The frozen liver tissue samples fro

The frozen liver tissue samples from the four groups were homogenized and lysed
in a lysis buffer (pH 7.5) comprising 1% Triton X-100 (USB Corporation, USA),
25 mmol/L HEPES (Sigma-Aldrich), 150 mmol/L NaCl (UNIVAR, USA), 1 mmol/L EDTA
disodium salt (Sigma-Aldrich), 1 mmol/L dithiothreitol (DTT) (USB Corporation), and
1% Protease Inhibitor Cocktail Set III (Bio-Rad). The lysis samples were kept on ice
for 40 minutes and then centrifuged at 12,000× g for 30 minutes at 4 °C. To remove
the superfluous salt in the extract, 150 μL of the supernatants were mixed with 600 μL
of methanol by vortexing. In total, 150 μL of chloroform and 450 μL of ultrapure water
were added in turn; the samples were vortexed to mix well. The mixtures were centrifuged
at 12,000× g for 5 minutes. The upper phase was discarded and the white
precipitation disc was kept. Then, 450 μL of methanol was added and mixed well;
the protein pellet was obtained by centrifugation at 12,000× g for 5 min at 4 °C. After
air-drying, the protein pellet was resuspended in buffer (pH 8.0) comprised of 7 mol/L
urea (USB Corporation), 2 mol/L thiourea (Sigma-Aldrich), 100 mmol/L DTT, 5% glycerol
(USB Corporation), and 4% CHAPS (Sigma-Aldrich). The resulting protein solution
was stored at −80 °C until the 2-DE analysis. The protein concentration was determined
by the Bradford assay (Bio-Rad).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างเนื้อเยื่อตับแข็งจากกลุ่มสี่ homogenized เป็นกลุ่ม และ lysedในการ lysis บัฟเฟอร์ (pH 7.5) แห่ง 1% ไตรตั้น X-100 (USB Corporation, USA),25 mmol/L HEPES (ซิก-Aldrich), 150 mmol/L NaCl (UNIVAR สหรัฐอเมริกา), 1 mmol/L EDTAหัวเกลือ (ซิก-Aldrich), dithiothreitol 1 mmol/L (DTT) (USB Corporation), และ1% รติเอสเตอร์ค็อกเทลตั้ง III (ไบ-Rad) ตัวอย่างการ lysis ที่ถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งนาทีที่ 40 และ centrifuged ที่ 12000 × g 30 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส การเอาออกเกลือที่มีมากเกินไปในการดึงข้อมูล μL 150 ของ supernatants ถูกผสมกับ 600 μLของเมทานอลโดย vortexing รวม μL 150 ของคลอโรฟอร์มและ μL 450 น้ำ ultrapureเพิ่มกลับ ตัวอย่าง vortexed จะผสมกันได้ น้ำยาผสมจะถูก centrifugedที่ 12000 กรัม× 5 นาที ขั้นตอนด้านบนถูกละทิ้ง และขาวฝนดิสก์ถูกเก็บไว้ จากนั้น เพิ่ม และผสมดี μL 450 ของเมทานอลเม็ดโปรตีนได้รับ โดย centrifugation ที่ 12000 × g ใน 5 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส หลังจากair-drying เม็ดโปรตีนถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ (pH 8.0) ประกอบด้วย 7 โมล/Lยูเรีย (USB Corporation), 2 โมล/L thiourea (ซิก-Aldrich), 100 mmol/L DTT, 5% กลีเซอร(USB Corporation), และ 4% CHAPS (ซิก-Aldrich) โซลูชั่นของโปรตีนได้ถูกเก็บไว้ที่ −80 ° C จนถึงการวิเคราะห์ 2-DE กำหนดความเข้มข้นของโปรตีนโดยทดสอบแบรดฟอร์ด (ไบ-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แช่แข็งตัวอย่างเนื้อเยื่อตับจากสี่กลุ่มได้หดหายและ lysed
ในบัฟเฟอร์สลาย (pH 7.5) ประกอบไปด้วย 1% Triton X-100 (USB คอร์ปอเรชั่นประเทศสหรัฐอเมริกา),
25 mmol / L HEPES (Sigma-Aldrich) 150 mmol / L โซเดียมคลอไรด์ (UNIVAR, ประเทศสหรัฐอเมริกา), 1 mmol / L EDTA
เกลือโซเดียม (Sigma-Aldrich) 1 mmol / L dithiothreitol (DTT) (USB คอร์ปอเรชั่น) และ
1% ยับยั้งน้ำย่อยชุดค๊อกเทลที่สาม (Bio-Rad) ตัวอย่างสลายถูกเก็บไว้บนน้ำแข็ง
เป็นเวลา 40 นาทีและปั่นแล้วที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่ 4 ° C ในการลบ
เกลือฟุ่มเฟือยในสารสกัดจาก 150 ไมโครลิตรของ supernatants ถูกผสมกับ 600 ไมโครลิตร
ของเมทานอลโดย vortexing ทั้งหมด 150 ไมโครลิตรของคลอโรฟอร์มและ 450 ไมโครลิตรของน้ำบริสุทธิ์
ที่ถูกเพิ่มเข้ามาในทางกลับกัน; ตัวอย่างการ vortex ไปผสมให้เข้ากัน ผสมถูกหมุนเหวี่ยง
ที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาที ขั้นตอนบนถูกทิ้งและสีขาว
แผ่นฝนถูกเก็บไว้ จากนั้น 450 ไมโครลิตรของเมทานอลถูกบันทึกและผสมดี;
เม็ดโปรตีนที่ได้รับโดยการหมุนเหวี่ยงที่ 12,000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาทีที่ 4 ° C หลังจากที่
อากาศแห้งเม็ดโปรตีนถูก resuspended ในบัฟเฟอร์ (pH 8.0) ประกอบด้วย 7 โมล / ลิตร
ยูเรีย (USB คอร์ปอเรชั่น) 2 โมล / ลิตร thiourea (Sigma-Aldrich) 100 mmol / L DTT, กลีเซอรีน 5%
(USB คอร์ปอเรชั่น) และ 4% CHAPS (Sigma-Aldrich) วิธีการแก้ปัญหาที่เกิดโปรตีน
ที่ถูกเก็บไว้ที่ -80 ° C จนการวิเคราะห์ 2-DE ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนด
โดยการทดสอบแบรดฟอ (Bio-Rad)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตับแช่แข็งตัวอย่างเนื้อเยื่อจากสี่กลุ่มโฮโม lysed
และในการสลายบัฟเฟอร์ pH 7.5 ) ประกอบด้วย 1% Triton X-100 ( USB Corporation , USA ) ,
25 มิลลิโมล / ลิตรฮีเปส ( ซิกม่า Aldrich ) , 150 มิลลิโมล / ลิตรโซเดียมคลอไรด์ ( UNIVAR , USA ) , 1 มิลลิโมล / ลิตร
Disodium EDTA เกลือ ( ซิกม่า Aldrich ) 1 mmol / L บัตรแข็ง ( DTT ) ( USB และ บริษัท ) ,
1 % โปรตีนยับยั้ง ค็อกเทล ชุด 3 ( ไบโอ ราด )คุณภาพตัวอย่างถูกเก็บบนน้ำแข็ง
40 นาทีแล้ว ระดับที่ 9 ×กรัมเป็นเวลา 30 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศา เอา
เกลือฟุ่มเฟือยในการแยก , 150 μ L ของ supernatants ผสม 600 μ L
ของเมทานอลโดย vortexing . รวม 150 μชั้นคลอโรฟอร์มและ 450 μลิตรน้ำบริสุทธิ์มาก
ถูกเพิ่มในเปิด ; จำนวน vortexed ให้เข้ากัน ส่วนผสมมีไฟฟ้า
ที่ 12000 ×กรัมเป็นเวลา 5 นาที ขั้นตอนด้านบนถูกทิ้งและแผ่นตกตะกอนสีขาว
ถูกเก็บไว้ แล้ว 450 μ L ของเมทานอล ได้เพิ่มและผสมดี ;
โปรตีนเม็ดได้โดยการเหวี่ยงแยกที่ 9 × G สำหรับ 5 นาทีที่ 4 องศา หลังจาก
อากาศแห้งโปรตีนเม็ดเป็น resuspended ในบัฟเฟอร์ pH 8.0 ) ประกอบด้วย 7 mol / l
ยูเรีย ( USB Corporation ) 2 น้ำเชื่อมโมล / L ( ซิกม่า Aldrich ) , 100 มิลลิโมล / ลิตรส่วน5
% กลีเซอรอล ( USB Corporation ) และ 4 % Chaps ( ซิกม่า Aldrich ) ส่งผลให้โปรตีนโซลูชั่น
ถูกเก็บไว้ที่ 80 ° C −จนถึงการวิเคราะห์แผ่น . ระดับโปรตีน โดยตั้งใจ
( แบรดฟอร์ด ( BIO ราด )