมถึงการส่งต่อรองพื้นไพรเมอร์กลับบวกเฉพาะเผ่าพันธุ์ - เฉพาะสำหรับหน้าไวแวกซ์ , หน้ารูปไข่ , หน้ามาลาเรีย , ไข้จับสั่น .เทคนิคได้ดีด้วยการเก็บตัวอย่างในสนามแห้งจุดเลือดบนกระดาษกรอง และกลุ่มเลือดมากกว่าเลือดอัดเม็ดแข็ง มันมีความไวและเฉพาะเจาะจงมากขึ้นกว่าการตรวจสอบ
สมุนไพรมาตรฐาน