The synthesis of DNA from an RNA te

The synthesis of DNA from an RNA template, via reverse transcription, produces complementary DNA (cDNA). Reverse transcriptases (RTs) use an RNA template and a short primer complementary to the 3' end of the RNA to direct the synthesis of the first strand cDNA, which can be used directly as a template for the Polymerase Chain Reaction (PCR). This combination of reverse transcription and PCR (RT-PCR) allows the detection of low abundance RNAs in a sample, and production of the corresponding cDNA, thereby facilitating the cloning of low copy genes. Alternatively, the first-strand cDNA can be made double-stranded using DNA Polymerase I and DNA Ligase. These reaction products can be used for direct cloning without amplification. In this case, RNase H activity, from either the RT or supplied exogenously, is required.

Many RTs are available from commercial suppliers. Avian Myeloblastosis Virus (AMV) Reverse Transcriptase and Moloney Murine Leukemia Virus (M-MuLV, MMLV) Reverse Transcriptase are RTs that are commonly used in molecular biology workflows. M-MuLV Reverse Transcriptase lacks 3´ → 5´ exonuclease activity. ProtoScript® II Reverse Transcriptase is a recombinant M-MuLV reverse transcriptase with reduced RNase H activity and increased thermostability. It can be used to synthesize first strand cDNA at higher temperatures than the wild-type M-MuLV. The enzyme is active up to 50°C, providing higher specificity, higher yield of cDNA and more full-length cDNA product, up to 12 kb in length.

The use of engineered RTs improves the efficiency of full-length product formation, ensuring the copying of the 5' end of the mRNA transcript is complete, and enabling the propagation and characterization of a faithful DNA copy of an RNA sequence. The use of the more thermostable RTs, where reactions are performed at higher temperatures, can be very helpful when dealing with RNA that contains high amounts of secondary structure.

For help comparing the RTs and cDNA Synthesis reagents available, view our RT/cDNA Synthesis selection chart.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

การสังเคราะห์ดีเอ็นเอจากอาร์เอ็นเอแม่แบบที่มี ผ่านการถอดรหัสย้อนกลับ สร้างเสริมดีเอ็นเอ (cDNA) ย้อนกลับ transcriptases (RTs) ใช้แบบ RNA และรองพื้นสั้นประกอบกับปลาย 3' ของ RNA ที่ตรงการสังเคราะห์ cDNA สาระแรก ซึ่งสามารถใช้เป็นแม่แบบโดยตรงสำหรับการเกิดปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (PCR) ชุดของการถอดรหัสย้อนกลับและ PCR (RT-PCR) นี้ช่วยให้การตรวจสอบของความอุดมสมบูรณ์ต่ำ RNAs ในตัวอย่าง ผลิตของ cDNA ที่สอดคล้องกัน การโคลนยีนสำเนาต่ำผันผวน อีกวิธีหนึ่งคือ cDNA สาระแรกสามารถทำได้สองครั้งที่ควั่นโดยใช้ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสผมและ DNA Ligase ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาเหล่านี้สามารถใช้สำหรับการโคลนโดยตรงโดยไม่ต้องขยาย ในกิจกรรม RNase H นี้กรณี จาก RT อย่างใดอย่างหนึ่ง หรือให้มา exogenously จำเป็นมีหลาย RTs จากซัพพลายเออร์ค้า นกไวรัส Myeloblastosis (เอ็ม) ปเทปเท Moloney Murine ไวรัสมะเร็งเม็ดเลือดขาว (M MuLV, MMLV) ด้วย RTs ที่ใช้กันทั่วไปในลำดับงานอณูชีววิทยา M MuLV ปเทขาดกิจกรรม exonuclease 3´ → 5´ ProtoScript® II ปเทสคือ M MuLV ปเทเป็น recombinant RNase H ลดกิจกรรมและ thermostability เพิ่มขึ้น สามารถใช้ในการสังเคราะห์ cDNA สาระแรกที่อุณหภูมิสูงกว่าป่าชนิดม-MuLV เอนไซม์นี้จะใช้งานได้ถึง 50° C ให้ความจำเพาะที่สูงขึ้น ผลตอบแทนสูงของ cDNA และผลิตภัณฑ์ cDNA แบบเต็มตัวมากขึ้น ความยาวถึง 12 กิโลการใช้วิศวกรรม RTs ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพในการสะสมสินค้าแบบเต็มตัว สร้างการคัดลอกปลาย 5' mRNA รายงานผลการศึกษาสมบูรณ์ และเปิดใช้งานการเผยแพร่และสมบัติของสำเนาดีเอ็นเอซื่อสัตย์ของ RNA มีลำดับ ใช้ RTs thermostable มาก ที่ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิสูง สามารถเป็นประโยชน์เมื่อทำงานกับอาร์เอ็นเอที่ประกอบด้วยปริมาณสูงของโครงสร้างรองสำหรับความช่วยเหลือเปรียบเทียบ RTs และ reagents สังเคราะห์ cDNA ที่มี ดูแผนภูมิของเราเลือกสังเคราะห์ RT/cDNA

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การสังเคราะห์ดีเอ็นเอจากแม่แบบ RNA ผ่านถอดรหัสแบบย้อนกลับ, ผลิตดีเอ็นเอเสริม (ยีน) ย้อนกลับ transcriptases (RTS) การใช้แม่แบบอาร์เอ็นเอและไพรเมอร์สั้นประกอบกับปลาย 3 'ของ RNA โดยตรงสังเคราะห์ cDNA Strand แรกซึ่งสามารถนำมาใช้โดยตรงเป็นแม่แบบสำหรับ Polymerase Chain Reaction ที่ (PCR) การรวมกันของการถอดรหัสย้อนกลับและ PCR (RT-PCR) นี้จะช่วยให้การตรวจสอบของ RNAs ความอุดมสมบูรณ์ต่ำในตัวอย่างและการผลิตของยีนที่เกี่ยวข้องจึงอำนวยความสะดวกการโคลนยีนสำเนาต่ำ ผลัดกัน cDNA แรกสาระสามารถทำเกลียวคู่โดยใช้ DNA Polymerase ฉันและ DNA ligase ผลิตภัณฑ์ปฏิกิริยาเหล่านี้สามารถนำมาใช้สำหรับการโคลนโดยตรงโดยไม่ต้องใช้เครื่องขยายเสียง ในกรณีนี้กิจกรรม H RNase จากทั้ง RT หรือให้มาจากภายนอกเป็นสิ่งจำเป็น.

RTS จำนวนมากจากซัพพลายเออร์ในเชิงพาณิชย์ นก Myeloblastosis Virus (AMV) ย้อนกลับ Transcriptase และ Moloney หนูไวรัสมะเร็งเม็ดเลือดขาว (M-MuLV, MMLV) ย้อนกลับ Transcriptase เป็น RTS ที่ใช้กันทั่วไปในเวิร์กโฟลว์อณูชีววิทยา M-MuLV ย้อนกลับ Transcriptase ขาดกิจกรรม 3'→ 5'exonuclease ProtoScript® II ย้อนกลับ Transcriptase เป็น recombinant M-MuLV reverse transcriptase กับกิจกรรม RNase H ลดลงและทนต่อความร้อนที่เพิ่มขึ้น มันสามารถใช้ในการสังเคราะห์ cDNA Strand แรกที่อุณหภูมิสูงกว่าชนิดป่า M-MuLV เอนไซม์ที่มีการใช้งานได้ถึง 50 ° C ให้ความจำเพาะสูงกว่าอัตราผลตอบแทนที่สูงขึ้นของยีนและผลิตภัณฑ์ยีนยาวเต็มรูปแบบมากขึ้นถึง 12 KB. ความยาว

การใช้งานของ RTS Engineered ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการก่อสินค้ายาวเต็มรูปแบบที่สร้างความมั่นใจ คัดลอกของปลาย 5 'ของ mRNA หลักฐานเสร็จสมบูรณ์และเปิดใช้งานการขยายพันธุ์และลักษณะของสำเนาดีเอ็นเอที่ซื่อสัตย์ของลำดับอาร์เอ็นเอ การใช้งานของ RTS ที่ทนความร้อนมากขึ้นซึ่งปฏิกิริยาจะดำเนินการที่อุณหภูมิที่สูงขึ้นจะมีประโยชน์มากเมื่อต้องรับมือกับอาร์เอ็นเอที่มีปริมาณสูงของโครงสร้างทุติยภูมิ.

สำหรับความช่วยเหลือในการเปรียบเทียบ RTS และสารเคมียีนสังเคราะห์สารที่มีอยู่ให้ดูการเลือก RT / ยีนสังเคราะห์ของเรา แผนภูมิ.

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การสังเคราะห์ DNA RNA จากแม่แบบทางย้อนกลับถอดความ สร้างเสริม DNA ( cDNA ) ย้อนกลับ transcriptases ( RTS ) ใช้แม่แบบ RNA และสั้น ไพรเมอร์ ประกอบกับ 3 ' สุดท้ายของ RNA โดยการสังเคราะห์ cDNA เส้นก่อน , ซึ่งสามารถใช้โดยตรงเป็นแม่แบบสำหรับการใช้ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส ( พีซีอาร์ ) การรวมกันของการถอดความย้อนกลับ ( RT-PCR ) และ PCR ช่วยให้ตรวจหาต่ำความอุดมสมบูรณ์ RNAs ในตัวอย่างและการผลิตของ cDNA ที่สอดคล้องกัน จึงเอื้อต่อการโคลนยีนคัดลอกต่ำ อีกวิธีหนึ่งคือ วิธีแรกที่สามารถทำให้คู่ที่ควั่นเกลียวใช้ DNA polymerase I และไลเกส ดีเอ็นเอ ปฏิกิริยาของผลิตภัณฑ์เหล่านี้สามารถใช้โดยตรงโดยไม่ต้องเพิ่มจำนวนยีน . ในกรณีนี้ , เลส H กิจกรรมจากทั้ง RT หรือให้ exogenously , จะต้องหลายคน RTS จะพร้อมใช้งานจากผู้ผลิตเชิงพาณิชย์ myeloblastosis ไวรัสไข้หวัดนก ( และ ) อาการย้อนกลับและ ~ เมอโลนีย์ลูคีเมียไวรัส ( m-mulv mmlv reverse transcriptase , ) เป็น RTS ที่ใช้ทั่วไปในด้านชีววิทยาระดับโมเลกุล m-mulv reverse transcriptase ขาด 3 ใหม่→ keyboard - key - name ใหม่เอกโซนิวคลีเอส 5 กิจกรรม protoscript ® II reverse transcriptase เป็น recombinant reverse transcriptase กับลด m-mulv เลส H กิจกรรมและเพิ่มทดล . มันสามารถใช้เพื่อสังเคราะห์ cDNA ที่อุณหภูมิสูงกว่ากลุ่มแรกของ m-mulv . เอนไซม์มีการใช้งานถึง 50 องศา C ให้สูงต่อปริมาณ cDNA cDNA เต็มและผลิตภัณฑ์เพิ่มเติมได้ถึง 12 กิโลในความยาวการใช้วิศวกรรม RTS ช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการสะสมสินค้าเต็มตัว มั่นใจการคัดลอก 5 จบของหลักฐานที่สมบูรณ์ และสามารถขยายพันธุ์และการคัดลอกของ RNA DNA ที่สัตย์ซื่อตามลําดับ ใช้ RTS ในมากขึ้นที่แสดงปฏิกิริยาที่อุณหภูมิสูง จะมีประโยชน์มากเมื่อจัดการกับ RNA ที่มีปริมาณสูงของโครงสร้างทุติยภูมิช่วยเปรียบเทียบการสังเคราะห์ cDNA ของ RTS และ สารเคมีสังเคราะห์ cDNA , มุมมองของเรา RT / เลือกแผนภูมิ