Fresh bulbs (2 kg) of N. broussonet

Fresh bulbs (2 kg) of N. broussonetii were macerated thoroughly with MeOH at room temperature for 48 h (4× 2.0 l), then the combined macerate was filtered and the solvent evaporated to dryness under reduced pressure. The bulb crude extract (70.7 g) was acidified to pH 3with dilute H2SO4 (2%, v/v) and the neutralmaterial was removed using Et2O (4× 500ml). EtOAc (4× 500ml) was used to carry out a first alkaloid extraction in acid media but with negative results. The aqueous solution was basified up to pH 9–10 with NH3 (25%, v/v) and extracted with n-Hex (5× 500ml) to give the n-Hex extract (274mg), followed by extraction with EtOAc (7× 500ml) to provide the EtOAc extract (1.2 g). Finally, the basic solution was extracted with anEtOAc–MeOH mixture (3:1) but no alkaloids were detected. A rapid alkaloid extraction was performed using 50mg of dried bulbs from Narcissus cultivars ‘Toto’ and ‘Pencrebar’ in screw-top 1.5ml Eppendorf tubes (6 tubes for each cultivar). The maceration procedure was carried out with 1ml ofMeOH adjusted to pH 8 with NH3 (25%, v/v). After 2 h of extraction at room temperature assisted by 15min ultrasonic baths every 30min, the samples were centrifuged at 10,000 rpm for 2min. Three tubes of each cultivar were used for alkaloid extraction as follows: 500 ?l aliquots of methanolic macerate were acidified with 750 ?l of H2SO4 (2%, v/v) and the neutral material was removed with CHCl3 (3× 700 ?l). The aqueous fraction was then basified with 250 ?l of NH3 (25%, v/v) and the alkaloids were extracted with CHCl3 (3× 700 ?l). Finally, the purified alkaloid extract was dried under N2 and re-dissolved in 300 ?l of CHCl3 for GC–MS analysis. The alkaloid extraction of Narcissus cultivars was carried out to confirm the presence of tazettine by GC–MS. The other three glass tubes for each cultivar were reserved for the derivatization process, transferring aliquots of 500 ?l to vials to be dried under N2. The derivatization method is explained below in Section

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หลอดสด (2 กิโลกรัม) n broussonetii ถูกหมักให้สะอาดด้วยเมธานอลที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 48 ชั่วโมง (4 × 2.0 ลิตร) จากนั้นเปื่อยรวมถูกกรองและตัวทำละลายที่ระเหยจนแห้งภายใต้ความกดดันที่ลดลง สารสกัดหยาบหลอด (70.7 กรัม) คือกรดที่ pH 3with เจือจาง H2SO4 (2% v / v) และ neutralmaterial จะถูกลบออกโดยใช้ Et2O (4 × 500ml)EtOAc (4 × 500ml) ถูกนำมาใช้ในการดำเนินการสกัดด่างครั้งแรกในสื่อกรด แต่มีผลเป็นลบ สารละลายถูก basified ขึ้นไป 9-10 ph กับ NH3 (25% v / v) และสกัดด้วย n ฐานสิบหก (5 × 500ml) เพื่อให้สารสกัด n-เลขฐานสิบหก (274mg) ตามด้วยการสกัดด้วย EtOAc (7 × 500ml) เพื่อให้สารสกัด EtOAc (1.2 กรัม) ในที่สุด,การแก้ปัญหาขั้นพื้นฐานถูกสกัดที่มีส่วนผสม anetoac-เมธานอล (03:01) แต่ลคาลอยด์ไม่ถูกตรวจพบ การสกัดด่างอย่างรวดเร็วได้รับการดำเนินการโดยใช้ 50mg ของหลอดแห้งจากสายพันธุ์ดอกนาซิสซัส 'โตโต้' และ 'Pencrebar ในสกรูบนหลอด 1.5mL Eppendorf (6 หลอดสำหรับพันธุ์แต่ละครั้ง) ขั้นตอนการเปื่อยยุ่ยได้ดำเนินการกับ ofmeoh 1ml ปรับ pH 8 กับ NH3 (25% v / v)หลังจาก 2 ชั่วโมงของการสกัดที่อุณหภูมิห้องโดยอาศัยความช่วยเหลือ 15min ห้องอาบน้ำล้ำ 30min ทุกตัวอย่างถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2min สามหลอดแต่ละพันธุ์ถูกนำมาใช้ในการสกัดสารดังต่อไปนี้: 500 aliquots l เปื่อยของเมธานอลเป็นกรด 750 ลิตร H2SO4 (2% v / v) และวัสดุที่เป็นกลางจะถูกลบออกด้วย chcl3 (3 × 700 l? )เศษส่วนน้ำถูก basified แล้วกับ 250 ลิตร NH3 (25% v / v) และลคาลอยด์ที่ได้รับการสกัดด้วย chcl3 (3 × 700 ลิตร) ในที่สุดสาร​​สกัดบริสุทธิ์ด่างแห้งภายใต้ N2 และอีกละลายใน 300 ลิตร chcl3 สำหรับการวิเคราะห์ GC-MS การสกัดสารจากสายพันธุ์ดอกนาซิสซัสได้รับการดำเนินการเพื่อยืนยันต่อหน้า tazettine โดย GC-MSอีกสามหลอดแก้วสำหรับพันธุ์แต่ละถูกสงวนไว้สำหรับกระบวนการอนุพันธ์การถ่ายโอน aliquots ของ 500 ลิตรที่ขวดจะแห้งภายใต้ N2 วิธีอนุพันธ์จะมีการอธิบายด้านล่างในส่วน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

หลอดสด (2 กก.) ของ broussonetii ตอนเหนือถูก macerated อย่างกับทานอที่อุณหภูมิห้องใน 48 h (4 × 2.0 l), แล้ว macerate รวม filtered และตัวทำละลายหายไปกับความแห้งกร้านภายใต้ความดันลดลง Acidified เป็นสารสกัดหยาบของหลอด (70.7 กรัม) กับค่า pH 3with dilute กำมะถัน (2%, v/v) และ neutralmaterial จะถูกเอาออกโดยใช้ Et2O (4 × 500 ml) EtOAc (4 × 500 ml) ถูกใช้เพื่อดำเนินการแยกเป็นอัลคาลอยด์ first สื่อกรด แต่ มีผลเชิงลบ การละลายคือ basified ถึง 9–10 ค่า pH กับ NH3 (25%, v/v) และแยกกับ n-Hex (5 × 500 ml) ให้สารสกัด n Hex (274 มก.), ตาม ด้วยการสกัดด้วย EtOAc (7 × 500 ml) ให้สารสกัด EtOAc (1.2 กรัม) สุดท้าย การแก้ปัญหาพื้นฐานถูกสกัด ด้วยส่วนผสม anEtOAc–MeOH (3:1) แต่ alkaloids ไม่พบ สกัดอัลคาลอยด์อย่างรวดเร็วที่ดำเนินการโดยใช้ 50 มิลลิกรัมของหลอดแห้งจากนาร์ซีซัสพันธุ์ 'Toto' และ 'Pencrebar' ในสกรูด้านบน 1.5ml Eppendorf หลอด (หลอด 6 สำหรับแต่ละ cultivar) วิธี maceration ถูกดำเนินการ ด้วย ofMeOH 1 มล.ปรับ pH 8 กับ NH3 (25%, v/v) หลังจาก h 2 ของสกัดที่อุณหภูมิห้องด้วยการอาบน้ำ 15 นาทีอัลตราโซนิกทุก 30 นาที ตัวอย่างถูก centrifuged ที่ 10000 รอบต่อนาทีใน 2 นาที หลอดสามของ cultivar แต่ละใช้สำหรับสกัดอัลคาลอยด์ดัง: 500 ? l aliquots ของ methanolic macerate ได้ acidified กับ 750 ? l ของกำมะถัน (2%, v/v) และวัสดุที่เป็นกลางถูกเอากับ CHCl3 (3 × 700 ? l) เศษอควีถูกแล้ว basified กับ 250 ? l ของ NH3 (25%, v/v) และ alkaloids ถูกสกัด ด้วย CHCl3 (3 × 700 ? l) สุดท้าย สกัดอัลคาลอยด์ purified แห้งใต้ N2 และละลายอีกครั้งใน 300 ? l CHCl3 GC–MS วิเคราะห์ สกัดอัลคาลอยด์ของนาร์ซีซัสพันธุ์ได้ถูกนำออกไป confirm ของ tazettine โดย GC–MS อื่น ๆ แก้วสามหลอดสำหรับแต่ละ cultivar ถูกสงวนไว้สำหรับกระบวนการ derivatization การโอนย้าย aliquots 500 ? l เพื่อ vials ให้แห้งภายใต้ N2 วิธี derivatization จะอธิบายด้านล่างในส่วน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

สดหลอดไฟ( 2 กก.)ของ broussonetii n มี macerated อย่างทั่วถึงด้วย meoh ที่ อุณหภูมิ ห้องสำหรับ 48 ชั่วโมง( 4 × 2.0 L )แล้ว macerate รวมกันแล้วเป็น filtered และตัวทำละลายที่ระเหยหายไปทำให้แห้ง ภายใต้ ความดันลดลง หลอดน้ำมันดิบดึง( 70.7 กรัม)เป็น acidified เพื่อ pH 3 พร้อมด้วยเจือ H 2 ดังนั้น 4 ( 2% , v / v )และ neutralmaterial ถูกลบออกโดยใช้ et 2 O ( 4 × 500 มล.)etoac ( 4 × 500 มล.)ถูกใช้ในการพกพาออกมาสกัดแอล - คะลอยด first ในสื่อกรดแต่พร้อมด้วยผลในทางลบ โซลูชันที่เกิดจากน้ำที่เป็น basified ถึง pH 9 - 10 พร้อมด้วย NH 3 ( 25% , v / v )และดึงขึ้นมาพร้อมด้วย N - เลขฐานสิบหก( 5 × 500 มล.)ให้ N - เลขฐานสิบหกดึง( 274 มก.),ตามด้วยการขุดด้วย etoac ( 7 × 500 มล.)เพื่อจัดให้บริการ etoac ดึง( 1.2 G ) ในที่สุดโซลูชันขั้นพื้นฐานที่สกัดพร้อมด้วยการผสมผสาน aneto ac-me โอ( 3 : 1 )แต่ไม่มี alkaloids ถูกตรวจพบ แอล - คะลอยดอย่างรวดเร็วการขุดได้ดำเนินการโดยใช้ 50 มก.ของแห้งหลอดไฟจากนาร์ซิสซัส cultivars 'ทั้ง'และ' pencrebar 'ในแบบสกรูบน 1.5 มล. eppendorf ท่อดูด( 6 หลอดสำหรับแต่ละ cultivar ) ขั้นตอน maceration นั้นไปด้วย 1 ofmeoh มล.ปรับให้ค่า pH 8 พร้อมด้วย NH 3 ( v 25% v /)หลังจากที่เวลาผ่านไป 2 ชั่วโมงของการขุดเจาะที่ อุณหภูมิ ห้องความช่วยเหลือโดย 15 อ่างอาบน้ำอัลตราโซนิคนาที 30 นาทีทุกตัวอย่างที่เป็น centrifuged ที่ 10 , 000 รอบต่อนาทีสำหรับ 2 นาที สามท่อของแต่ละ cultivar ถูกนำไปใช้เพื่อการขุดเจาะแอล - คะลอยดเป็นดังนี้ 500 ? L aliquots ของ methanolic macerate เป็น acidified พร้อมด้วย 750 ? L ของ H 2 SO 4 ( 2% , v / v )และที่เป็นกลางได้ถูกลบออกแล้วพร้อมด้วยวัสดุ chcl 3 ( 3 × 700 ? L )ส่วนที่เกิดจากน้ำก็ basified พร้อมด้วย 250 ? L ของ NH 3 ( v 25% v /)และ alkaloids ได้ถูกแยกออกมาพร้อมด้วย chcl 3 ( 3 × 700 ? L ) สุดท้ายคือแอล - คะลอยด purified แยกเป็นแห้งใน n 2 และอีกครั้งที่ละลายได้ใน 300 ? L ของ chcl 3 สำหรับการวิเคราะห์เฉพาะรุ่น GC - MS การดึงถอนแอล - คะลอยดของ cultivars นาร์ซิสซัสก็ออกมา confirm การมีอยู่ของ tazettine โดยเฉพาะรุ่น GC - น.ส.สามท่อแก้วอื่นๆได้สำหรับ cultivar แต่ละตัวมีเฉพาะสำหรับขั้นตอนการโอน aliquots derivatization 500 ? L ถึง vials จะแห้งใน n 2 วิธีการ derivatization มีอธิบายไว้ทางด้านล่างในส่วน