2.2.3. SV-HFO cell morphology and s

2.2.3. SV-HFO cell morphology and spreading assay
The SV-HFO cell morphology and spreading were observed
using SEM. After 2, 5 and 7 days of SV-HFO culture on the coated
disks, the cells were fixed with 4% formaldehyde and 2% glutaraldehyde
in 0.1 M sodium cacodylate solution at 4 C for 1 h. The
samples were rinsed in 0.1 M sodium cacodylate solution and
dehydrated in a series of graded ethanol and then 100% tetramethylsilane.
All samples were gold coated and examined on a Jeol
6500F-D scanning electron microscope operated at 5–10 kV.
2.2.4. Fluorescence microscopy of actin cytoskeletal organization and
nucleus
After culturing for 48 h, the cells seeded on the coated disks
were washed with PBS and fixed for 15 min at room temperature
using 4% paraformaldehyde in PBS. After three rinses with PBS the
cells were permeabilized with PBS/Triton X-100 for 10 min and
stained with rhodamine–phalloidin (Invitrogen) (1:100 in PBS) for
20 min at room temperature and in the dark. The disks were further
rinsed three times with PBS and stained with a 40
,6-diamidino-2-
phenylindole (DAPI) solution (Invitrogen) (1:50000 in PBS) for
5 min. The actin cytoskeleton and cell nuclei were examined using
an epifluorescence microscope (Nikon Eclipse LV 100D-U, Japan).
2.3. In vitro antibacterial activity
The antibacterial activity of the Ag-bearing layers against MRSA
was assessed in vitro using the Japanese Industrial Standard JIS Z
2801:2000 [14] modified to better reproduce the scenario of an implant
infection during a primary surgery [9]. In short, a fresh liquid
culture of MRSA, strain AMC201, was prepared by adding 1–5 colonies
from a streak plate into 5 ml of trypticase soy broth (TSB).
The suspension was incubated at 37 C under rotation for 2 h
and subsequently diluted with TSB to an optical density (OD620)
of 0.03, corresponding to 107 colony-forming units (CFU) per ml.
Sterilized nitrocellulose filter disks were placed on a blood agar
plate and 20 ll of the diluted MRSA culture, containing 2 105
CFU, was pipetted onto the filters. The medium was absorbed by
the agar while the MRSA bacteria were retained on the filter.
20 ll of 1% TSB in 10 mM phosphate was pipetted centrally on
the surface of each titanium disk and an inoculated filter disk
was carefully placed on top, with the bacteria contacting the
coated surface. All disks with bacterial filters were placed individually
in petri dishes and incubated at 37 C for 24 h in a humid
atmosphere. After incubation, each disk and the corresponding filter
were placed in 5 ml of TSB, sonicated for 30 s and vortexed for
1 min to dislodge adherent bacteria. This procedure does not affect
bacterial viability. Seven ten-fold serial dilutions were made in a
96-well plate. Subsequently, triplicate 10 ll aliquots of the undiluted
suspension and of the seven dilutions were pipetted onto
blood agar plates. The blood agar plates were incubated overnight
at 37 C and the number of colonies was counted the following day.
All experiments were performed at least in triplicate.
2.4. Statistical analysis
Statistical analyses were performed using the one-way Anova
test and Tukey–Kramer method to make multiple unplanned comparisons
of means based on unequal sample sizes. In the Tukey–
Kramer method, the minimum significant difference (MSD) was
calculated for each pair of means. If the observed absolute difference
between a pair of means was greater than the MSD, the pair
of means was declared significantly different.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.3. HFO ญาสัณฐานวิทยาเซลล์และทดสอบประมาณญา-HFO สังเกตสัณฐานวิทยาของเซลล์และการแพร่กระจายใช้ SEM. หลังจากวันที่ 2, 5 และ 7 วัฒนธรรม HFO ญาในการเคลือบดิสก์ เซลล์ได้คง มี 4% glutaraldehyde ฟอร์มาลดีไฮด์และ 2%ใน 0.1 M โซเดียม cacodylate โซลูชันที่ 4 C สำหรับ 1 h.ตัวอย่างที่ rinsed ใน 0.1 M โซเดียม cacodylate โซลูชั่น และอบแห้งในชุดของเอทานอลที่มีการจัดระดับ และ tetramethylsilane 100%ตัวอย่างทั้งหมดมีทองเคลือบ และตรวจสอบในการ Jeolกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนการสแกน 6500F D ดำเนินการใน 5 – 10 kV2.2.4 การ fluorescence microscopy ขององค์กร cytoskeletal แอกติน และนิวเคลียสหลังจาก culturing สำหรับ 48 h เซลล์ seeded บนดิสก์เคลือบล้าง ด้วย PBS และถาวรสำหรับ 15 นาทีที่อุณหภูมิห้องใช้ paraformaldehyde 4% ใน PBS หลังจาก rinses สามด้วย PBSเซลล์ถูก permeabilized กับ PBS/ไตร ตั้น X-100 ใน 10 นาที และสีกับ rhodamine – phalloidin (Invitrogen) (1: 100 ใน PBS) สำหรับ20 นาที ที่อุณหภูมิห้อง และ ในมืด ดิสก์ถูกเพิ่มเติมสาม rinsed เวลา ด้วย PBS และสีกับ 40 แบบ, 6-diamidino-2 -phenylindole (DAPI) โซลูชั่น (Invitrogen) (1:50000 ใน PBS)5 นาที การแอกติน cytoskeleton และเซลล์แอลฟาถูกตรวจสอบโดยใช้การ epifluorescence กล้องจุลทรรศน์ (Nikon คราส LV 100D-U ญี่ปุ่น)2.3 การกิจกรรมเพาะในต้านเชื้อแบคทีเรียกิจกรรมต้านเชื้อแบคทีเรียของชั้นเรือง Ag กับ MRSAถูกประเมินในหลอดใช้ญี่ปุ่นอุตสาหกรรมมาตรฐาน JIS Z2801:2000 [14] ปรับเปลี่ยนเพื่อดีสร้างสถานการณ์การฟันติดเชื้อระหว่างผ่าตัดเป็นหลัก [9] ในระยะสั้น น้ำยาสดวัฒนธรรมของ MRSA ต้องใช้ AMC201 ถูกเตรียม โดยการเพิ่ม 1 – 5 อาณานิคมจากแผ่นริ้วใน 5 ml ของซุปถั่วเหลือง trypticase (TSB)ระบบกันสะเทือนถูก incubated ที่ 37 C ภายใต้หมุนสำหรับ 2 hและต่อมาแตกออกกับ TSB จะความหนาแน่นออปติคอล (OD620)ของ 0.03 ที่สอดคล้องกับหน่วยการ 107 เป็นโคโลนี (CFU) ต่อมิลลิลิตรใส่ดิสก์กรอง sterilized nitrocellulose ใน agar เลือดจานและ 20 จะวัฒนธรรม MRSA แตกออก ประกอบด้วย 2 105CFU ถูก pipetted ไปยังตัวกรอง สื่อที่ถูกดูดซึมโดยagar ในขณะที่แบคทีเรีย MRSA ได้เก็บไว้ในตัวกรอง20 จะ TSB ในฟอสเฟต 10 มม.ถูก pipetted ใจกลางเมืองบน% 1พื้นผิวของแต่ละดิสก์ไทเทเนียมและดิสก์การกรอง inoculatedถูกวางอย่างระมัดระวังบน กับแบคทีเรียที่ติดต่อพื้นผิวเคลือบ ดิสก์ทั้งหมดที่ มีตัวกรองแบคทีเรียถูกวางแยกกันในจาน petri และ incubated ที่ 37 C ใน 24 h ในชื้นบรรยากาศ หลังจากบ่ม แต่ละดิสก์ และตัวกรองที่เกี่ยวข้องไว้ใน 5 ml ของ TSB, sonicated s และ vortexed สำหรับ 301 นาทีเพื่อไล่ออกแบคทีเรียนฤมล ขั้นตอนนี้ไม่มีผลต่อเชื้อแบคทีเรียนี้ เจ็ด dilutions ten-fold ประจำการทำการแผ่น 96-ดี ในเวลาต่อมา triplicate 10 aliquots จะของที่หัวระงับ และของ dilutions เจ็ดได้ pipetted ไปagar เลือดแผ่น แผ่นเลือด agar ได้ incubated ค้างคืนที่ 37 C และของอาณานิคมที่นับวันต่อไปนี้มีดำเนินการทดลองทั้งหมดน้อยใน triplicate2.4. สถิติวิเคราะห์ดำเนินการวิเคราะห์ทางสถิติโดยใช้การวิเคราะห์ความแปรปรวนแบบทางเดียวทดสอบและวิธี Tukey – Kramer การเปรียบเทียบหลายที่ไม่ได้วางแผนหมายถึงตามขนาดตัวอย่างไม่เท่ากัน ใน Tukey –วิธี Kramer มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญต่ำสุด (เครื่องมือ)คำนวณสำหรับแต่ละคู่หมายถึง ถ้าสังเกตต่างกันแน่นอนระหว่างคู่หมายถึงได้มากกว่าเครื่องมือ การจับคู่หมายถึงถูกประกาศแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.3 SV-HFO สัณฐานวิทยาและการแพร่กระจายของเซลล์ทดสอบ
SV-HFO สัณฐานวิทยาและการแพร่กระจายของเซลล์ถูกตั้งข้อสังเกต
การใช้ SEM หลังจากที่ 2, 5 และ 7 วันต่อของวัฒนธรรม SV-HFO บนเคลือบ
ดิสก์เซลล์ได้รับการแก้ไขด้วยดีไฮด์ 4% และ 2% glutaraldehyde
ใน 0.1 M สารละลายโซเดียม cacodylate ที่ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ตัวอย่างที่ถูกล้างใน 0.1 M สารละลายโซเดียม cacodylate และ
แห้งในชุดของเอทานอลอย่างช้า ๆ แล้ว 100% tetramethylsilane.
ทุกตัวอย่างที่ถูกเคลือบทองและตรวจสอบใน Jeol
6500F-D กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบการดำเนินการที่ 5-10 kV.
2.2.4 . กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงขององค์กรโครงสร้างเซลล์และโปรตีน
นิวเคลียส
หลังจากเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 48 ชั่วโมงเซลล์เมล็ดบนดิสก์เคลือบ
ล้างถูกกับพีบีเอสและคงเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
โดยใช้ paraformaldehyde 4% ในพีบีเอส หลังจากสาม rinses กับพีบีเอส
เซลล์ถูก permeabilized กับพีบีเอส / Triton X-100 เป็นเวลา 10 นาทีและ
ย้อมด้วยสี rhodamine-phalloidin (Invitrogen) (1: 100 พีบีเอส) สำหรับ
20 นาทีที่อุณหภูมิห้องและในที่มืด ดิสก์ถูกเพิ่มเติม
ล้างสามครั้งกับพีบีเอสและย้อมด้วยสี 40
6 diamidino-2-
phenylindole (DAPI) วิธีการแก้ปัญหา (Invitrogen) (1: 50000 ในพีบีเอส) ใน
5 นาที โครงร่างของเซลล์และโปรตีนเซลล์นิวเคลียสมีการตรวจสอบโดยใช้
กล้องจุลทรรศน์ epifluorescence (Nikon คราส LV 100D-U, ญี่ปุ่น).
2.3 ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียในหลอดทดลอง
ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของชั้นแบก Ag กับ MRSA
ได้รับการประเมินในหลอดทดลองโดยใช้มาตรฐานอุตสาหกรรมญี่ปุ่น JIS Z
2801: 2000 [14] การแก้ไขให้ดีขึ้นทำซ้ำสถานการณ์ของรากเทียม
การติดเชื้อในระหว่างการผ่าตัดหลัก [9] ในระยะสั้นที่มีสภาพคล่องสด
วัฒนธรรมของเชื้อ MRSA AMC201 ความเครียดถูกจัดทำขึ้นโดยการเพิ่ม 1-5 อาณานิคม
จากแผ่นแนวเป็น 5 มิลลิลิตร trypticase น้ำซุปถั่วเหลือง (TSB).
ระงับถูกบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสภายใต้การหมุนหรือไม่? 2 ชั่วโมง
และ ต่อมาเจือจางกับ TSB จะหนาแน่นออปติคอล (OD620)
0.03 สอดคล้องกับ 107 หน่วยอาณานิคมขึ้นรูป (CFU) ต่อมล.
ฆ่าเชื้อ nitrocellulose แผ่นกรองถูกวางไว้บนอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือด
และ 20 แผ่น LL ของวัฒนธรรม MRSA เจือจางที่มี 2 105
CFU ถูกปิเปตลงบนตัวกรอง กลางถูกดูดกลืนโดย
วุ้นในขณะที่แบคทีเรีย MRSA ถูกเก็บไว้ในตัวกรอง.
20 LL 1% ใน TSB ฟอสเฟต 10 มิลลิปิเปตอยู่บน
พื้นผิวของแต่ละดิสก์ไทเทเนียมและดิสก์กรองเชื้อ
ถูกวางไว้อย่างรอบคอบด้านบนด้วย แบคทีเรียติดต่อ
พื้นผิวเคลือบ ดิสก์ทั้งหมดที่มีตัวกรองแบคทีเรียถูกวางไว้เป็นรายบุคคล
ในอาหารเลี้ยงเชื้อและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 24 ชั่วโมงในที่ชื้น
บรรยากาศ หลังจากการบ่มแต่ละดิสก์และตัวกรองที่สอดคล้องกัน
อยู่ใน 5 มิลลิลิตร TSB, sonicated 30 และสำหรับการ vortex
1 นาทีเพื่อขับไล่แบคทีเรียสานุศิษย์ ขั้นตอนนี้จะไม่ส่งผลกระทบต่อ
ความมีชีวิตของเชื้อแบคทีเรีย เซเว่นเจือจางอนุกรมสิบเท่าได้ทำใน
แผ่น 96 หลุม ต่อมาเพิ่มขึ้นสามเท่า 10 LL aliquots ของเจือปน
ระงับและเจ็ดถูกเจือจางปิเปตลงบน
จานอาหารเลี้ยงเชื้อในเลือด แผ่นวุ้นเลือดถูกบ่มค้างคืน
ที่ 37 C และจำนวนโคโลนีที่นับวันรุ่งขึ้น.
การทดลองทั้งหมดถูกดำเนินการอย่างน้อยในเพิ่มขึ้นสามเท่า.
2.4 การวิเคราะห์ทางสถิติ
การวิเคราะห์ทางสถิติได้ดำเนินการโดยใช้ทางเดียว Anova
และวิธีการทดสอบ Tukey-เครเมอที่จะทำให้การเปรียบเทียบที่ไม่ได้วางแผนหลาย
วิธีขึ้นอยู่กับขนาดตัวอย่างที่ไม่เท่ากัน ใน Tukey-
วิธีเครเมอแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญต่ำสุด (เอ็มเอส) ได้รับการ
คำนวณสำหรับคู่ของแต่ละวิธี หากสังเกตความแตกต่างแน่นอน
ระหว่างคู่ของวิธีการมากกว่าเอ็มเอสทั้งคู่
หมายถึงการประกาศที่แตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.3 . sv-hfo รูปร่างของเซลล์และการกระจาย (
sv-hfo รูปร่างของเซลล์และการแพร่กระจายพบ
โดยใช้ SEM หลังจาก 2 , 5 และ 7 วัน ของวัฒนธรรม sv-hfo บนดิสก์เคลือบ
, เซลล์ที่ถูกกำหนดด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ 4% และ 2% glutaraldehyde ใน 0.1M โซเดียม
จากนั้นนำสารละลายที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
จำนวนล้างใน 0.1 โมลาร์โซเดียม
จากนั้นนำสารละลายอบแห้งในชุดของระดับเอทานอลแล้ว 100% เตตร้าเมทิลไซเลน .
ตัวอย่างทองเคลือบ และตรวจสอบในจอล
6500f-d กล้องจุลทรรศน์ผ่าตัดที่ 5 – 10 kV .
2.2.4 . กล้องจุลทรรศน์ของ actin ไซโตร กเลตัลองค์กรและนิวเคลียส

หลังจากเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 48 ชั่วโมง เซลล์เมล็ดบนดิสก์
ถูกล้างด้วย pbs เคลือบและถาวรสำหรับ 15 นาทีที่
อุณหภูมิห้องด้วย 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ใน PBS หลังจากที่สาม rinses กับ PBS
เซลล์มี permeabilized กับ PBS / Triton X-100 เป็นเวลา 10 นาทีและ
เปื้อนจาก– phalloidin ( Invitrogen ) ( 1 : 100 ใน PBS )
20 นาทีที่อุณหภูมิห้องและในที่มืด ดิสก์ได้
ล้างสามครั้งกับ PBS และเปื้อนด้วย 40 6-diamidino-2
-
phenylindole ( dapi ) สารละลาย ( Invitrogen ) ( เนื่องใน PBS )
5 นาทีที่เซลล์นิวเคลียสมีการขาดตอน actin และใช้
เป็น epifluorescence กล้องจุลทรรศน์ ( Nikon คราส LV 100d-u , ญี่ปุ่น ) .
2.3 ในการศึกษาฤทธิ์ต้านเชื้อแบคทีเรีย ฤทธิ์ต้านแบคทีเรียของ AG

และแบริ่ง ชั้นกับเชื้อในหลอดทดลองโดยใช้มาตรฐานอุตสาหกรรมญี่ปุ่น JIS Z
2801:2000 [ 14 ] แก้ไขให้ดีขึ้น ทบทวนสถานการณ์ของ Implant
การติดเชื้อระหว่างการศัลยกรรม [ 9 ] ในสั้น , สดของเหลว
วัฒนธรรมของ MRSA amc201 สายพันธุ์ เตรียมเพิ่ม 1 – 5 อาณานิคม
จากแนวจานให้เป็น 5 มิลลิลิตร trypticase ซุปถั่วเหลือง ( TSB ) .
ถูกระงับบ่มที่ 37 องศาเซลเซียส ภายใต้การ  2 H
โดยเจือจางกับ TSB มีความหนาแน่นของแสง ( od620 )
0.03 ที่ 107 อาณานิคมสร้างหน่วย ( CFU ) ต่อมิลลิลิตร
ฆ่าเชื้อไนโตรกรองดิสก์อยู่ในเลือดวุ้น
จาน 20 จะเจือจางเชื้อวัฒนธรรม ประกอบด้วย 2 105
cfu , pipetted ไปยังตัวกรอง อาหารถูกดูดซึมโดย
agar ขณะที่ MRSA แบคทีเรียถูกเก็บไว้ในตัวกรอง .
20 จะ 1% TSB ในฟอสเฟต 10 มิลลิ pipetted จากส่วนกลางบนพื้นผิวของไทเทเนียม
แต่ละดิสก์และดิสก์
ใส่กรองถูกวางไว้อย่างรอบคอบด้านบนกับแบคทีเรียติดต่อ
ผิวเคลือบ ดิสก์ทั้งหมดด้วยตัวกรองแบคทีเรียอยู่ที
ในจานเพาะเลี้ยง และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 24 ชั่วโมง บรรยากาศชื้น

หลังจากบ่มแต่ละดิสก์และ
กรองที่สอดคล้องกันอยู่ใน 5 ml ของ TSB sonicated , 30 และ vortexed สำหรับ
1 นาทีเพื่อขับออกไปติดแบคทีเรีย ขั้นตอนนี้จะไม่มีผลต่อ
แบคทีเรีย 3 . เจ็ดสิบเท่าซีเรียลเจือจางได้ใน
96 ครับจาน ต่อมาทำสำเนาสามฉบับ 10 จะเฉยๆของการระงับเจือปน
และเจ็ดเจือจางเป็น pipetted บน
แผ่นวุ้นเลือด เลือดวุ้นแผ่นถูกบ่มค้างคืน
ที่ 37 องศาเซลเซียส และหมายเลขของอาณานิคมก็นับวันต่อไปนี้ .
ทั้งหมดทดลองอย่างน้อยทั้งสามใบ
2.4 .