Selective amplification was achieve

Selective amplification was achieved with the primers designed EcoRI and Msel digestion the sites but expanded with two and three additional nucleotides, respectively . for fluorescence diagnosis the primers for EcoRI digestion enzyme were labeled with either 5-carboxy fluorescein (5-FAM) or 5-hexachloro-fluo rescein (5-Hex), while the Msel primers were unlabeled High selectivity was obtained from implementing the following cycling profile: 94 C for 30 s, 65'C for 30 s, and 72 C for 1 min for 1 cycle and then lowering the annealing temperature by 0.7 C for each of 13 cycles to 56 C, followed by an additional 30 cycles at a 56 C annealing temperature. All PCR experiments were performed on a GeneAmp PCR System 2400 thermocycler (Applied Biosystems, Inc.). Table 2 lists the primer sequences and the fluorescent tags. PCR products (1.5-2.0 u) were mixed with 0.2 ul of an internal length standard (GenescanTM500ROxTM), denatured for 3 min at 90 Cand quickly chilled on ice. Amplification products were separated by electrophoresis using a standard 36 cm POP-7 Polymer Fragment Analysis module on an ABI Prism 3730 sequence

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เลือกขยายสำเร็จ ด้วยไพรเมอร์ที่ออกแบบมา EcoRI และ Msel ย่อยไซต์แต่ขยายกับสอง และสามเพิ่มเติมนิวคลีโอไทด์ ตามลำดับ สำหรับการวินิจฉัยเรืองแสงไพรเมอร์สำหรับเอนไซม์ EcoRI ย่อยถูกกำกับ ด้วย fluorescein คาร์บ๊อกซี่-5 (5-FAM) หรือ rescein 5-hexachloro-fluo (5-Hex), ในขณะที่ไพรเมอร์ Msel ไม่มีป้ายชื่อ เลือกสูงมาจากการใช้โพรไฟล์การขี่จักรยานต่อไปนี้: C 94 30 s, 65' C สำหรับ 30 s, 72 C 1 นาทีสำหรับรอบที่ 1 และจากนั้น ลดอุณหภูมิหลอม โดย 0.7 C สำหรับแต่ละรอบ 13 ถึง 56 C ตาม ด้วยเพิ่มเติม 30 รอบที่ C 56 ที่หลอมอุณหภูมิ การทดลองทั้งหมด PCR ได้ดำเนินการในเครื่อง thermocycler GeneAmp PCR ระบบ 2400 (ใช้ศาสตร์เชิงชีวภาพ Inc.) ตารางที่ 2 แสดงลำดับรองพื้นและแท็กฟลูออเรสเซนต์ ผลิตภัณฑ์ PCR (1.5-2.0 u) ถูกผสมกับ 0.2 ul ของความยาวภายในมาตรฐาน (GenescanTM500ROxTM), เอทิลแอลกอฮอล์ 3 นาทีที่ 90 Cand แช่เย็นในน้ำแข็งอย่างรวดเร็ว ขยายผลิตภัณฑ์ถูกแยก โดยใช้มาตรฐาน 36 ซม.โมดู POP 7 โพลิเมอร์ส่วนวิเคราะห์ลำดับ 3730 ปริซึม ABI อิ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ขยาย Selective ก็ประสบความสำเร็จด้วยไพรเมอร์ได้รับการออกแบบ EcoRI และการย่อยอาหาร Msel เว็บไซต์ แต่ขยายได้ด้วยสองและสามนิวคลีโอเพิ่มเติมตามลำดับ สำหรับการเรืองแสงวินิจฉัยไพรเมอร์สำหรับการย่อยของเอนไซม์ EcoRI มีป้ายที่มีทั้ง 5 Carboxy fluorescein (5 FAM) หรือ 5 hexachloro-Fluo rescein (5-Hex) ในขณะที่ไพรเมอร์ Msel ถูกที่ไม่มีป้ายกำกับหัวกะทิสูงที่ได้รับจากการดำเนินการขี่จักรยานต่อไปนี้ รายละเอียด: 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, 65'C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาทีสำหรับ 1 รอบแล้วลดอุณหภูมิการหลอมโดย 0.7 C สำหรับแต่ละรอบ 13 ถึง 56 องศาเซลเซียสตามด้วยอีก 30 รอบที่ อุณหภูมิการอบ 56 C ทุกการทดลอง PCR ได้ดำเนินการในระบบ GeneAmp PCR 2400 thermocycler (Applied Biosystems, Inc) ตารางที่ 2 แสดงลำดับไพรเมอร์และแท็กเรืองแสง ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ (1.5-2.0 U) ถูกผสมกับ 0.2 UL ของความยาวมาตรฐานภายใน (GenescanTM500ROxTM) แปลงสภาพเป็นเวลา 3 นาทีที่ 90 Cand ได้อย่างรวดเร็วบนน้ำแข็งแช่เย็น ผลิตภัณฑ์ amplification ถูกแยกจากกันโดย electrophoresis โดยใช้มาตรฐาน 36 ซม. โมดูล POP-7 พอลิเมอ Fragment วิเคราะห์บน ABI Prism 3730 ลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เลือกแบบสําเร็จ ด้วยไพรเมอร์ที่ออกแบบมาด้วย msel การย่อยอาหารและเว็บไซต์ แต่การขยายด้วยสองและสามนิวคลีโอไทด์เพิ่มเติมตามลำดับ สำหรับการวินิจฉัยด้วยไพรเมอร์สำหรับการย่อยอาหารจากป้ายด้วย 5-carboxy ี่ ( 5-fam ) หรือ 5-hexachloro-fluo rescein ( 5-hex ) ในขณะที่ msel ใกล้เคียงโดยเลือกได้จากการใช้สูงโปรไฟล์จักรยานต่อไปนี้ : 94 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที 65"c 30 , และ 72 องศาเซลเซียสนาน 1 นาที 1 รอบแล้ว การลดอุณหภูมิการอบอ่อนโดย 0.7 C 13 รอบแต่ละ 56 องศาเซลเซียส ตามด้วยอีก 30 รอบ ใน 56 องศาเซลเซียส อุณหภูมิการอบอ่อน . การทดลองโดยมีการปฏิบัติใน geneamp PCR ระบบ 2400 เทอร์มอไซเคล ์ ( Applied Biosystems , Inc . ) ตารางที่ 2 แสดงลำดับและแท็กสีเรืองแสง ผลิตภัณฑ์ PCR ( 1.5-2.0 U ) ผสม 0.2 UL ของความยาวมาตรฐานภายใน ( genescantm500roxtm ) ใช้สำหรับ 3 นาทีที่ 90 และได้อย่างรวดเร็วเย็นบนน้ำแข็ง ผลิตภัณฑ์ขยายแยกโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสโดยใช้มาตรฐาน 36 ซม. pop-7 พอลิเมอร์ส่วนโมดูลการวิเคราะห์เกี่ยวกับ ABI ปริซึม 940 ลำดับ